APETx2对感染后肠易激综合征小鼠内脏敏感性的作用及机制

目的探讨酸敏感离子通道3特异性拮抗剂(APETx2)对感染后肠易激综合征(PI-IBS)小鼠内脏敏感性的调控作用及其机制。方法采用旋毛虫感染NIH小鼠建立PI-IBS模型。通过测量首次排黑便的时间和6 h内收集的粪便颗粒数评估胃肠道运输功能;腹壁回撤反射(AWR)评分评估小鼠内脏敏感性;免疫组织化学法检测结肠组织中降钙素基因相关肽(CGRP)蛋白表达;通过实时定量PCR(qRT-PCR)法检测结肠组织中脑源性神经营养因子(BDNF)、CGRP mRNA表达。蛋白质印迹法(Western blot)检测脑组织中酸敏感离子通道3(ASIC3)、CGRP、瞬时受体电位香草素1(TRPV1)蛋白表达。结果与对照组比较,PI-IBS组首次排黑便时间显著降低,6 h内的粪便颗粒数,AWR评分均显著升高,结肠组织中CGRP蛋白表达显著升高,BDNF、CGRP mRNA显著升高,脑组织中CGRP、ASIC3、TRPV1的蛋白表达显著升高;与PI-IBS组比较,APETx2组首次排黑便时间显著延长,6 h内的粪便颗粒数,AWR评分均显著降低,结肠组织中CGRP蛋白表达显著降低,BDNF、CGRP mRNA表达显著降低,脑组织中CGRP、ASIC3、TRPV1的蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论APETx2可通过下调BDNF、CGRP、ASIC3、TRPV1的表达,减轻PI-IBS小鼠的内脏敏感性并调节胃肠道运动。APETx2可能为治疗IBS提供一个新的治疗选择。

APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节酸敏感离子通道3表达的影响

目的:观察酸敏感离子通道3(ASIC3)特异性拮抗剂APETx2对应激性胃黏膜损伤大鼠脊髓背根神经节(DRG)神经元上ASIC3表达的影响。方法:24只雄性Wistar大鼠随机等分为对照组(NC组)、应激模型组(WIRS组)及APETx2处理组(AT组,腹腔内注射APETx2 25μg/kg)。采用浸水束缚应激(WIRS)法复制应激性胃黏膜损伤模型,于应激6 h后留取标本测定胃液p H值;HE染色观察胃组织病理学改变;免疫组化和实时定量PCR法测定DRG神经元上ASIC3蛋白及m RNA表达。结果:与NC组比较,WIRS组胃p H值明显降低(P<0.05),胃黏膜损伤程度严重,DRG神经元上ASIC3表达明显上调(P<0.05);与WIRS组比较,AT组胃液p H值明显升高(P<0.05),胃黏膜损伤程度减轻,DRG神经元上ASIC3表达明显减少(P<0.05)。结论 :浸水束缚应激所致胃黏膜损伤大鼠DRG神经元上ASIC3被激活,与胃液p H下降、胃黏膜损伤严重程度密切相关,APETx2可特异性拮抗ASIC3表达,对应激性胃黏膜损伤可能起保护作用。

APETx2及粪菌移植对母婴分离诱导肠易激综合征大鼠内脏敏感性的影响及机制

目的探讨粪菌移植对母婴分离诱导的肠易激综合征(IBS)大鼠内脏敏感性的影响并观察酸敏感离子通道3(ASIC3)抑制剂APETx2对其作用及可能机制。方法取SD孕鼠10只,待其生产后取仔鼠,采用母婴分离法构建IBS模型,收集建模成功的大鼠粪便制成粪菌液。18只健康雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照(Con)组、母婴分离(NMS)组、NMS+APETx2处理组,每组6只。NMS组、NMS+APETx2组均予以含有抗生素的鸡尾酒(ABX-water)连续灌胃5 d,构建伪无菌鼠模型,之后给予NMS大鼠粪菌液(1.6 mL/kg)灌胃;Con组给予等体积生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃5 d。灌胃结束后,NMS+APETx2组给予100μg/kg APETx2连续腹腔注射7 d,每天1次。采用墨汁推进实验测定肠道推进率,结直肠扩张刺激后评估内脏敏感性。免疫组化染色法检测结肠组织中ASIC3、c-kit蛋白表达。分离3组大鼠结肠cajal间质细胞(ICC),显微镜观察细胞形态学和数量变化。结果与Con组比较,NMS组肠道推进率减慢,腹部回撤反射(AWR)评分升高,内脏敏感性增加,结肠组织ASIC3、c-kit表达上调,ICC形态改变。与NMS组相比,NMS+APETx2组肠道推进率加快,AWR评分下降,内脏敏感性降低,结肠组织ASIC3、c-kit表达下调,ICC形态趋于正常,数量明显减少。结论 IBS粪菌移植可以诱导内脏高敏感发生和降低肠道传输速率,APETx2可改善其内脏敏感性和肠道传输速率,其机制可能与APETx2下调ASIC3表达、抑制与ICC相关的c-kit信号有关。

APETX2对氯化锂-匹鲁卡品诱导痫性发作大鼠的影响及机制探究

目的探索APETX2对氯化锂-匹鲁卡品诱导痫性发作大鼠的行为学影响及可能的机制。方法成年雄性SPF级SD大鼠18只,侧脑室置管后随机分为:癫痫组(9只)、APETx2组(9只),癫痫造模后观察2组癫痫大发作潜伏期及发作强度;APETx2处理原代培养海马神经元,动态观察其对钙成像的影响。结果 APETx2组的SD大鼠癫痫潜伏期延长,大发作程度减轻;APETx2处理原代培养海马神经元钙内流下降。结论 APETx2可抑制氯化锂-匹鲁卡品诱导SD大鼠痫性发作,减少酸诱导海马神经元钙离子浓度增加可能为机制之一。

酸敏感离子通道3对肠易激综合征大鼠内脏高敏感性的影响及其机制

目的探讨酸敏感离子通道3(ASIC3)对肠易激综合征(IBS)大鼠内脏敏感性的影响及可能的信号通路调节机制。方法孕龄鼠产后第2天开始,将分娩的6只幼鼠与母鼠继续在原笼中饲养,作为对照组,其余幼鼠采取母婴分离(NMS)法制作IBS模型。待NMS幼鼠生长至成年(8周龄),通过腹部回撤反射(AWR)评分筛选出16只造模成功的大鼠,将其随机分为NMS组(n=8)与NMS+APETx2组(n=8),NMS+APETx2组每日给予ASIC3特异性阻滞剂APETx2100μg/kg腹腔注射,NMS组及对照组腹腔注射等量生理盐水,持续1周。采用AWR评分评估内脏敏感性,墨汁染色法检测肠道传输速率以评估肠道动力,ELISA法检测结肠组织5-羟色胺(5-HT)水平,免疫组化法检测结肠组织5-HT4受体、ASIC3表达水平。结果与对照组比较,NMS组大鼠在结直肠压力为40、60、80 mmHg时的AWR评分明显增加,肠道传输速率降低,5-HT、ASIC3及5-HT4受体表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.01);而与对照组比较,NMS+APETx2组的AWR评分及肠道传输速率无明显变化(P>0.05),但结肠组织5-HT、ASIC3及5-HT4受体表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.01)。与NMS组比较,NMS+APETx2组大鼠AWR评分降低,肠道传输速率增高,5-HT、ASIC3及5-HT4R受体表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论ASIC3参与了IBS大鼠内脏高敏感性的形成,可能与其促进大鼠体内5-HT通路活化有关。

关节炎疼痛与酸感受离子通道相关的研究

目的:关节炎引起的疼痛与酸感受离子通道相关性及疼痛中发挥的作用。方法:我们制作了一种动物模式,酸性生理盐水反复注射到膝关节会对双侧爪子产生持久的机械超敏症。为了进一步探究酸感受离子通道(ASICs)在酸中引起痛觉过敏的作用,我们利用酸感受离子通道(ASICs)选择性缩氨酸抵制剂,APETx2。结果:APETx2注射在第14天并没有效果。结论:我们已经建立了一个由反复酸化生理盐水注射引起的持久性痛觉过敏的模型。强有力的缩氨酸ASIC3受体阻滞剂APETx2在注射后的第5天显示出了对持久性痛觉过敏的抵制作用,而不是在第14天。