基于DNAzyme辅助信号放大的荧光检测APE1

利用脱氧核酶(DNAzyme)辅助放大荧光信号,发展了一种简便快速无嘌呤/无嘧啶内切酶(APE1)的高灵敏度检测策略。验证了实验可行性,对反应时间、反应温度进行了优化,在最优条件下对目标物APE1进行了检测,检测限为3.0×10^(-4)U·mL^(-1),并证明了本实验具有良好的选择性。

不同TNM分期结直肠癌患者血清MMP7、APE1及CA-242表达差异及其与预后的相关性研究

目的分析不同TNM分期结直肠癌患者血清基质金属蛋白酶7(MMP7)、脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)、糖类抗原242(CA-242)表达差异及其与预后的相关性。方法回顾性选取2018年4月至2022年4月延安大学附属医院收治的100例结直肠癌患者作为研究对象,根据TNM分期将患者分为Ⅰ~Ⅱ期组(n=42)、Ⅲ~Ⅳ期组(n=58);另将同期收治的50例结直肠良性增生患者纳入对照组。随访1年记录结直肠癌患者的生存率,将存活患者纳入预后良好组(n=83),另将死亡患者纳入预后不良组(n=17)。检测所有患者的血清MMP7、APE1、CA-242水平。建立多因素Logistic模型分析TNM分期结直肠癌预后的影响因素,并分析血清MMP7、APE1、CA-242与不同TNM分期结直肠癌患者预后的相关性(双变量Spearman相关性法检验)及其预后预测价值。结果Ⅰ~Ⅱ期患者血清MMP7、APE1、CA-242水平分别为(32.54±3.65)μg/L、(0.39±0.04)ng/mL、(22.54±3.54)U/mL,Ⅲ~Ⅳ期患者血清MMP7、APE1、CA-242水平分别为(42.84±3.84)μg/L、(0.54±0.05)ng/mL、(42.16±4.35)U/mL,均高于对照组[(20.65±2.45)μg/L、(0.21±0.02)ng/mL、(8.24±1.12)U/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。预后不良组患者血清MMP7、APE1、CA-242水平分别为(41.58±3.58)μg/L、(0.52±0.04)ng/mL、(40.25±4.12)U/mL,均高于预后良好组[(33.24±3.41)μg/L、(0.41±0.04)ng/mL、(23.46±3.61)U/mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic分析结果显示,TNM分期、MMP7、APE1、CA-242均为影响结直肠癌预后的独立危险因素(P<0.05)。血清MMP7、APE1、CA-242与Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期预后不良均呈正相关(P<0.05)。血清MMP7、APE1、CA-242与MMP7+APE1+CA-242肺癌化疗预后预测中的曲线下面积均大于0.75。结论血清MMP7、APE1及CA-242在结直肠癌中均呈高表达,且与病情进展及其预后存在一定关联,可为治疗方案的指导和预后的预测提供科学的参考依据。

内源性APE1辅助的DNA纳米探针用于miR-21的原位成像检测

以miRNA作为靶标对肿瘤细胞进行原位成像有利于提高肿瘤疾病诊断和检测的准确性。然而,受限于细胞内miRNA的低丰度以及胞内复杂的生理环境,传统核酸探针一对一信号输出模式的检测灵敏度不高且易于造成假阳性信号,这使得其在原位检测方面的性能大打折扣。对此,开发了一种以金纳米粒子为载体,miR-21和APE1共同激活的walker型DNA纳米探针,并成功实现了针对肿瘤细胞的高灵敏、特异性原位成像,且有效降低了假阳性信号。

晚期肺癌血清Ape1/Ref-1表达及其对阿帕替尼联合三线化疗疗效的预测价值

目的探讨晚期肺癌血清Ape1/Ref-1的表达及其对阿帕替尼联合三线化疗疗效的预测价值。方法收集70例晚期肺癌患者病例资料。采用随机数字表法进行分组,即对照组和研究组,均35例。对照组采用常规三线化疗治疗。研究组在对照组的基础上再予以阿帕替尼药物治疗。结果晚期肺癌组织Ape1/Ref-1蛋白阳性表达(91.43%)显著高于癌旁组织(χ^(2)=33.600,P=0.000)。化疗前,两组晚期肺癌患者Ape1/Ref-1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05);化疗后,两组Ape1/Ref-1蛋白相对表达量均明显低于化疗前,进一步组间比较,研究组Ape1/Ref-1蛋白相对表达量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Ape1/Ref-1阴性组生存率(87.50%)显著高于Ape1/Ref-1阳性组(χ^(2)=3.949,P=0.047),研究组累积生存率(91.43%)显著高于对照组(χ^(2)=10.096,P=0.001)。结论Ape1/Ref-1在晚期肺癌组织中呈现高表达,其表达越低,阿帕替尼联合三线化疗疗效越好。

观众角色由“被动操作工”向“自主探究者”的转变——美国探索馆APE项目的研究与启示

近年来,伴随教育改革,科学中心作为非正式教育的重要场所,逐渐将科学探究作为科学学习的核心。在改革浪潮之下,一些传统的展品理念已无法满足观众从“被动操作工”到“自主探究者”角色转变的需求,同时场馆也需要在展品创作上获得更多自由。本文选取探索馆的一个展品研究项目作为案例,借助对具体展品的观众研究和设计特征分析,详述以转变观众角色为目标的展品设计要点和策略,希望为国内科技馆建设及展品设计研究提供启示与参考。

“APE”背景下的企业人员招聘困局与获才对策

随着中国社会正式迈入“新时代新征程”,企业人员招聘领域凸显出“过度觉醒(Awaken)”、“重保护(Protect)”、“强影响(Effect)”等为主要特征的“APE”新特点,给企业人才招聘带来了“成本高、难度升、风险大”的新困局,这就需要新时代新征程的HR从“招聘”到“获才”,明确获才新意义、更新获才新理念、打造获才新系统、提升获才新技能、彰显获才新价值,努力为企业匹配最合适人才,努力让人才更有价值、更能创造价值。

血清APE1自身抗体在结直肠癌诊断中的价值

目的探讨血清中APE1自身抗体(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1 autoantibodies,APE1-AAbs)在结直肠癌中的诊断价值。方法利用ELISA检测150例结直肠癌患者和170例健康体检人员(对照组)血清APE1-AAbs水平,采用蛋白芯片法检测相应的CEA、CA199和CA242浓度。运用Logistic回归和ROC曲线分析方法,将APE1-AAbs与CEA、CA199及CA242联合分析。结果 150例结直肠患者血清APE1-AAbs中位水平为2.697,显著高于对照组(P<0.001)。绘制ROC曲线,其AUC为0.797,灵敏度为62.67%,特异性为85.29%。APE1-AAbs分别与CEA、CA199及CA242联合后,AUC、诊断灵敏度和准确性均有所升高。结论血清APE1-AAbs对结直肠癌有辅助诊断价值,与临床上常用的结直肠癌肿瘤标志物联用可提高结直肠癌的诊出率。

骨肉瘤中APE1的表达及其与血管生成的关系

目的 探讨APE1在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系。方法 采用免疫组化S P法检测10例正常骨、10例良性骨瘤和60例骨肉瘤组织中APE1、CD3 4和FⅧ Rag等蛋白表达,并根据CD3 4和FⅧ Rag染色结果计数微血管密度。结果 APE1蛋白表达主要定位于肿瘤细胞的胞核,骨肉瘤中APE1显著高于正常骨(P <0 0 5 ) ,60例骨肉瘤中43例(72 % )呈高表达,17例呈低表达,APE1强表达组中的MVD显著高于弱表达组(P <0 0 1)。结论 APE1在骨肉瘤中过度表达与骨肉瘤分化以及微血管密度密切相关,有可能作为骨肉瘤抗血管生成治疗中一个新的靶向分子。

APE1在非小细胞肺癌中的表达特点及其与预后的关系

目的探讨脱嘌呤/嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)在非小细胞肺癌中的表达特点及其与患者预后的关系。方法应用免疫组化方法检测103例非小细胞肺癌组织和36例正常肺组织中APE1的表达情况,按染色强度将其分为低表达组和高表达组,并分析APE1在非小细胞肺癌表达情况与临床病理及患者预后的关系。结果正常肺组织及肺癌组织均有APE1表达,但正常肺组织以细胞核表达为主,肺癌组织主要在细胞质表达;APE1的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移及组织类型无明显关系;生存分析显示APE1的表达强弱与患者的预后明显相关。结论APE1蛋白表达增强与定位的改变与肺癌发生及发展有关,APE1基因表达增强可能是非小细胞肺癌患者预后不良的指标之一。

多发性骨髓瘤患者APE1蛋白表达的临床意义

目的 检测多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)患者脱嘌呤 脱嘧啶核酸内切酶(apurinic apyrimidinicendonu clease,APE1)基因表达,探讨其临床意义。方法 采用免疫细胞化学、Westernblot分析在MM细胞系KM3、32例MM患者 和10例正常自愿者骨髓标本中检测APE1蛋白表达及定位,并且通过图像分析系统计算其积分光密度值。结果 在阳性 对照的MM细胞系KM3中胞核、胞核 胞浆、胞浆均有APE1表达,其中尤以胞核明显。APE1胞浆阳性分度在正常对照组、 初治组、复发或难治组间依次增高(P<0.01,0.05)。结论 APE1蛋白表达强度与MM疗效有关,APE1基因表达增强可能 是MM患者预后不良的指标之一。

电离辐射诱导骨肉瘤细胞DNA损伤修复蛋白APE1线粒体定位研究

目的探讨电离辐射诱导骨肉瘤细胞脱嘌呤／脱嘧啶核酸内切酶（apurinic／aprimidinic endonuclease 1，APE1）线粒体定位表达情况，为进一步研究线粒体DNA修复在骨肉瘤放射治疗抵抗中的作用提供依据。方法应用激光共聚焦显微术和Western blot观察正常对照组和12Gy X线照射后不同时相点骨肉瘤细胞株HOS细胞中APE1线粒体定位情况。结果对照组、12Gy X射线处理后1、2、3h APE1和线粒体有共定位现象，APE1细细胞质／细胞核荧光强度比值分别为：（0．78±0．04）、（1．04±0．03）、（1．14±0．05）、（1．80±0．38）。Western blot亦证实线粒体内APE1蛋白表达增高。结论放射后早期APE1向细胞质线粒体移位，从1～3h逐渐增高，提示APE1可能在电离辐射后骨肉瘤细胞线粒体DNA损伤修复中发挥重要作用。

pSilence APE1对骨肉瘤诱导血管内皮细胞迁徙抑制作用的实验研究

目的观察APE1siRNA表达载体pSilenceAPE1对骨肉瘤诱导血管内皮细胞迁徙的抑制作用及其与ES的协同作用。方法pSilenceAPE1转染骨肉瘤细胞9901和HOS;骨肉瘤和内皮细胞Transwell双室培养,计数迁移到内室膜背面的内皮细胞数,观察pSilenceAPE1及其联合ES对骨肉瘤细胞诱导内皮细胞迁徙的影响。结果ES低剂量组(350ng/ml)和高剂量组(700ng/ml)与正常对照组有明显差异(P<0·01)。2μgpSilenceAPE1和3μgpSilenceAPE1较单独脂质体组有显著性差异(P<0·01)。2μgpSilenceAPE1和ES低剂量(350ng/ml)联合组抑制内皮细胞迁徙的作用显著高于单独对照组(P<0·01)。结论pSilenceAPE1可显著抑制骨肉瘤细胞诱导的血管内皮细胞迁徙,并且可能与ES具有协同抗血管生成的作用。

卵巢癌组织中APE1、VEGF的表达和MVD检测的临床意义

目的:研究脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和微血管密度(microvessel density,MVD)在上皮性卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用免疫组织化学SP法检测80例上皮性卵巢癌组织中APE1、VEGF表达和MVD计数情况,统计分析APE1和VEGF、MVD在上皮性卵巢癌组织中的相关性。结果:APE1在卵巢癌组织中表达阳性率为81.3%,VEGF在卵巢癌组织中表达阳性率为72.5%。APE1、VEGF表达均与卵巢癌FIGO分期、细胞分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05)。MVD计数在中晚期(Ⅲ期+Ⅳ期)、低分化、淋巴结转移阳性的卵巢癌组织中显著高于早期(Ⅰ期+Ⅱ期)、高/中分化、淋巴结转移阴性的卵巢癌组织(P<0.05)。卵巢癌组织中APE1和VEGF表达、MVD计数之间均为正相关(P=0.000)。和APE1表达阴性的卵巢癌组织相比,APE1表达阳性的卵巢癌组织中MVD计数显著升高,具有统计学意义(37.2±12.4 vs 14.3±5.5,t=5.682,P=0.000)。结论:APE1可能通过促进卵巢癌组织中新生血管形成在卵巢癌发生发展中发挥重要作用。

pSilence APE1联合中子射线治疗骨肉瘤的体外实验研究

目的应用双功能基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)小干扰RNA(siRNA)表达载体pSilence APE1“敲低”人骨肉瘤HOS细胞APE1的表达,观察pSilence APE1联合中子放射治疗对HOS细胞生长抑制的协同作用,并探讨其可能机制。方法用脂质体将pSilence APE1质粒导入HOS细胞,同时给予不同剂量的锎-252中子射线照射,采用克隆形成分析法测算平均致死剂量(D0)、准域剂量(Dq)值,彗星分析法检测照射后细胞的DNA损伤情况,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果克隆形成分析显示对照组与pSilence APE1转染组HOS细胞经锎-252中子射线照射后的D0值分别为2·80和1·89,Dq值分别为2·66和2·00。分别以2、5、10Gy锎-252中子射线照射对照组与pSilence APE1转染组HOS细胞后,碱性彗星尾力矩分别为6·664±0·648、20·322±1·433、33·909±1·245和7·997±0·542、25·238±1·185、39·191±1·052(P<0·01);细胞凋亡率分别为4·00%、5·91%、9·63%和5·68%、7·55%、13·51%(P<0·05)。结论pSilenceAPE1能显著提高HOS细胞对中子射线的敏感性,促进DNA损伤和细胞凋亡。pSilence APE1基因联合中子放疗可能成为今后骨肉瘤治疗的新方法。

血清APE1蛋白在结直肠癌临床诊断中的作用及意义

目的探讨结直肠癌患者血清APE1蛋白的表达及其在临床诊断中的价值。方法利用ELISA法检测本院2010年1月至2015年9月肿瘤中心收治的202例结直肠癌患者和健康体检中心242例健康对照人群血清APE1蛋白的表达水平,通过免疫组化确定相应患者肿瘤组织APE1蛋白的表达特征,同时采用C-12肿瘤蛋白芯片试剂盒检测上述人群CEA的表达水平。分析血清APE1蛋白与肿瘤组织APE1蛋白表达水平及年龄、性别、分期等临床指标的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)评估血清APE1蛋白及CEA在结直肠癌诊断中的应用价值。结果 202例结直肠癌患者中位血清APE1蛋白浓度为0.331(0.007~4.359)ng/mL,显著高于对照组0.091(0~1.374)ng/mL(P<0.01)。Spearman相关分析显示血清APE1蛋白水平与肿瘤组织中APE1蛋白表达呈正相关(r=0.331,P=0.025),而与年龄、性别、分期等指标不相关。ROC曲线显示血清APE1蛋白的AUC为0.799(95%CI=0.756~0.843),灵敏度为76.20%,特异性为76.40%,血清CEA的AUC为0.736(95%CI=0.687~0.785),其灵敏度为51.00%,特异性为99.60%。血清APE1蛋白与CEA联合后其AUC为0.857(95%CI=0.819~0.896),灵敏度和特异性分别为72.30%和91.30%。结论结直肠癌患者血清APE1蛋白水平与肿瘤组织APE1表达呈正相关且较健康对照人群显著增高。血清APE1蛋白可与CEA联合作为结直肠癌辅助诊断的血清学标志物。

APE1乙酰化调节电离辐射诱导的HeLa细胞自噬

目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶∕氧化还原因子(apurinic/aprimidinic endonuclease/redox factor-1,APE1/Ref-1)乙酰化对电离辐射诱导He La细胞自噬的调节作用。方法给予Elekta precise直线加速器处理He La细胞及子系细胞APE1WT和APE1K6R/K7R,应用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)的方法检测APE1乙酰化修饰及Beclin1/Bcl2的结合,流式细胞仪检测细胞自噬的水平,免疫荧光激光共聚焦检测LC3的聚集,Western blot检测APE1、LC3和p62的表达。结果 He La细胞APE1乙酰化水平随着照射剂量的增加和照射后时间的延长而逐渐升高(P<0.05)。He La细胞LC3Ⅱ的表达与照射剂量呈正相关,而与p62呈负相关(P<0.05);电离辐射促进细胞的自噬水平和LC3的聚集。电离辐射后,LC3Ⅱ上调;与对照组APE1WT相比,APE1K6R/K7R细胞Beclin1/Bcl2结合增强,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低,p62表达上调(P<0.05)。结论 APE1乙酰化通过Beclin1/Bcl2途径调节电离辐射诱导的He La细胞自噬。

姜黄素对缺血/再灌注大鼠APE/Ref-1表达及细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对大鼠全脑缺血/再灌注损伤后海马神经元凋亡与DNA修复蛋白APE/Ref-1表达的影响,探讨其对脑缺血损伤后的保护作用。方法将144只雄性SD大鼠随机平均分为假手术组(SO组)、缺血/再灌注组(IR组)和姜黄素干预组(CU组)各48只。建立大鼠全脑缺血/再灌注模型,CU组于再灌注后即刻经腹腔注射姜黄素。分别于再灌注后2、6、12、24、48、72 h处死大鼠,提取大鼠脑组织。原位末端标记法检测海马CA1区的细胞凋亡情况;免疫组化SABC法检测APE/Ref-1的表达。结果 SO组神经元细胞凋亡较少,IR组凋亡的神经元细胞于再灌注6 h开始增多,48 h细胞凋亡率达到最高。与SO组比较,IR组细胞凋亡率增高(P<0.01)。CU组在再灌注6 h后的各时点神经元细胞凋亡较IR组少(P均<0.01)。SO组APE/Ref-1阳性细胞在各时点较多;IR组于再灌注后2 h APE/Ref-1阳性细胞开始出现明显减少,一直持续至72 h,与SO组比较有统计学差异(P均<0.01);CU组APE/Ref-1阳性细胞率各时点与IR组比较均有统计学差异(P均<0.01)。结论姜黄素发挥脑保护作用的机制可能与减缓DNA修复蛋白APE/Ref-1表达的下降和阻止脑缺血/再灌注损伤区神经元细胞的凋亡有关。

红景天苷对脑缺血再灌注大鼠脑神经元APE/Ref-1的影响

目的研究红景天苷对局灶性脑缺血/再灌注(I/R)损伤后神经可塑性和DNA修复酶APE/Ref表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为假手术组,I/R模型组和红景天苷干预组,采用线栓法制造大鼠大脑局灶缺血(2h)/再灌注模型,于灌注后0.25、1、3、7d4个时间点断头取脑,HE和尼氏染色观察神经元形态学变化,免疫组化方法检测无嘌呤无嘧啶位点/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)的表达。结果与其他两组比较,红景天苷组梗死灶范围明显减小,梗死灶周围皮质神经元损伤明显减轻(P<0.05);APE/Ref-1阳性细胞数表达显著增高(P<0.05)。结论红景天可以易化脑I/R损伤后中枢神经系统神经再生和修复的可塑性,抑制APE/Ref-1降低可能是其在I/R早期发挥神经保护作用的一条重要途径。

APE/Ref-1在肿瘤治疗中的应用前景

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)是碱基切除修复途径的关键酶,主要负责修复氧化剂和烷化剂造成的DNA损伤。同时APE/Ref-1还能通过氧化还原功能保持多种转录因子处于激活的还原状态,并通过调控其DNA结合活性参与肿瘤发生发展,这些因子包括AP-1(Fos/Jun)、NF-κB、HIF-1α、p53等。本文综合近年来国外的众多文献,从APE/Ref-1的结构功能入手,回顾总结APE/Ref-1与肿瘤之间相关性及其临床研究进展,提示APE/Ref-1是非常有潜力的肿瘤治疗靶点,在临床应用中有良好的发展前景。

PC12细胞APE/ref-1cDNA的克隆和表达

APE Ref 1是双功能核蛋白 ,它既能在碱基切除修复过程中切除脱嘌呤 脱嘌啶位点 ,又能促进包括AP 1、Myb和NF κB等受氧化还原调节的转录因子对DNA的结合 .从PC12细胞中抽提总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出APE ref 1cDNA并克隆到pQE3 1表达质粒上的BamHⅠ和PstⅠ位点间 .经测序表明 ,PC12细胞的APE ref 1cDNA以正确的阅读框架重组进入表达质粒 ,表达重组质粒pQE3 1 APE在宿主菌BL2 1中得到稳定表达 .SDS PAGE鉴定表明 ,带 6个组氨酸的融合蛋白分子量为 3 8kD ,并经Ni NTA琼脂糖亲和纯化得到电泳纯融合蛋白 .Western印迹证明重组蛋白为APE ref 1融合蛋白 .