API-ZYM系统在部分真菌胞外酶种类分析中的应用

目的探讨API-ZYM系统在真菌胞外酶种类分析中的应用价值。方法 4种马拉色菌(糠秕、钝形、合轴、斯洛菲)、白念珠菌和烟曲霉经纯化培养后用生理盐水最终配成浊度为0.5麦氏单位的菌悬液,使用API-ZYM系统对菌悬液进行19种酶定性测定。结果马拉色菌、白念珠菌和烟曲霉间胞外酶谱有较大差异,但均含有碱性磷酸酶、酯酶C4、类脂酯酶C8、白氨酸芳胺酶、酸性磷酸酶、萘酚-AS-BI-磷酸水解酶;4种马拉色菌胞外酶谱相似,均含有3种酯酶。结论 API-ZYM系统对真菌胞外酶谱的测定可用于菌属间鉴别。

API-ZYM系统分析动物双歧杆菌胞外酶活性

目的利用API-ZYM系统分析动物双歧杆菌胞外酶活性。方法采用培养法分离菌株,经提取DNA后采用16 S rRNA测序,采用高分辨率熔解曲线分析技术(high resolution melting,HRM)方法以及SNP(single nucleotide polymorphism)位点组合鉴定菌株;利用API-ZYM系统分析分离菌株的胞外酶活性共性和差异性,研究产业化前后菌株酶活性的变化。结果分离出动物双歧杆菌Bb-12、乳双歧杆菌Bi-07和HN019。能检测到14种胞外酶,有4种胞外酶未检出。酶谱的分泌共性及稳定性基本保持一致,其中糖苷酶类活性最高;HN019和Bb-12的酶谱具有高相似性,Bi07更显现出胞外酶特异性;工业化前后糖苷酶类仍然保持高活性,而水解酶类失活程度高。结论糖苷酶的高表达量普遍存在于动物双歧杆菌中;酶谱差异性可作为划分菌株特征的重要鉴定技术手段;工业化前后酶谱的变化为商业化益生菌体外预筛选评价提供理论参考。

毛霉型豆豉后发酵阶段蛋白质水解产物的生成及影响因素

采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、反相高效液相色谱等方法对毛霉型豆豉后发酵过程中蛋白质及其水解产物的变化情况进行研究,对各阶段蛋白质水解产物与不同因素指标的相关性进行分析,并采用APIZYM系统对毛霉所产胞外酶进行半定量检测。结果表明:蛋白质最终水解产物的分子质量主要集中在11~20 kD之间,后发酵0~7 d蛋白质分子质量下降迅速,且此阶段多肽成分发生较大改变,7~42 d主要引起的是多肽含量的变化;总酸含量与蛋白质水解物生成的相关性最高,相关系数为0.972,其次为褐变强度,再次为还原糖含量;API ZYM系统检测出毛霉可产生6种胞外酶。

不同条件下毛霉豆豉制曲过程的动态分析

该文通过观察不同时期豉曲的菌丝生长情况,测定霉菌菌落总数、酶活力的动态变化,确定最佳的前发酵生产工艺,并对最佳条件下不同时期豉曲的酶活进行API ZYM(酶谱鉴定)系统的半定量分析。结果表明:在培养温度15℃、接种量1%、含水量45%、培养时间64 h时最佳,此时菌丝生长旺盛,产生大量孢子,霉菌菌落总数为2.1×107 CFU/g,总蛋白酶活力为103.33 U/g,纤维素酶活力为1.87 U/g,且通过API ZYM系统检测出了碱性磷酸盐酶、白氨酸芳胺酶、酸性磷酸酶、萘酚–AS–BI–磷酸水解酶等酶。

芽孢杆菌产胞外酶的活性分析及其对凡纳滨对虾的作用

对解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens YL-10),枯草芽孢杆菌(B.subtilis YL-09),地衣芽孢杆菌(B.licheniformis ge6-1)和巨大芽孢杆菌(B.megaterium H1)分别进行发酵培养,测定其单株芽孢杆菌发酵液和多株混合芽孢杆菌发酵液中的消化酶活性以及胞外酶产生情况,从中筛选酶活性高和稳定性好的实验组分别进行凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖实验。研究结果显示:单株芽孢杆菌YL-10具有最高的蛋白酶和淀粉酶活性,分别为335.0和3.0U/mL;ge6-1具有最高的脂肪酶活性,为5.0U/mL。混合芽孢杆菌Tm1,Tm2,Tm3和Tm5发酵液中蛋白酶活性和淀粉酶活性均高于单株芽孢杆菌ge6-1和H1。通过API zym系统测定芽孢杆菌胞外酶的产生情况,发现多株混合芽孢杆菌发酵液中胞外酶的种类多于单株芽孢杆菌。凡纳滨对虾养殖实验结果显示:YL-10组(解淀粉芽孢杆菌)与Tm3组(解淀粉芽孢杆菌+枯草芽孢杆菌+地衣芽孢杆菌)对虾的体重增加、特定生长率和存活率较对照组显著提高(P<0.05)。芽孢杆菌能够提高对虾肝胰腺中的消化酶活性:YL-10组淀粉酶活性显著高于对照组,Tm3组蛋白酶和脂肪酶活性显著高于对照组。API zym系统测定结果显示:YL-10组和Tm3组对虾肝胰腺中分别有10种和12种胞外酶的酶活性提高,但各处理组间胞外酶活性差异不显著(P>0.05)。

蓝湿革上真菌生长:测量影响皮革质量的方法

把几种野生的大家所熟悉的真菌接种到标准蓝湿革上,采用不同的方法测量这些真菌对蓝湿革所造成的损害。所选择的真菌来源于美国标准菌库,与那些鞣制过的蓝湿革所污染的菌种不同。把蓝湿革样本接种上所选择的菌种,同时把未接种菌种的蓝湿革作为空白试验,两者同时放置90d时间。革上生出的野生菌株用DNA序列分析方法进行鉴别。对接种和未接种真菌的蓝湿革进行微观观察,发现两者的粒面层和内部组织结构都没有任何差别,说明两者的胶原结构几乎没有受到菌类的侵害。但多种检测表明,接种真菌的蓝湿革与未接种的相比,脂肪含量大幅度下降。