猪APOA2启动子与转录因子GATA1作用的研究

对猪APOA2潜在启动子区进行克隆及活性分析,确定核心启动子区域,并进一步分析转录因子GATA1对APOA2基因转录活性的影响。结果表明,APOA2基因主要在猪的肝脏及脂肪组织中表达。双荧光素酶活性显示,猪APOA2基因5′端侧翼-813^-565 bp区域为核心启动子区,且-659^-565 bp区域内更可能存在一些促进APOA2转录的顺式作用元件。过表达GATA1基因结果显示,转录因子GATA1显著促进APOA2基因的转录;定点突变试验确认,转录因子GATA1可直接与APOA2基因启动子区的GATA1结合位点(-608^-599 bp)相结合。转录因子GATA1可直接靶向APOA2基因启动子区并促进APOA2的转录。

APOA2基因表达与慢性乙型肝炎病情进展的相关性探讨

目的 分析APOA2基因表达对乙型肝炎病毒(hepatitis B,HBV)复制和转录的影响,探究APOA2基因与慢性乙型肝炎(chronic viral hepatitis B,CHB)病情进展的相关性。方法 构建重组APOA2基因过表达质粒,设计、合成APOA2 siRNA,分别转染至HepG2.2.15细胞,培养72 h后利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantity polymerase chain reaction, RT-qPCR)、Western blot和ELISA等方法对比检测转染前后细胞内外APOA2、HBV-DNA、HBsAg、HBeAg、HBcAg等指标的变化,阐明APOA2基因表达对HBV复制和转录的影响。依据纳入标准收集临床样本,对照组(N组)、慢性HBV携带组(CHB1)、HBeAg阳性组(CHB2)和肝硬化失代偿期组(CHB3),各收集50例作为研究对象;另外,选择首次检测HBV-DNA>10~7 IU/mL的患者作为研究群体,依据治疗前和治疗6个月HBV-DNA含量降低程度进行分组,HBV-DNA≥10~5 IU/mL者为第1组,10~5 IU/mL>HBV-DNA≥10~2 IU/mL为第2组,低于检测下限为第3组;利用免疫透射比浊及qPCR分别检测上述临床样本中APOA2及HBV-DNA含量,采用t检验分析2组间差异,观察APOA2含量与CHB病情进展的相关性。结果 HepG2.2.15细胞APOA2 mRNA和蛋白水平明显低于HepG2细胞,差异均有统计学意义(P均<0.05);HepG2.2.15细胞中APOA2基因过表达时,细胞内外HBV-DNA、HBsAg、HBeAg和HBcAg含量均明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);APOA2基因沉默时上述指标均升高,差异均有统计学意义(P均<0.05);APOA2含量在N组、CHB1组、CHB2组、CHB3组之间呈现逐渐降低趋势,且组间两两比较均有统计学意义(P均<0.05);反之,在1、2、3组之间APOA2含量呈递增趋势,组间差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论 APOA2基因可能具有抑制HBV-DNA复制、转录的作用;在HBV引起的CHB中,APOA2基因起着抑制病情进展的作用。

阴虚上火血清蛋白潜在标志物的鉴定评估

[目的]寻找阴虚上火的新型诊断标志物,深化对阴虚上火的认识。[方法]对34例受试者血清样本的临床资料进行统计分析,运用ELISA法检测血清单核细胞分化抗原(monocyte differentiation antigen)CD14、激肽原-1(Kininogen-1,KNG-1)、载脂蛋白B(apolipoprotein B-100,APOB)和载脂蛋白A2(apolipoprotein A2,APOA2)的浓度,并运用ROC曲线对上述蛋白诊断上火的效果进行评估。[结果]阴虚上火患者CD14与KNG-1显著上调,APOB与APOA2显著下调,与健康对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.05,P<0.01)。将CD14、APOA2、KNG-1进行组合构建诊断模型,ROC曲线显示组合物的曲线下面积(area under curve,AUC)值为0.934,敏感度和特异度分别为100%和71.40%,具有较好的准确性。[结论]阴虚上火与能量代谢、炎症反应密切相关。CD14、APOA2、KNG-1的组合可作为临床诊断阴虚上火的潜在的生物学标志物,有助于中医疾病诊断的客观化。

利拉鲁肽联合二甲双胍治疗2型糖尿病的效果

目的研究利拉鲁肽联合二甲双胍对2型糖尿病(T2DM)患者临床疗效。方法选取2015年1月—2017年3月收治的T2DM患者92例,按照随机数字表法分为对照组与观察组,各46例。对照组予以二甲双胍,研究组增加利拉鲁肽,两组均持续治疗3个月。对比两组血糖水平[空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)]变化情况、血清糖化血红蛋白(Hb A1c)、载脂蛋白(Apo A2)、身体质量指数(BMI)、不良反应。计量资料比较采用t检验,计数资料比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果治疗后,研究组FPG、2 h PG水平低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);治疗后,研究组Apo A2水平高于对照组,Hb A1c、BMI水平低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);研究组不良反应发生率(15.21%)与对照组(17.39%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利拉鲁肽联合二甲双胍可降低T2DM患者Hb A1c水平,减轻BMI,提高Apo A2水平,改善血糖控制,且安全性高。

运用酵母双杂交系统筛选与埃博拉病毒GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白

目的运用酵母双杂交技术从人肝cDNA文库中筛选出与埃博拉病毒(EBOV)GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的宿主蛋白,用于研究GP、VP30、NP、L蛋白在EBOV传染病中的生物学功能。方法利用重组PCR技术构建诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,将诱饵菌株与人肝cDNA文库菌株进行杂交筛选,对筛选到的阳性克隆进行DNA测序和生物信息学分析,然后再利用酵母回复性实验进一步验证,排除假阳性结果。结果成功构建了诱饵质粒pGBKT7-GP、pGBKT7-VP30、pGBKT7-NP、pGBKT7-L,筛选出6个可能与GP、VP30、NP、L蛋白有相互作用的宿主蛋白,分别是COMMD1、ALB、PSMD8、APOA2、CYP2E1、HP。酵母回复性实验进一步说明了COMMD1和APOA2与NP蛋白可能存在相互作用。结论酵母双杂交筛选出多个可能与EBOV的GP、VP30、NP、L蛋白存在相互作用的捕获蛋白,为研究EBOV的致病机制提供了参考。