水稻APC/C辅激活子CDH1同源基因OsCCS52B的表达研究(英文)

利用同源克隆的方法得到水稻的泛素连接酶APC/C辅助激活子CDH1的同源基因OsCCS52B.通过蛋白质序列分析发现OsCCS52B和苜蓿及拟南芥中的AtCCS52B(细胞周期转换开关基因)基因同源性最高;RNA原位杂交实验研究发现,OsCCS52B基因在减数分裂期间的表达存在一个高-低-高的波动变化.由于OsCCS52B表达变动的这个模式和减数分裂M-M(细胞分裂-细胞分裂)的转化过程中对受CDH1调控的细胞周期激酶CDKA活性的要求相一致,所以推测水稻的OsCCS52B基因参与了水稻减数分裂M-M转换期间对染色体复制的调控.同时,RNA原位杂交实验显示,OsCCS52B在核内复制旺盛的组织如根尖分生组织和穗下节的分生区和伸长区表达强烈,证明OsCCS52B可能参与了水稻的核内复制.

血清CRTC3、FABP4和apo CⅢ水平对妊娠期糖尿病患者不良妊娠结局的预测价值

目的:观察血清环磷酸腺苷反应元件结合蛋白调节转录辅激活因子3(CRTC3)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)和载脂蛋白CⅢ(apo CⅢ)水平对妊娠期糖尿病(GDM)患者妊娠结局的预测价值。方法:选择2021年1月至2022年6月在我院诊治的GDM患者118例,为GDM组。选择同期在我院就诊的正常妊娠孕妇75例,为对照组。比较两组孕妇血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平的差异;探讨GDM组患者血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平与血糖控制程度的关系;开展GDM患者不良妊娠结局影响因素的单因素和多因素分析,探讨发生不良妊娠结局的独立危险因素;探讨血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平在预测GDM患者妊娠结局的诊断效能。结果:GDM组患者血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平均高于对照组(P<0.01),并随着GDM控制程度提升而降低。妊娠结局不良组GDM患者年龄、孕前BMI水平、不良孕产史、血糖控制情况、TG、CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平与妊娠结局良好组相比,差异均有统计学意义(P<0.01),而两组患者产次、血清TC、HDL-C和LDL-C水平差异均无统计学意义(P>0.05)。多因素分析结果发现血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平升高是GDM患者发生不良妊娠结局的独立危险因素(P<0.05)。血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平在预测GDM患者发生不良妊娠结局具有较高的诊断效能,联合检测的灵敏度为92.6%,特异度为89.0%,AUC为0.956,均高于单个指标CRTC3(z=2.559,P=0.010)、apo CⅢ(z=3.212,P=0.001)和FABP4(z=2.687,P=0.007),而3个指标之间的AUC比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清CRTC3、apo CⅢ和FABP4水平参与了GDM的发生发展,是GDM患者发生不良妊娠结局的独立危险因素,联合检测有助于提高对不良妊娠结局的诊断效能。

PGC-1β和SREBP-1c在猪脂肪细胞分化过程中的相互作用

为研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1β(PGC-1β)与SREBP-1c在猪前体脂肪细胞分化过程中的表达规律及其相互作用,分析二者功能上的联系,采用Western印迹及细胞免疫荧光技术检测PGC-1β与SREBP-1c在猪脂肪细胞分化过程中的表达,shRNA干扰和免疫共沉淀技术分别探讨了PGC-1β对SREBP-1c的调节作用及2种蛋白质在体内的结合活性.结果显示,PGC-1β与SREBP-1c蛋白的表达均随猪脂肪细胞分化逐渐增加,且在分化细胞的核和胞浆中均有分布.干扰PGC-1β显著下调了SREBP-1c和脂肪细胞分化标记基因C/EBPα的表达(P<0.05),同时降低了细胞内甘油三酯的积累.免疫共沉淀证明,PGC-1β与SREBP-1c蛋白在猪脂肪细胞分化过程中存在结合作用.以上结果表明,PGC-1β能够促进猪脂肪细胞分化并对SREBP-1c有调节和结合作用,推测二者的结合可能与其对脂肪细胞的分化调节机制相关,将对PGC-1β调控脂肪细胞分化的功能和机理研究提供新途径.

7周不同强度耐力运动对大鼠骨骼肌线粒体相关信号PGC-1α、UCP3和COXⅣ表达的影响

目的:探讨不同强度长期耐力运动对反映骨骼肌线粒体生成和氧化功能的相关分子信号和生物酶的影响。实验方法:42只雄性SD大鼠分为安静组(C,n=6)、中等强度运动组(M,n=18)和大强度运动组(H,n=18)。运动负荷为中等强度组28 m/min,60 min/天、大强度组38 m/min,60 min/天,每周运动5天,休息2天,共7周。运动组动物分别在运动后即刻、6 h和24 h取材。荧光定量PCR检测PGC-1α、NRF1、COXIV、CS基因表达,Western blot测定线粒体UCP3蛋白表达。实验结果:(1)7周中等强度耐力运动后即刻、6h、24h,骨骼肌PGC-1αmRNA表达分别为安静组的362%(P<0.05)、657%(P<0.05)、116%,线粒体UCP3蛋白表达分别为安静组的111%、149%(P<0.05)、121%,COXⅣmRNA表达分别为安静组的223%(P<0.01)、410%(P<0.01)、124%,NRF1和CS mRNA表达分别是安静组的1071%、429%、199%(三者均P<0.01)和839%、210%、203%(三者均P<0.01);(2)大强度耐力运动后即刻、6h、24h,骨骼肌PGC-1αmRNA表达分别为安静组的274%(P<0.01)、130%(P<0.05)和68%(P<0.05),线粒体UCP3蛋白表达分别为安静组的87%、33%(P<0.01)和81%,COXⅣmRNA表达分别为安静组的29%(P<0.01)、60%(P<0.05)和55%(P<0.05),NRF1和CS mRNA表达分别是安静组的235%(P<0.01)、362%(P<0.01)、85%和289%(P<0.01)、162%(P<0.05)、108%。结论:(1)7周中等强度耐力运动增加骨骼肌线粒体生物合成;(2)7周大强度耐力运动使骨骼肌PGC-1α、COXⅣmRNA和UCP3蛋白表达出现下降,其中尤以COXⅣ和UCP3下降明显,这可能是骨骼肌线粒体生成受损的信号。

p38介导油酸对小鼠c2c12细胞PGC-1α表达的影响

目的研究油酸(OA)对小鼠c2c12细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在其中的作用。方法以不同浓度油酸及p38抑制剂SB203580(SB)分别处理c2c12细胞,逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测PGC-1αmRNA表达,WesternBlot检测PGC-1α蛋白表达。结果油酸处理组PGC-lαmRNA及蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);OA+SB组PGC-1α表达减低(P<0.05)。结论油酸能促进c2c12细胞PGC-1αmRNA转录和蛋白的表达,该作用可能与p38 MAPK信号通路有关。

siRNA下调RYR1表达对小鼠成肌细胞中线粒体的影响

目的:探讨雷诺丁受体1(RYR1)表达下调对小鼠成肌细胞C2C12中线粒体的影响及其发生机制。方法:采用小干扰RNA(siRNA)敲减C2C12细胞的RYR1表达,应用透射电镜对线粒体进行体视学分析,观察细胞内线粒体数目和形态学的改变,应用real-time PCR和Western blot方法检测线粒体融合蛋白2(Mfn2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的mRNA及蛋白水平的改变。结果:RYR1敲减(KD)组RYR1的mRNA水平显著降低(P<0.01)。阴性对照(NC)组及空白对照(BC)组线粒体维持长管状结构,而KD组线粒体呈碎片化改变。与NC组相比,KD组的线粒体数目呈增加趋势(差异无统计学显著性),线粒体面积和周长显著减少(P<0.05)。KD组的Mfn2在mRNA和蛋白水平均显著降低(P<0.01),而PGC-1α在mRNA水平显著降低(P<0.01),在蛋白水平未见明显差异;ERK1/2在mRNA水平和蛋白水平的差异均无统计学显著性,也未检测到磷酸化ERK1/2的水平变化。结论:敲减RYR1表达可以导致C2C12细胞线粒体的形态改变,Mfn2表达下调可能参与其发生,而PGC-1α及ERK1/2相关的氧化应激通路可能在其中不发挥主要作用。

益心泰总黄酮对H9c2心肌细胞代谢的影响

目的 探究益心泰总黄酮对H9c2心肌细胞代谢的影响及其潜在机制。方法 用去甲肾上腺素(NE)诱导H9c2细胞损伤模型。实验设立空白组、模型组、对照组和低、中、高剂量实验组。低、中、高剂量实验组分别给予350μmol·L^(-1)NE和20,50和100μg·mL^(-1)益心泰总黄酮处置;对照组给予350μmol·L^(-1)NE和400μmol·L^(-1)盐酸曲美他嗪处置;模型组给予350μmol·L^(-1)NE处置;空白组给予DMEM处置。用CCK-8法检测H9c2心肌细胞存活率;用酶联免疫吸附试验法检测细胞外液中腺苷三磷酸(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量;用Western blot法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅活化因子1α(PGC-1α)的表达水平。结果 中、高剂量实验组和对照组、模型组的心肌细胞存活率分别为(81.50±2.72)%,(75.71±1.39)%,(91.45±1.51)%和(68.27±2.20)%;ATP含量分别为(1.18±0.04),(1.32±0.10),(1.41±0.15)和(1.06±0.06)μmol;FFA含量分别为(0.53±0.06),(0.48±0.04),(0.45±0.03)和(0.67±0.07)μmol,高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。低、高剂量实验组和对照组、模型组的PPARα蛋白相对表达水平分别为1.11±0.02,1.01±0.02,0.98±0.01和1.20±0.02;PGC-1α蛋白相对表达水平分别为0.38±0.01,0.49±0.01,0.45±0.02和0.37±0.01,低、高剂量实验组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 益心泰总黄酮对NE诱导的H9c2心肌细胞损伤有保护作用,改善细胞心肌损伤的能量代谢,其作用机制可能与抑制PPARα蛋白的表达、增强PGC-1α蛋白的表达有关。