免疫染色法检测杆状病毒滴度方法的建立和优化

目的建立并优化杆状病毒滴度的检测方法。方法按照免疫染色法建立杆状病毒滴度检测方法,并对该方法的适用参数进行优化,通过筛选细胞接种浓度、病毒接种浓度、最适抗体稀释倍数,选择最佳反应条件优化检测方法,通过重复性、适用性实验验证该方法的准确性和特异性。结果细胞接种浓度选择0.65×10^(6)个/ml、病毒接种浓度选择104、抗体稀释倍数选择1∶500时检测结果最佳,应用最适检测参数进行重复验证,检测不同样品,仅杆状病毒组出现特异性病毒噬斑。结论建立并优化了重组杆状病毒滴度免疫染色方法,该方法具有良好的重复性、特异性和准确性,可用于生产中病毒滴度的检测。

肺腺癌病理鉴别诊断中胸腔积液细胞块切片免疫组化染色法的效能分析

目的 分析肺腺癌病理鉴别诊断中胸腔积液细胞块切片免疫组化染色法的效能。方法 纳入2022年1月至2023年10月院内诊治胸腔积液患者79例,采集胸腔积液细胞标本,分别行细胞涂片检查、细胞块切片免疫组化染色检查,观察诊断效能,包括肺腺癌免疫组化指标(BerEP4、TTF-1、CK17、CD15),间皮细胞免疫组化指标(Desmin、WT-1、CK5/6)。结果 本组79例患者中,综合病理诊断肺腺癌50例,间皮性肿瘤29例,细胞块切片检查的诊断灵敏度为96.00%,特异度为89.66%,准确率为93.67%高于细胞涂片检查方法的80.00%、62.07%、73.42%(P <0.05)。对肺腺癌诊断,细胞块切片与细胞涂片检查免疫组化染色法对Desmin、CK5/6、WT-1、CD15检出率无统计学意义(P> 0.05),细胞块切片对BerEP4、CK17检出率高于细胞涂片(P <0.05)。间皮肿瘤中,不同检测法对CK5/6、BerEP4、WT-1、CD15、CK17检出率无统计学意义(P> 0.05)。细胞块切片法对Desmin检出率高于细胞涂片法(P <0.05)。结论 通过胸腔积液检查进行肺腺癌与间皮肿瘤鉴别诊断中,与细胞涂片法对比,细胞块切片免疫组化染色法诊断效能更高,有助于提高临床诊断灵敏度与特异度,其中BerEP4、CK17对肺癌诊断价值较高,Desmin对间皮肿瘤诊断价值较高。

免疫荧光染色法在基层医院诊断肺结核中的应用价值分析

目的:评估肺活检病理组织免疫荧光染色法与TB-DNA-PCR检测法诊断肺结核的一致性,并与抗酸染色法比较,以得出免疫荧光染色法是基层医院可替代TB-DNA检测的快速、准确、经济的检测方法。方法:回顾性分析2022年1月至2022年12月长沙市中心医院收治的考虑肺结核并已做TB-DNA检测和抗酸染色检测的患者387例,分析免疫荧光染色法、抗酸染色法与TB-DNA检测的一致性,以TB-DNA结果为参照,比较其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值的差异,并且评估不同方法联合的诊断性能。结果:免疫荧光染色法与TB-DNA一致性的kappa值为0.746(0.681-0.811)。免疫荧光染色法的受试者工作曲线(ROC)下的面积(AUC)为0.889(95%CI=0.859-0.918)。免疫荧光染色法与抗酸染色法的灵敏度(81.6%vs 49.6%,P<0.001)、阴性预测值(77.4%vs 55.8%,P<0.001)的差异具有统计学意义。病理形态学或免疫荧光染色法联合的敏感度和阴性预测值分别为99.1%(95%CI=96.9%-99.9%)和97.8%(95%CI=92.4%-99.7%)。结论:免疫荧光染色法与TB-DNA法检测结果一致性高,病理形态学和免疫荧光染色法的联合对于肺结核诊断的阴性预测值高,是缺乏分子病理诊断能力的基层医院的潜在替代诊断方案。

免疫磁珠荧光染色法在痰液结核分枝杆菌检测中的应用

目的建立免疫磁珠(immunomagnetic beads,IMB)荧光染色法并评估其在临床痰液标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)检测的应用价值。方法利用IMB富集纯化结核分枝杆菌,利用自动染色机和自动显微镜智能软件扫描系统进行荧光染色及结果分析,建立结核分枝杆菌IMB荧光染色法。用实验室培养的标准菌株评估该方法的检测灵敏度和特异度。同时选取2021年5月~2022年2月在山东省第二人民医院就诊的145例疑似肺结核患者作为临床研究对象,取每例患者的痰液标本,选用萋-尼氏(Ziehl-Neelsen,Z-N)抗酸染色法、IMB荧光染色法和BACTEC 960系统培养法检测结核分枝杆菌感染情况,比较三种方法的阳性检出率、灵敏度、特异度和准确率,验证IMB荧光染色法在诊断结核分枝杆菌感染中的优势和临床应用价值。结果IMB荧光染色法的最低结核分枝杆菌检测量是30 CFU/ml,在标本含菌量≥30 CFU/ml时,该方法学的敏感度为100%;而在10 CFU/ml时则降到56%,该方法检测的特异度为100%。在利用临床标本检测中,IMB荧光染色法、Z-N抗酸染色法和培养法对于结核分枝杆菌的阳性检出率分别为73.10%,40.69%和78.62%;IMB荧光染色法的阳性率明显高于传统Z-N抗酸染色法的阳性率,差异具有统计学意义(χ^(2)=31.0599,P<0.05);略低于培养法,差异无统计学意义(χ^(2)=1.2052,P>0.05)。IMB荧光染色法在临床标本检测中的灵敏度、特异度和准确率分别为92.98%,100.00%和94.48%,明显高于Z-N抗酸染色法的灵敏度、特异度和准确率(47.37%,83.87%和55.17%),差异具有统计学意义(χ^(2)=56.6647,5.4386,P<0.05;59.4792,均P<0.05)。结论研究建立的IMB荧光染色法优于目前应用的其他染色法,可为结核病早期诊断提供新方法。

免疫金银染色法、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法检测华支睾吸虫病人血清中抗体的研究

用免疫金银染色法(IGSS)、斑点ELISA和斑点免疫金银染色法(Dot-IGSS)三种方法,同时检测40份华支睾吸虫病人血清,阳性率分别为100％、90％和95％,检测40份正常人血清,阴性率分别为100％、97.5％和97.5％,显示三种方法均有较高的敏感性和特异性。

广州血管圆线虫成虫冰冻切片免疫酶染色法检测血清抗体的实验研究

本文报告用广州管圆线虫成虫冰冻切片免疫酶染色法检测感染该虫的大鼠血清抗体的结果发现感染后2wk血清抗体阳性率为80％(28/35),感染后4wk为93.3％(5/9),对照健康鼠血清为阴性。

免疫金银染色法在蛋白质微阵列检测TORCH感染的实验研究

目的研制基于免疫金银染色法的TORCH检测蛋白质微阵列。方法将TORCH抗原点样于已经被琼脂糖膜修饰的玻片表面,与待测血清和胶体金标记的抗人IgM(μ链)孵育,用银增强微阵列信号,肉眼观察或普通的平板扫描仪记录结果。以不同浓度的纯化人IgM制备标准曲线。结果蛋白质微阵列的灰度质和IgM的浓度呈线性关系。60份待测血清与ELISA法同时检测,诊断符合率为93.3%。结论该法具有高信息通量、低成本、制备与检测快速简单的优点。

突触体素免疫电镜染色法

突触密度是大脑结构和功能的重要参数,传统的方法借助电子显微镜通过测量突触末端的小平面来评价突触密度,其优点是能够直观得观测到突触,但是这种技术不仅费时,需要特殊的组织处理和设备,而且易受人工现象的干扰.

彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。

免疫组化双重染色法在毛细淋巴管研究中的应用

目的 :评价免疫组化双重染色在毛细淋巴管研究中的作用。方法 :利用荆豆凝集素及IV型胶原单克隆抗体分别标记内层细胞和基底膜 ,对舌、颊等组织进行免疫组化双重染色。结果 :毛细淋巴管由于仅有一层内皮细胞构成而呈单层着色 ,而毛细血管则由于内皮细胞外还有一层完整的基底膜而呈双层着色。结论 :免疫组化双重染色法在毛细淋巴管的研究中是一种较为准确、客观的方法。

快速斑点免疫金染色法检测抗日本血吸虫抗体方法的建立与初步应用

目的 建立简便、经济和敏感、特异的快速免疫学诊断方法。方法 将日本血吸虫可溶性虫卵抗原点加于混合纤维素酯微孔滤膜 ,以快速斑点免疫金染色法 (F -Dot-IGS)检测日本血吸虫病患者血清抗体。结果 初步结果显示 ,共检测 5 5例日本血吸虫病患者血清抗体 ,阳性率 10 0 % ;检测 4 0例义务献血员血清均为阴性 ;5 0例肝吸虫病患者血清 ,1例出现阳性反应 ,交叉反应率为 2 0 % ;10例肺吸虫病人血清未见交叉反应。结论 本法快速 ,更为简便、经济 ,有较高的敏感性和特异性 ,适于基层。

微量快速斑点免疫金银染色法检测囊尾蚴病患者血清抗体的研究

目的 建立一种便捷的囊尾蚴病免疫学诊断方法。方法 在斑点免疫金银染色法 (Dot-IGSS)的基础上 ,待检血清标本原倍使用 ,缩短抗原抗体及与金标二抗的作用时间 ,建立微量快速斑点免疫金银染色法 (RMDot-IGSS)。结果 RMDot-IGSS法检测囊尾蚴病患者血清 96份 ,阳性率为 10 0 % ;检测健康献血员血清 5 0份 ,特异性为 96 % ;检测华支睾吸虫病患者、卫氏并殖吸虫病患者、日本血吸虫病患者血清各 10份 ,均未出现交叉反应 ;但棘球蚴病患者血清 10份有明显的交叉反应。以上结果与Dot-IGSS法检测结果比较 ,无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 RMDot-IGSS法的敏感性和特异性与Dot-IGSS相似 ,但操作简便快速 。

应用SP免疫组化染色法的体会

应用ＳＰ免疫组化染色法的体会任占平，郑绍光，陈尉麟（柳州市人民医院病理科广西５４５００１２地区人民医院病理科）链菌素亲生物素－过氧化酶连接法（ＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＣｏｎｊｕｇａｔｅｄＭｅｔｈｏｄ，ＳＰ法）是近年推广应用的一种新...

应用斑点免疫金染色法检测猪细小病毒病抗体的研究

本研究初步建立了斑点免疫金染色法 (Dot- IGS)检测 PPV抗体的方法。试验采用经蔗糖密度梯度离心制备的 PPV提纯抗原和 p H7.4、直径 5 0～ 6 3.5 mm的胶体金来检测 PPV抗体 ,取得了较为满意的效果 ;该法对猪细小病毒病抗体最小检测量为1.0 0 8× 10 - 1 0 g/ ml,灵敏性高 ;不同猪布鲁氏菌病、猪伪狂犬病、猪衣原体病、猪口蹄疫、猪瘟、猪弓形体病等的阳性血清出现交叉反应 ,特异性强且重复性好。另该法还具有胶体金制备容易、操作简单快捷等优点 ,是对 PPV抗体检测的重要方法。

改进免疫酶染色法EB病毒抗体检测实验的研究

目的:研究改进免疫酶染色法EB-VCA-IgA检测鼻咽癌EB病毒,以提高检测实验结果的稳定性和准确性。方法:通过培养靶细胞B95-8及在电子显微镜下观察EB病毒在细胞内外的变化状况,以指导降低操作说明书原配方中磷酸缓冲液的结晶盐的浓度。结果:滴加在靶细胞孔上的酶标抗体和染色液滴珠状的表面张力没有受到破坏,无以前原说明书配制的磷酸缓冲液试剂实验时溢出孔外现象,能在规定时间内完整地吸附在靶细胞孔表面,保证了抗原抗体能充分结合。结论:一定范围内较低的渗透压洗涤液,可以使EB病毒溢出B95-8细胞外,而宿主B95-8细胞却生长发育良好,细胞结构在电子显微镜下未见改变。并且改进后的免疫酶染色法EB-VCA-IgA检测鼻咽癌EB病毒的准确性和稳定性有很大的提高。

应用双重免疫组化染色法研究P53与细胞角蛋白在鼻咽癌中的表达

目的应用双重免疫组化染色法,研究P53与细胞角蛋白在鼻咽癌中的表达。方法50例鼻咽部低分化鳞癌组织,P53单克隆抗体,CK多克隆抗体,双重免疫组化染色。结果50例鼻咽部低分化鳞癌组织标本均有不同数量的双标记阳性细胞,即P53与CK同时表达。结论双重免疫组化染色法,可用于研究P53与细胞角蛋白在鼻咽癌中的表达。

免疫金银染色法诊断血吸虫病的研究

应用免疫金银染色法(IGSS)诊断血吸虫病,并与ELISA法比较。检测153例粪检阳性和76例健康人血清,其敏感性和特异性分别为96.08％和100％,显著高于ELISA的88.24％和94.70(p>0.05);与肝吸虫病的交叉反应两法均为4.76％;治疗后3年的49例血吸虫病人阳性率IGSS和ELISA分别为30.60％和28.57％,两法无显著差异(p>0.05)。表明IGSS的特异性高,敏感性强,制备金标记物方法简便,结果稳定。