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心外膜脂肪组织转染人apM1基因抑制兔冠状动脉粥样硬化的形成
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作者 杨文凯 董念国 +3 位作者 陈庆 王现国 谢霆 陈新忠 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第20期3768-3772,共5页
背景:心外膜脂肪分泌的脂联素水平下降可能是导致冠状动脉粥样硬化的主要原因之一。目的:观察人脂联素基因apM1转染至兔心外膜脂肪组织对高脂喂食兔冠状动脉粥样硬化形成的影响。方法:向兔心包腔内注射脂质体包裹的pEGFP-apM1重组质粒50... 背景:心外膜脂肪分泌的脂联素水平下降可能是导致冠状动脉粥样硬化的主要原因之一。目的:观察人脂联素基因apM1转染至兔心外膜脂肪组织对高脂喂食兔冠状动脉粥样硬化形成的影响。方法:向兔心包腔内注射脂质体包裹的pEGFP-apM1重组质粒50μL,分别于注射后2,7,28d观察转染效率。采用高脂喂食方法制备兔冠状动脉粥样硬化模型,并按上述方法转染apM1基因,于转染后4周取材。结果与结论:心包腔内转染apM1基因2d后即可检测到兔心外膜脂肪组织apM1基因高表达,并可持续至28d。心外膜脂肪转染apM1基因对高脂喂食引起的外周血脂联素、肿瘤坏死因子α、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平无显著影响,但可使心包腔液中脂联素水平显著增加、肿瘤坏死因子α水平显著降低(P<0.01),冠状动脉内膜/中膜厚度比减小40.66%。说明经心包腔注射可将apM1基因有效转染入心外膜脂肪组织,并可在局部通过抑制高脂诱导的炎性因子释放而抑制冠状动脉粥样硬化的形成。 展开更多
关键词 脂联素 apm1 心外膜脂肪组织 冠状动脉粥样硬化
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Polymorphisms in PPARD,PPARG and APM1 associated with four types of Traditional Chinese Medicine constitutions 被引量:41
2
作者 Yanrui Wu Yina Cun +7 位作者 Jing Dong Jingru Shao Shengjun Luo Shengjie Nie Haijing Yu Bingrong Zheng Qi Wang Chunjie Xiao 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2010年第6期371-379,共9页
Based on the theory of constitution of Traditional Chinese Medicine (TCM), the human population is divided into nine constitutions including one balanced constitution (Normality) and eight unbalanced constitutions... Based on the theory of constitution of Traditional Chinese Medicine (TCM), the human population is divided into nine constitutions including one balanced constitution (Normality) and eight unbalanced constitutions (Yang-deficiency, Yin-deficiency, Phlegm-wetness, Qi-deficiency, Wetness-heat, Blood stasis, Depressed constitution, and Inherited special constitution). Different constitutions have specific metabolic features and different susceptibility to certain diseases. However, whether a genetic basis accounts for such constitution classification is yet to be determined. Here we performed a genetic study to assess the association between genetic variations of metabolic genes including PPARD, PPARG and APM1 and the constitutions. A total of 233 individuals of the Han population in China were classified into four groups, Normality, Yang-deficiency, Yin-deficiency and Phlegm-wetness with whom 23 single nucleotide polymorphisms (SNPs) in the three genes were genotyped using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) method. Biased distribution of PPARD rs2267669 and rs2076167, APM1 rs7627128 and rs1063539 in Yang-deficiency, PPARG Prol2Ala in Yin-deficiency and PPARD rs2076167, APMI rs266729 and rs7627128 in Phlegm-wetness were observed. The frequencies of Haplotypel3 (Hapl3) of PPARG in Yin-deficiency, Hap25 of APM1 in Yang-deficiency and Hap2 of PPARD and Hapl4 of PPARG in Phlegm-wetness, were significantly different from those in Normality, suggesting those might be group-associated haplotypes. These results suggested that single SNP and haplotypes ofPPARD, PPARG and APM1 may underlie the genetic basis of the constitutions classified in TCM. 展开更多
关键词 Traditional Chinese Medicine CONSTITUTION classification PPARD PPARG apm1 SNP
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人脂联素基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量:2
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作者 李丙蓉 郑宏庭 +4 位作者 邓华聪 郑丹 刘金波 兰丽珍 程伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1676-1680,共5页
目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒... 目的:构建含有人脂联素基因apM1的重组腺病毒载体,制备能表达人脂联素蛋白的重组腺病毒,为脂联素用于体内外干预动脉粥样硬化奠定基础。方法:自质粒pGEM-T-apM1上扩增两端带有SalⅠ和Hind Ⅲ酶切位点的全长apM1基因,将PCR产物和穿梭质粒pShuttle-CMV经SalⅠ和Hind Ⅲ双酶切后,连接、转化、筛选,进行PCR鉴定后送双向测序。将鉴定正确的重组质粒pShuttle-CMV-apM1用PmeⅠ酶切使其线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转BJ5183菌,进行细菌内同源重组,筛选、鉴定、扩增,PacⅠ酶切后用LipofectamineTM2000转染低代数的HEK293包装细胞,进行包装出毒。结果:重组穿梭质粒pShuttle-CMV-apM1经PCR和测序鉴定正确,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组成功,转染293细胞进行包装,产生的病毒经鉴定正确,并且无具有复制能力的腺病毒存在,生物安全性高。结论:成功的制备了apM1基因重组腺病毒,可进一步用于脂联素干预动脉粥样硬化的研究。 展开更多
关键词 apm1基因 腺病毒 同源重组
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PCR-SSCP技术检测2型糖尿病患者脂联素基因3号外显子编码区突变 被引量:2
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作者 汝颖 王长江 +3 位作者 王佑民 章秋 胡红琳 陈明卫 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第6期436-439,共4页
目的 观察人脂联素 (apM 1)基因 3号外显子编码区突变情况并探讨其与 2型糖尿病的关系。方法 选取 4 35例无亲缘关系的中国安徽地区汉族人 ,其中正常糖耐量(NGT)者 15 0例 ,2型糖尿病 (T2DM )者 2 85例。采用聚合酶链反应 单链构象多... 目的 观察人脂联素 (apM 1)基因 3号外显子编码区突变情况并探讨其与 2型糖尿病的关系。方法 选取 4 35例无亲缘关系的中国安徽地区汉族人 ,其中正常糖耐量(NGT)者 15 0例 ,2型糖尿病 (T2DM )者 2 85例。采用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)方法对apM1基因突变进行初筛分析后 ,对不同带型的标本进行DNA直接测序。结果 ①SSCP分析共发现 3种异常带型 ,测序后知为H14 2P、R2 2 1S及H2 4 1P3种杂合突变。②apM1基因H14 2P及R2 2 1S突变在T2DM组与NGT组间频率差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,H 2 4 1P突变在T 2DM组中的频率明显高于NGT组 (P =0 0 38)。结论 apM1基因 3号外显子编码区存在 3种突变 ,其中H2 4 1P突变是 2型糖尿病的危险因素。 展开更多
关键词 糖尿病 Ⅱ型/遗传学 突变 外显子 apm1基因
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脂联素基因SNP-11377和SNP-4522单倍型与代谢综合征相关 被引量:6
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作者 李奕平 杨曼 +4 位作者 熊煜欣 李显丽 徐波 姚宇峰 张瑛 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2010年第12期1288-1292,共5页
目的探讨昆明地区汉族脂联素基因单核苷酸多态性(SNP)与代谢综合征的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测脂联素基因SNP-11391、SNP-11377、SNP-4522、SNP+45和SNP+331的基因型,分析以上5个多态性位点与代谢综... 目的探讨昆明地区汉族脂联素基因单核苷酸多态性(SNP)与代谢综合征的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法检测脂联素基因SNP-11391、SNP-11377、SNP-4522、SNP+45和SNP+331的基因型,分析以上5个多态性位点与代谢综合征的相关性。结果 (1)脂联素基因SNP-11391和SNP+331不是昆明地区汉族的多态性位点;(2)在代谢综合征组中,SNP-11377G-SNP-4522T单倍型频率低于对照组(P<0.05),而SNP-11377C-SNP-4522T和SNP-11377G-SNP-4522C单倍型频率高于对照组(P<0.05和P<0.01)。结论在昆明地区汉族群体中,SNP-11377G-SNP-4522T单倍型可能降低患代谢综合征风险,而SNP-11377C-SNP-4522T和SNP-11377G-SNP-4522C单倍型可能增高患代谢综合征风险。 展开更多
关键词 脂联素基因 单核苷酸多态性 代谢综合征 单倍型
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人脂联素、球状脂联蛋白基因克隆及真核表达载体的构建与表达 被引量:1
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作者 李丙蓉 郑丹 +3 位作者 邓华聪 刘金波 兰丽珍 郑宏庭 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期367-369,共3页
目的构建高效表达球状脂联蛋白的真核表达载体,为研究脂联素、球状脂联蛋白在2型糖尿病及动脉粥样硬化中的作用奠定基础。方法克隆人脂联素基因,构建球状脂联蛋白基因的真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),Western blot检测上... 目的构建高效表达球状脂联蛋白的真核表达载体,为研究脂联素、球状脂联蛋白在2型糖尿病及动脉粥样硬化中的作用奠定基础。方法克隆人脂联素基因,构建球状脂联蛋白基因的真核表达载体,转染人脐静脉内皮细胞株(HUVEC),Western blot检测上清中球状脂联蛋白的表达。结果测序结果表明克隆的人脂联素基因序列正确;构建的球状脂联蛋白基因真核表达载体能有效转染HUVEC,并在上清中检测到该基因的表达。结论完成人脂联素基因克隆,成功构建了人球状脂联蛋白基因真核表达载体,并在HUVEC中获得分泌表达,为研究球状脂联蛋白对2型糖尿病的干预作用提供了可能。 展开更多
关键词 脂联素基因 克隆 球状脂联蛋白 真核表达
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人脂联素基因慢病毒载体在293 T细胞中的表达及意义 被引量:3
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作者 黄杰 谢良地 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期928-932,共5页
目的构建携带人脂联素(human apM1,hapM1)基因的慢病毒载体,并观察其在293 T细胞中的表达及意义。方法将hapM1的编码区(CDS区)从克隆载体上亚克隆到慢病毒载体上,构建重组慢病毒载体质粒。在脂质体介导下与包装质粒HELPER、包膜质粒VSV... 目的构建携带人脂联素(human apM1,hapM1)基因的慢病毒载体,并观察其在293 T细胞中的表达及意义。方法将hapM1的编码区(CDS区)从克隆载体上亚克隆到慢病毒载体上,构建重组慢病毒载体质粒。在脂质体介导下与包装质粒HELPER、包膜质粒VSVG共转染293 T细胞包装生产慢病毒。慢病毒感染293 T细胞后,RT-PCR和Westernblot法检测在293 T细胞中hapM1基因的表达。采用抑制血管平滑肌细胞增殖实验,检测表达产物的生物学活性。结果hapM1基因经测序后与GenBank报道序列完全一致。重组慢病毒载体质粒PNL-hapM1-IRES2-EGFP经鉴定正确。三质粒共转染293 T细胞成功,收集、浓缩病毒后测定其滴度为2.0×105TU·L-1。感染293 T细胞后RT-PCR、Western blot检测hapM1组细胞有hapM1蛋白表达,其余两组(Mock-293 T组、293 T组)均无表达。表达产物hapM1蛋白能够抑制血管平滑肌细胞的增殖。结论成功构建带有hapM1基因慢病毒载体,并且能够在293 T细胞中表达具有生物学活性的hapM1蛋白。 展开更多
关键词 脂联素 慢病毒载体 293 T细胞 血管平滑肌细胞
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人脂联素基因的克隆及序列分析 被引量:1
8
作者 李丙蓉 郑丹 +3 位作者 邓华聪 兰丽珍 郑宏庭 刘金波 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第3期293-295,共3页
目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:... 目的:克隆人脂联素基因(apM1),为进一步研究脂联素的功能提供实验基础。方法:应用RT-PCR法自人大网膜脂肪组织的总RNA中扩增出apM1cDNA全长基因,采用T-A克隆法重组到pGEM-TVectorSystem中,通过蓝白斑筛选出阳性克隆后,测序鉴定。结果:从脂肪组织总RNA中扩增得到735bpapM1基因,其cDNA序列与GenBank报导的人脂联素基因apM1同源性为99.7%(159位和558位碱基发生了无义突变),获得了质粒pGEM-T-apM1,测序鉴定正确。结论:成功的克隆了apM1基因全长cDNA。 展开更多
关键词 脂联素基因 克隆 分子 逆转录聚合酶链反应 序列分析 DNA
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广州地铁APM线列车紧急制动故障分析及列车线改造风险评估
9
作者 王军 《机车电传动》 北大核心 2016年第2期65-66,84,共3页
为解决广州地铁APM线列车由于"紧急列车线断电"故障导致列车产生紧急制动、无法启动的问题,分析研究"紧急列车线断电"故障,提出相应的改造方案并进行试验和风险评估,达到了大幅缩短正线"紧急列车线断电"... 为解决广州地铁APM线列车由于"紧急列车线断电"故障导致列车产生紧急制动、无法启动的问题,分析研究"紧急列车线断电"故障,提出相应的改造方案并进行试验和风险评估,达到了大幅缩短正线"紧急列车线断电"故障的处理时间,提高了APM线的运营服务质量。 展开更多
关键词 广州地铁 apm1型列车 紧急列车线断电 紧急制动 旁路开关
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中国人群2型糖尿病与脂联素基因单核苷酸多态性关系的Meta分析 被引量:2
10
作者 李生兵 杨刚毅 +4 位作者 李伶 李钶 齐晓娅 刘华 Guenther Boden 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期496-500,共5页
目的综合评价中国人群脂联素基因(apM1)单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病的关系。方法应用Meta分析软件包RevMan4.3.1对各研究结果进行数据合并,计算SNP基因型频数分布合并后OR值及其95%CI;利用Egger分析和失安全系数(Nfs0.05... 目的综合评价中国人群脂联素基因(apM1)单核苷酸多态性(SNP)与2型糖尿病的关系。方法应用Meta分析软件包RevMan4.3.1对各研究结果进行数据合并,计算SNP基因型频数分布合并后OR值及其95%CI;利用Egger分析和失安全系数(Nfs0.05)评估发表偏倚;对各研究结果进行不同分析模式和样本含量的敏感性分析,评价Meta分析结果的稳定性。结果检索筛选到相关文献9篇,apM1基因的SNP45在各研究间存在显著的异质性(P〈0.10)。亚组分析表明apM1基因SNP45在以南方人群为对象的研究间异质性较大(P〈0.01),是异质性的主要来源。apM1等位基因或基因型SNP45G和SNP45GG、SNP276G和SNP276GG在中国2型糖尿病人群的分布频率显著高于正常糖耐量组,其合并OR值(95%CI)分别为1.50[1.12,2.02]、2.15[1.53,3.02]、1.23[1.03,1.46]和1.26[1.00,1.59](均P〈0.05)。apM1基因型SNP45TG和SNP276GT在两组人群中的分布没有统计学意义(P〉0.05)。发表偏倚分析和敏感性分析结果证实上述Meta分析结果是稳定和可靠的。结论中国人群2型糖尿病与apM1基因SNP关系密切,SNP45G和SNP276G可能是2型糖尿病的危险因素。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 脂联素 apm1基因 多态性 单核苷酸 META分析 中国人群
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人脂联素基因重组腺病毒对内皮细胞丙二醛和超氧化物歧化酶水平的影响
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作者 李丙蓉 郑丹 +2 位作者 邓华聪 兰丽珍 郑宏庭 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期788-791,共4页
目的 检测人脂联素基因重组腺病毒(Ad-apM1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响,探讨Ad-apM1的抗氧化效应.方法 将Ad-apM1转染HUVEC,观察对HUVEC增殖的影响.双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测细胞... 目的 检测人脂联素基因重组腺病毒(Ad-apM1)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)丙二醛和超氧化物歧化酶(SOD)水平的影响,探讨Ad-apM1的抗氧化效应.方法 将Ad-apM1转染HUVEC,观察对HUVEC增殖的影响.双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养液中人脂联素蛋白水平,硫代巴比妥酸法检测丙二醛水平,黄嘌呤氧化酶法测定SOD水平.结果 Ad-apM1对HUVEC增殖无明显影响,用感染复数(MOI)为50的Ad-apM1转染HUVEC 24、48、72 h后培养液中脂联素浓度显著升高.转染AdapM1的HUVEC细胞SOD显著升高,而丙二醛显著降低(均P〈0.05).100μmol/L H2O2处理HUVEC 6、12和24 h后丙二醛水平显著升高,SOD水平显著降低(均P〈0.05),而转染Ad-apM1可逆转其作用(P〈0.05).结论 本研究制备的Ad-apM1能有效转染HUVEC并分泌人脂联素,具有抗氧化、减轻过氧化氢对内皮细胞的氧化损伤作用. 展开更多
关键词 脂联素 腺病毒 人脐静脉内皮细胞 丙二醛 超氧化物歧化酶
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