二甲双胍激活腺苷酸活化蛋白激酶抑制心肌缺氧再灌注损伤介导的NOD样受体蛋白3炎症体活化的研究

目的:评价腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)介导的NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症体活化在二甲双胍后处理保护心肌缺氧再灌注(H/R)损伤中的作用及机制。方法:选取健康雄性SD大鼠64只,进行麻醉,开胸直接取心脏,将心脏悬挂在Langendoff灌注装置上建立离体心肌缺氧再灌注模型。随机分为4组(n=16):持续灌注组、缺氧再灌注组(H/R组)、二甲双胍后处理组(MET组)、二甲双胍后处理+AMPK抑制剂(CC)组(MET+CC组)。各组进行相应处理后,监测血流动力学指标,测定心肌梗死面积,观察心肌细胞超微结构,ELIS法测定心肌组织内乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,心肌组织原位缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡发生;蛋白免疫印迹(Western blot)法测定磷酸化AMPK、AMPK、NLRP3、活化含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-1(caspase-1)、IL-1β和GAPDH蛋白表达水平。结果:与持续灌注组比较,H/R组心肌梗死面积增大(P<0.05),LDH、CK-MB水平增加(P<0.05),心肌细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与H/R组比较,MET组心肌梗死面积缩小(P<0.05),LDH、CK-MB水平降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率下降(P<0.05),磷酸化AMPK/AMPK比值显著增加(P<0.05),而NLRP3、活化caspase-1和IL-1β表达显著下降(P<0.05);与MET组比较,MET+CC组抑制AMPK激活后心肌梗死面积进一步增大(P<0.05),LDH和CK-MB水平进一步升高(P<0.05),心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);磷酸化AMPK/AMPK比值降低(P<0.05),而NLRP3、活化caspase-1和IL-1β表达显著升高(P<0.05)。结论二甲双胍通过激活AMPK信号通路,抑制心肌内NLRP3炎症体活化,从而减轻离体大鼠心肌缺氧再灌注损伤。

化瘀祛痰方调控AMPK介导自噬对高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的影响

目的探讨化瘀祛痰方药调控AMPK介导自噬对高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的影响。方法 32只SD大鼠随机分为空白组、高脂组、中药组、西药组,每组8只。模型大鼠采用高脂饲料喂饲8周后。给予处理因素治疗4周。全自动生化分析仪检测大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,Western blot技术检测各组大鼠LC3A/B、pmTOR、mTOR、p-AMPK、AMPK的表达水平。结果高脂组大鼠血清TC、LDL-C、HDL-C水平显著性升高(P<0.01);中药组和西药组均较模型组大鼠血清中TC、LDL-C、HDL-C水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与空白组相比,高脂组LC3A/B、p-AMPK蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),p-mTOR蛋白表达水平明显增高(P<0.01);与高脂组相比,中药组LC3A/B、p-AMPK蛋白表达水平明显增高(P<0.05),p-mTOR蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论化瘀祛痰方可通过调控AMPK介导自噬相关基因使高脂血症大鼠肝脏自噬增强,改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤。