猪ApoA5基因cDNA的克隆、序列分析及组织表达研究

旨在克隆猪ApoA5基因cDNA全序列,并对其进行序列分析,研究该基因的组织表达规律。试验以山西马身猪肝脏组织为材料,采用RT-PCR与RACE技术,对猪ApoA5基因的cDNA进行克隆,并对其进行了生物信息学分析。采用荧光定量PCR检测并分析了ApoA5mRNA在2个猪种(马身猪和大白猪)中多个组织的表达规律。结果表明:猪ApoA5基因cDNA全长1 917bp,包括1 092bp的开放阅读框(ORF),24bp的3′-UTR和801bp的5′-UTR;编码区(CDS)共编码364个氨基酸,与牛、马、人、犬、猴、兔、褐鼠和小鼠氨基酸序列的同源性分别为81.7%、80.0%、78.3%、77.5%、76.5%、73.6%、67.1%和66.7%;ApoA5mRNA除了在肺脏和脾脏中未检测到外,在其他8种组织中均有表达,其中在肝脏组织中高丰度表达,在皮下脂肪与背最长肌中中等表达,低量表达于小肠、肾脏、心脏、胰脏和胃,并且在皮下脂肪与背最长肌中ApoA5mRNA的表达量存在显著的品种差异。猪ApoA5基因在动物进化中比较保守,ApoA5mRNA的表达量受到组织和品种影响,推测ApoA5基因对脂肪沉积性状有一定的影响。

鸡ApoA5基因的多态性与胆固醇浓度和繁殖性状的关联分析

【目的】探究ApoA5基因的多态性与胆固醇浓度和繁殖性状之间的关系,为平衡胆固醇浓度与繁殖性状间的关系奠定基础。【方法】试验共记录了434只SD母鸡的繁殖性能、300 d时的血清胆固醇浓度(SCC)和蛋黄胆固醇浓度(YCC),采用PCR-SSCP及PCR-RFLP技术,筛查到ApoA5基因的6个新的SNPs并进行关联分析。【结果】单个SNP的效应比较集中在开产日龄(AFE)和SCC上;由位置靠近、效应一致的SNP2、SNP4和SNP5构建的单倍型,关联分析结果大致与单个SNP相吻合,但更突显了各性状在单倍型组合间的差异,SCC和YCC都较高的H5H8、H4H8、H5H6、H6H6单倍型组合具有较好的繁殖性能,SCC和YCC都较低的H1H5、H1H6和H3H8组合则相反。【结论】ApoA5基因的单倍型SNP2-4-5能够揭示各组合在胆固醇及各繁殖性状间的差异,可以作为提高繁殖性能的分子标记。

CETP、ApoA5基因多态性与哈萨克族Ⅱ型糖尿病的关联研究

目的分析新疆哈萨克族CETP-Taq IB和ApoA5-1131T/C基因多态性与T2DM关系。方法新疆阿勒泰地区布尔津县哈萨克族252人分成Ⅱ型糖尿病(T2DM)组(126人)、糖耐量异常(IGT)组(63人)和正常糖耐量(NGT)组(63人),应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对CETP-TaqIB和ApoA5-1131T/C进行基因多态性分析,探讨基因多态性与哈萨克族Ⅱ型糖尿病关联。结果 3组间CETP-TaqIB、ApoA5-1131T/C基因等位基因频率无差异(P>0.05),ApoA5-1131T/C位点基因型频率无差异(P>0.05),CETP-TaqIB位点基因型频率的分布有统计学意义(P<0.05)。CETP-TaqIB的B1B2基因型FPG[(6.24±2.24)mmol/L]明显高于B1B1和B2B2基因型,ApoA5-1131T/C基因TT[(6.09±2.21)mmol/L]基因型的FPG明显高于TC和CC基因型(P<0.05)。结论新疆哈萨克族CETP-TaqIB基因多态性与T2DM相关,哈萨克族ApoA5-1131T/C基因TT基因型FPG水平高于TC和CC基因型。

晋汾白猪ApoA5基因单倍型与体重和肉质性状的相关性分析

试验旨在探究晋汾白猪载脂蛋白A5(apolipoprotein A5,ApoA5)基因的单倍型与体重和肉质性状的相关性。选取180头晋汾白猪为研究群体,利用PCR技术检测ApoA5基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),并采用Haploview软件分析这些SNP位点的连锁不平衡程度;筛选非完全连锁的SNP位点,构建不同的ApoA5基因单倍型,统计不同单倍型的基因频率,并通过SPSS软件分析不同ApoA5基因单倍型与晋汾白猪体重和肉质性状的相关性,鉴定优良性状的ApoA5基因单倍型。结果显示,晋汾白猪ApoA5基因共检测到21个SNPs位点,其中5个完全连锁单倍型块,分别包含5、2、3、4和2个SNPs位点;另外10个非完全连锁的标签SNP组合成不同的ApoA5基因单倍型,其中Hap 1的基因频率最高,达到46.7%,远高于其他单倍型;ApoA5基因单倍型与晋汾白猪的初生重、断奶重、6月龄体重、肌内脂肪含量、剪切力和滴水损失均具有明显的相关性,而与pH24 h没有明显的相关性;ApoA5基因Hap 11晋汾白猪的初生重、断奶重、6月龄体重和肌内脂肪含量均最高,且剪切力最低,滴水损失也相对较低;Hap 6的初生重最低;Hap 2的断奶重和6月龄体重均最低;Hap 3的肌内脂肪含量最低,剪切力最高;Hap 10的滴水损失最高。晋汾白猪ApoA5基因Hap 11属于优良性状单倍型,是一个具有优良性状的分子标记,可以用于晋汾白猪的分子育种,提高选种效率。

贵州省2个猪种APOA5基因比较分析

根据GenBank中报道的猪载脂蛋白A5(apoA5)基因序列设计3对引物,通过PCR方法分别对可乐猪和贵州白香猪的apoA5基因进行扩增、测序,将2个猪种apoA5基因序列进行比对,并找出基因变异位点。结果表明:可乐猪apoA5基因DNA长为2474bp,白香猪apoA5基因DNA长为2473bp,分别包含3个外显子,2个内含子。2个猪种apoA5基因编码区长皆为1092bp,编码363个氨基酸。白香猪apoA5基因序列与可乐猪相比,存在12个突变位点,其中6个位点为颠换,5个为转换,1个为缺失,两者核苷酸同源性为99.6%。这为进一步研究猪apoA5基因的多态性、生物学活性以及与猪生产性状相关性研究奠定了一定基础。

APOA1/C3/A4/A5基因簇的新载脂蛋白基因:APOA5及其研究进展

应用人和鼠的比较基因组学和功能基因组学方法 ,Pennaccio等和Vliet等分别在APOA1/C3/A4基因簇中发现新的载脂蛋白基因APOA5。人的APOA5基因编码 36 6个氨基酸 ,与人APOA4、小鼠Apoa5高度同源。APOA5转基因小鼠其甘油三酯 (TG)减少至野生型的 1/3,而Apoa5基因敲除小鼠其TG却增加 4倍。APOA5多态位点SNP3( 1131T >C)和S19W及单倍型APOA5 3有显著升高TG的作用。APOA5调节血浆TG水平的作用与APOC3作用相反 。

CYP11B2及APOA5基因多态性与原发性高血压的相关性研究

目的:探讨湖南地区原发性高血压患者醛固酮合成酶基因CYP11B2-344C/T及载脂蛋白A5APOA5-1131C/T基因多态性频率分布情况,并分析CYP11B2-344C/T及APOA5-1131C/T多态性与原发性高血压发病风险的关系。方法:185例原发性高血压患者为原发性高血压组,另选取180例正常体检者为对照组,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)测定两组CYP11B2及APOA5基因多态性。结果:原发性高血压组CC、CT基因型显著高于对照组,C等位基因频率高于对照组(P<0.05)。结论:CYP11B2基因及APOA5基因在原发性高血压患者中呈多态性分布,两者可能为原发性高血压的候选基因。

Ⅱ型糖尿病患者APOA5-1131T/C基因多态性与血脂代谢和胰岛素抵抗的关系研究

为了探讨载脂蛋白A5基因（APOA5）-1131T/C多态性在中国镇江地区的频率分布及其与血浆脂质代谢和Ⅱ型糖尿病患者胰岛素抵抗的关系,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）结合琼脂糖凝胶电泳技术检测152例健康人及71例Ⅱ型糖尿病患者APOA5-1131T/C基因型及等位基因频率分布,同时采用生化方法测定所有研究对象的血脂、血糖和胰岛素水平。结果显示：糖尿病组APOA5-1131C等位基因频率显著高于对照组（0.430vs0.296,P=0.006）。CC纯合子患糖尿病的风险是TT纯合子的3.75倍（OR=3.75,95%CI：1.57-8.92）,且经Logistic回归分析,校正年龄、BMI和血浆HDL-c、LDL-c及ApoB水平等其他混杂因素影响后,这种差异仍具有显著性意义（OR=2.70,95%CI：1.24-5.86）。糖尿病组C等位基因携带者TG水平显著高于非C等位基因携带者（P〈0.01）,TC水平和LDL-c水平亦明显升高（P〈0.05）。但是在两组中,不同基因型患者胰岛素抵抗相关指标均无显示差异。提示APOA5-1131T/C单核苷酸多态性对人群血浆TG水平有影响,-1131C等位基因与血浆TG、TC和LDL-c水平增高有关,但是与糖尿病患者胰岛素相关指标无关;APOA5-1131C等位基因可能与人群糖尿病的发生相关联。

可乐猪ApoA5基因多态性及其对肉质性状的遗传效应分析

根据GenBank中报道的猪apoA5基因序列设计2对引物,应用PCR技术从可乐猪肌肉组织基因组中扩增出了apoA5基因第三外显子的特异片段,采用直接测序法对apoA5基因进行单核甘酸多态性检测,并分析该基因与可乐猪12项肉质性状的关联性,结果表明：在可乐猪apoA5基因第三外显子上共检测到3个SNPs-突变位点：A^（226）G、G^（535）C、和C^（1514）T,其中A^（226）G和G^（535）C突变发生在编码区内,没有引起氨基酸的改变,为沉默突变。C^（1514）T突变发生在3＇-UTR,χ~2检验表明,发现的3个多态位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（p〉0.05）。A^（226）G位点为低度多态,其余两个突变位点均为中度多态。最小二乘分析显示,apoA5基因第三外显子226位点AA基因型个体的肌内脂肪显著高于AG基因型个体（p〈0.05）,535位点GG基因型个体的肉色显著高于CC和GC型个体（p〈0.05）,1514多态位点与可乐猪肉质性状没有显著关系（p〉0.05）。

贵州白香猪apoA5基因多态性初步分析

贵州白香猪为贵州特有的地方品种,为了研究贵州白香猪apoA5基因多态性,试验采用直接测序法对贵州白香猪apoA5基因全序列2 473 bp进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果表明:在apoA5基因的内含子2和外显子3中分别检测出1个、11个变异位点;有4个突变发生在氨基酸编码区内,其中3个突变为同义突变,而G1 185A突变为非同义突变,导致了密码子由CGC突变为CAC,从而导致氨基酸由精氨酸(Arg)突变为组氨酸(His);另外7个突变位点发生在3'-UTR;在检测出的12个变异位点中,G1 690C及G1 821C突变符合Hardy-Weinberg平衡状态,其余10个位点偏离了Hardy-Weinberg平衡。

载脂蛋白A5553G／T单核苷酸多态性对血浆脂质代谢的影响

目的探讨载脂蛋白A5基因（apoa5）553G／T变异在中国镇江地区的频率分布及其对血浆脂质代谢的影响。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）结合琼脂糖凝胶电泳技术检测152例健康人ApoA5 553G／T基因型及等位基因频率分布，同时采用生化方法测定所有研究对象的血浆脂质水平。结果ApoA5 553T等位基因频率为0．049。GG、GT、TT3种基因型中，GT杂合子个体和刀纯合子个体甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）水平明显高于GG纯合子个体。T等位基因携带者（GT＋TT）的TG水平较非T等位基因携带者（GG）增高了54．6％（2．47±2．01mmol／L：1．20±1．13mmol／L，P〈0．05），LDL-c水平增高28．3％（3．33±1．03mmol／L：2．78±0．82mmol／L，P〈0．05）。非T等位基因携带者年龄与TG、胆固醇（TC）水平呈正相关，T等位基因携带者年龄与血脂各项指标不相关。男性T等位基因携带者较非T等位基因携带者TG水平增高77．1％（P〈0．01），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）水平和载脂蛋白Al（ApoAl）水平分别降低6．7％（P〈0．05）和5．2％（P〈0．05），而女性T等位基因携带者较非T等位基因携带者TG水平增高23．1%（P〈0．05），HDL-c水平和ApoAl水平略降低，但无统计学意义（P〉0．05）。结论ApoA5 553G／T单核苷酸多态性对健康人群血浆TG有影响，553T等位基因与血浆TG和LDL-c水平增高有关，与HDL-c和ApoAl水平降低有关，这种作用在男性人群较女性人群更为明显。

猪APOA5和APOC3基因mRNA的表达差异及与肌内脂肪沉积的相关性分析

为了探究载脂蛋白A5(apolipoprotein A5,APOA5)基因和载脂蛋白C3(apolipoprotein C3,APOC3)基因组织表达差异及其与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)沉积的相关性,本研究利用荧光定量PCR方法分析APOA5和APOC3基因mRNA在可乐猪和江口萝卜猪7个组织中的相对表达量及其与IMF沉积的相关性。研究结果表明:APOA5和APOC3基因在可乐猪和江口萝卜猪的7个组织中均有不同程度表达,在肝脏中表达量最高,在皮下脂肪和背最长肌中表达量次之;APOA5基因在可乐猪多数组织中的表达量显著低于江口萝卜猪(p<0.05),而APOC3基因未呈现类似规律性;可乐猪中,除心脏外,其它组织均表现为APOC3基因mRNA表达量高于APOA5,江口萝卜猪心脏、肝脏、脾脏、小肠和背最长肌中同样呈现上述表达差异。相关及回归分析表明,IMF沉积量与可乐猪APOC3 mRNA表达丰度呈线性正相关(p<0.05)。根据研究结果,可以推测APOA5和APOC3基因与IMF沉积有一定关联性。

新疆维吾尔族人载脂蛋白A5-1131T＞C基因多态性对血脂水平的影响

目的:为了探讨新疆维吾尔族人ApoA5基因-1131T>C基因变异的频率及对血脂水平的影响。方法:对145例经冠脉造影排除冠心病的维吾尔族患者,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析对ApoA5基因-1131T>C多态性进行检测,比较不同基因型与个体血脂水平的关系。结果:ApoA5-1131C等位基因的频率是33%。TT、TC和CC三种基因型中,TC型与CC型的血甘油三酯(TG)水平明显高于TT型,而以CC型的TG水平最高(P均<0.05),C携带者(TC+CC)较非C携带者(TT)的TG水平增高36.2%[(2.03±1.33)mmol/Lvs(1.49±1.06)mmol/L,P<0.05]。结论:维族人群的ApoA5-1131T>C基因变异较常见,-1131C等位基因与血TG水平增高有关。