线粒体H_(2)S供体AP39对心肌梗死大鼠心肌纤维化的影响及其与线粒体动力学的关系

[目的]已有研究表明H_(2)S可拮抗心肌纤维化,但线粒体靶向性H_(2)S能否拮抗心肌梗死后心肌纤维化,且是否与调控线粒体融合与分裂有关目前并不明确。为了探究这一关系,进行了该研究。[方法]在动物实验中予以异丙肾上腺素[ISO,50 mg/(kg·d)]腹腔注射构建SD大鼠心肌梗死模型,对各组大鼠行心电图检测,使用线粒体H_(2)S供体AP39[36μg/(kg·d)],腹腔注射连续处理SD大鼠4周,使用Masson染色检测心肌纤维化情况,使用Western blot检测相关蛋白表达情况。体外实验以氯化钴(CoCl_(2),800μmol/L)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤,AP39(100 nmol/L)处理H9c2细胞,使用DL-炔丙基甘氨酸(PAG,2 mmol/L)抑制内源性硫化氢合成酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE),并通过荧光探针检测心肌细胞活性氧(ROS)的水平。[结果]梗死大鼠心肌存在明显间质纤维化,胶原纤维大量堆积,且CSE、线粒体融合蛋白2(MFN2)表达下调,线粒体动力相关蛋白1(DRP1)表达增加,AP39干预后则可明显改善以上变化,而加入CSE抑制剂PAG则可逆转AP39的以上作用。同时在体外实验中发现,以CoCl_(2)诱导H9c2心肌细胞缺氧损伤时,细胞内ROS水平升高,MFN2表达下调,DRP1表达增加,AP39则可上调MFN2蛋白表达,抑制DRP1表达,降低心肌细胞ROS水平,而PAG则可逆转以上变化。[结论]线粒体靶向性H_(2)S供体AP39可以改善心肌梗死大鼠心肌纤维化,且可促进线粒体融合,抑制线粒体过度分裂。

AP39通过上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬改善尿毒症大鼠心肌纤维化

目的阐明AP39对尿毒症大鼠心肌纤维化的改善作用及机制。方法取40只SD雄性大鼠按随机数字表法分成4组(n=10):假手术组(Sham组)、尿毒症心肌病模型组(UCM组)、AP39干预组(UCM+AP39)组及AP39对照组。除Sham组及AP39对照组外,另外两组大鼠采用5/6肾切除的经典手术方法建立尿毒症心肌病大鼠模型。术后UCM+AP39组及AP39对照组大鼠予以AP39 (100 nmol/kg 1次/d)腹腔注射,Sham组及UCM组大鼠予以同等体积生理盐水腹腔注射。超声成像平台检测各组大鼠左心室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS)的变化,Masson染色观察各组大鼠心肌间质组织中胶原沉积量,免疫组化观察各组大鼠心肌组织中胶原蛋白Ⅲ(CollagenⅢ,ColⅢ)蛋白量的表达,Western blot检测PINK1、Parkin、Atg5、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1和P62(也被称为SQSTM1)等蛋白在各组大鼠心肌组织的表达水平。结果与Sham组相比,UCM组中大鼠的LVFS下降,心肌胶原沉积量明显增多(P<0.05),ColⅢ表达增多(P<0.05),心肌组织排列紊乱,并且PINK1、Parkin、Atg5、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1等蛋白的表达量明显下调(P<0.05),P62蛋白表达明显上调(P<0.05);而与UCM组相比,UCM+AP39组大鼠的LVFS升高,心肌胶原沉积量明显减少(P<0.05),ColⅢ表达减少(P<0.05),并且PINK1、Parkin、Atg5、LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin1蛋白的表达量明显上调,P62蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论 AP39能改善尿毒症大鼠心肌纤维化,其机制可能与上调PINK1/Parkin介导的线粒体自噬有关。