基于PPARγ/LXRα/ABCA1信号通路探讨芪黄疽愈方对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其作用机制

目的 基于过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ/肝X受体(LXR)α/三磷酸腺甘结合盒转运体(ABC)A1信号通路探讨芪黄疽愈方影响对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成及其作用机制。方法 选取25只C57BL/6小鼠作为空白组给予普通饲料喂饲配合生理盐水灌胃,68只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组(24只)、中药组(22只)、对照组(22只)给予高脂饲料喂饲配合对应药物灌胃,12 w后通过主动脉苏木素-伊红(HE)染色证实造模成功,通过小鼠状态了解小鼠一般状况;主动脉HE染色、油红O染色观察动脉硬化及脂质沉积情况;肝脏HE染色、油红O染色观察肝脏病理变化、红染脂滴情况,并通过Western印迹、聚合酶链反应(PCR)检测PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达情况。结果 空白组皮毛水润光泽,精神状态良好,活跃,饮食饮水正常;模型组精神萎靡,皮毛晦暗,倦怠懒动,饮食差,饮水正常;与模型组相比,中药组及对照组给药后各症状均有不同程度改善。各组主动脉HE、油红O染色显示,空白组主动脉切片未见AS斑块,主动脉大体标本未见明显红染脂质;与空白组相比,模型组主动脉切片可见斑块,大体标本可见明显红染脂质;与模型组相比,中药组及对照组动脉切片中AS斑块面积较小,大体标本中红染脂质面积较小。小鼠肝脏HE、油红O染色显示,空白组肝细胞结构正常,细胞核位于细胞中央,细胞沿中央静脉为中心向四周放射排列,未见脂肪变性;油红O未见红染脂质;与空白组比较,模型组肝细胞排列紊乱,胞内可见形态不同、大小不等、数量不一的脂滴空泡,油红O切片可见大量红染脂质。与模型组比较,对照组、中药组肝脏病变程度减轻,肝细胞结构大部分清晰可见,脂滴数量减少,油红O红染脂质明显减少。Western印迹检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白的表达;与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组均显著升高(P<0.05)。PCR检测肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA的表达,与空白组相比,模型组PPARγ、LXRα、ABCA1 mRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,中药组显著升高(P<0.05)。结论 芪黄疽愈方能够影响小鼠动脉硬化,升高肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达,调节肝脏脂质代谢,促进胆固醇逆转运,延缓AS进展。

有氧运动抑制炎症反应改善ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠心肌纤维化机制研究

背景动脉粥样硬化(AS)会引发心肌梗死、心肌纤维化等心血管病变,随着全球人口老龄化加重,发病人群逐渐增多。炎症反应是心肌纤维化的关键因素,规律的有氧运动可以减轻炎症保护心肌功能。但有氧运动对AS心肌纤维化的保护机制尚不清楚。目的本研究旨在探讨有氧运动对AS小鼠心肌纤维化的影响机制。方法2022年2—8月选取27只8周龄的雄性ApoE^(-/-)小鼠作为实验对象,将小鼠随机分为对照组、模型组和有氧运动组,每组9只。制备AS小鼠模型,对小鼠进行运动训练,Masson染色、苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测心肌组织NOD受体3(NLRP3)、白介素1β(IL-1β)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达情况,检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)表达量。结果Masson染色结果示模型组心肌组织纤维化较对照组明显加重;有氧运动组心肌组织纤维化较模型组明显改善。HE染色结果示模型组小鼠心肌细胞排列较错乱,细胞形态、大小异常,细胞间隙增大,存在炎性细胞浸润;有氧运动组小鼠心肌细胞排列尚整齐,细胞形态、大小异常,细胞间隙基本正常。模型组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达高于对照组,有氧运动组NLRP3、IL-1β、TGF-β1蛋白表达低于模型组、高于对照组(P<0.05)。模型组SOD、GSH-Px表达量低于对照组,有氧运动组SOD、GSH-Px表达量高于模型组、低于对照组(P<0.05)。结论有氧运动明显改善ApoE^(-/-)AS小鼠心肌纤维化,其机制可能与抑制心肌炎性反应、激活抗氧化水平有关。

载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠整装(whole-mount)主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉,进行淋巴管内皮受体1(LYVE1)、 α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光组织化学染色,染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明,移至自制的样本容器中,荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低,外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强,更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^(-/-)小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便,特异性好。

香菇多糖对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及AMPK信号通路的影响

目的:探讨香菇多糖(LNT)对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块形成及单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)信号通路的影响。方法:ApoE^(-/-)小鼠分为模型组、立普妥组(5 mg/kg)、LNT低(5 mg/kg)、中(10 mg/kg)、高(20 mg/kg)剂量组,以相似遗传背景的C57BL/6小鼠为对照组。灌胃给药12周后,全自动生化分析仪检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)水平;ELISA检测血清IL-6、IL-1β水平;油红O染色观察整体主动脉斑块形成情况;HE染色观察主动脉根部斑块形成情况;蛋白免疫印迹检测主动脉AMPK通路蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β水平、主动脉斑块面积、主动脉根部斑块面积、主动脉组织NLRP3、IL-6、IL-1β表达显著升高,主动脉组织p-AMPK/AMPK表达和血清HDL-C水平降低(P<0.05);与模型组比较,立普妥组、LNT中、高剂量组TC、TG、LDL-C、IL-6、IL-1β、主动脉斑块面积、主动脉根部斑块面积、主动脉组织NLRP3、IL-6、IL-1β表达显著降低,主动脉组织p-AMPK/AMPK表达和血清HDL-C水平显著升高,且LNT各剂量组间差异有统计学意义(P<0.05);立普妥组与LNT高剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:LNT可能通过激活AMPK通路抑制AS小鼠炎症反应和AS斑块形成。

健脾祛痰方对限制活动ApoE^(-/-)小鼠体成分/行为学变化的影响

目的:观察健脾祛痰方对限制活动载脂蛋白E基因敲除(Apolipoprotein E Knockout,ApoE^(-/-))小鼠体成分/行为学变化的影响。方法:将30只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组,阿托伐他汀组以及健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组;将6只C57BL/6J小鼠作为正常组。正常组以普通饲料喂养,其余5组以高脂饲料喂养,阿托伐他汀组进行阿托伐他汀2.4 mg/(kg·d)灌胃,健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组以健脾祛痰方[2.97 g/(kg·d)、5.94 g/(kg·d)、11.88 g/(kg·d)]灌胃,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,12周后进行脾虚痰浊模型评价。实验期间每周观察小鼠的皮毛色泽、活动能力及大便性状,检测体成分,以旷场实验、跑台实验进行动物行为学评估。结果:与正常组比较,模型组小鼠旷场实验运动总距离减少,跑台实验跑步力竭时间降低,体脂降低,差异有统计学意义(P <0.01)。与模型组比较,健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组小鼠旷场实验运动总距离呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);健脾祛痰方中、高浓度组小鼠跑台实验跑步时间增加,差异有统计学意义(P <0.05,P <0.01);阿托伐他汀组和健脾祛痰方低浓度组跑步时间均呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);健脾祛痰方低浓度组、健脾祛痰方中浓度组、健脾祛痰方高浓度组小鼠体脂呈上升趋势,但差异无统计学意义(P> 0.05);阿托伐他汀组小鼠体脂显著增加,差异有统计学意义(P <0.01)。结论:健脾祛痰方可增加限制活动ApoE^(-/-)小鼠的行为活动,但对体成分改善作用不显著。

丹蒌片通过PTP1B/PP2A/SP1途径影响甘油三酯合成改善ApoE^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积的机制研究

目的 探讨丹蒌片对Apo E^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积及甘油三酯合成的影响及可能机制。方法 将16只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、给药组各8只,8只C57BL/6J小鼠作为空白对照组。空白对照组给予基础饲料喂饲,其余小鼠给予高脂饲料喂饲,8周后给药组予丹蒌片连续灌胃4周,空白对照组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。利用全自动生化分析仪检测各组小鼠血清血脂水平;比色法试剂盒测定各组小鼠肝脏中甘油三酯(TG)水平,HE染色、油红O染色观察小鼠肝脏病理及脂质沉积情况;RT-qPCR法检测肝脏组织蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(PTP1B)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FASN)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)的mRNA表达水平,WB法检测PTP1B、蛋白磷酸酶2A(PP2A)、P-PP2A、特异性蛋白1(SP1)、P-SP1、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT蛋白表达情况。结果 与空白对照组相比,模型组小鼠血清中的HDL-C水平显著降低(P<0.05),血清TC、TG、LDL-C及肝组织TG含量显著升高(P<0.01),病理结果显示肝脏组织存在脂肪变性,以及明显的脂质沉积;小鼠肝脏PTP1B、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01);P-PP2A/PP2A、P-SP1/SP1比值显著降低(P<0.01)。经丹蒌片治疗后,小鼠血清的TC、TG、LDL-c及肝脏TG水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肝脏脂肪变性及脂质沉积程度改善,小鼠肝脏PTP1B、SREBP-1c、FASN、SCD1、GPAT mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);P-PP2A/PP2A、P-SP1/SP1比值显著升高(P<0.01)。结论 丹蒌片可能通过PTP1B/PP2A/SP1途径影响肝脏甘油三酯合成而缓解Apo E^(-/-)AS小鼠肝脏脂质沉积进而达到防治动脉粥样硬化的目的。

黄连解毒汤与降脂药对ApoE^(-/-)小鼠固有免疫反应影响的比较研究

目的比较黄连解毒汤及降脂药阿托伐他汀、非诺贝特和罗格列酮对高脂饮食饲喂载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠全身固有免疫反应及主动脉局部免疫反应的影响。方法采用配对比较法将60只雌性8周龄ApoE^(-/-)小鼠分为对照、模型、阿托伐他汀、非诺贝特、罗格列酮和黄连解毒汤6组,每组10只,10只匹配的C57BL/6J小鼠为野生对照组。对照组与野生对照组小鼠给予普通饲料,模型组小鼠给予高脂饲料,给药组小鼠造模同时分别给予阿托伐他汀(3 mg/kg)、非诺贝特(33 mg/kg)、罗格列酮(0.67 mg/kg)、黄连解毒汤水煎液(5 g/kg)灌胃。4周后,每组取5只小鼠,生化检测血浆血脂水平,流式细胞仪检测外周血单核细胞比例及表面Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)和清道夫受体CD36的表达、单核细胞亚型比例,HE染色检测主动脉组织病理变化,RT-qPCR检测主动脉组织炎性细胞因子表达;余下小鼠腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),流式微球阵列(cytometric bead array,CBA)和ELISA检测血浆细胞因子的水平。结果与野生对照组比较,对照组小鼠血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平明显降低(P<0.01);外周血单核细胞炎症亚型Ly6C++比例升高(P<0.05),Ly6C-和Ly6C+比例降低(P<0.05);主动脉组织炎性因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-12、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、单核细胞趋化蛋白(monocyte chemotactic protein,MCP)-1和一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)-2表达升高(P<0.05);LPS刺激后,对照组小鼠血浆IL-6和TNF-α水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠TC、TG、HDL和LDL水平进一步升高(P<0.05);外周血单核细胞的比例增多(P<0.05),CD36的表达增加(P<0.05);主动脉组织炎性因子IL-1β、IL-12、TNF-α和NOS-2表达升高(P<0.05);LPS刺激后,血浆IL-1β、IL-12 p70和MCP-1水平升高(P<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀干预没有改善血脂水平(P<0.05),但降低主动脉组织炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α、MCP-1和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。非诺贝特干预降低HDL水平(P<0.01);LPS刺激后,降低主动脉组织IL-12、TNF-α、MCP-1和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。罗格列酮干预没有改善血脂水平(P>0.05),但降低外周血单核细胞及其炎症亚型Ly6C^(++)比例(P<0.05),降低主动脉组织IL-1β、IL-6、IL-12、TNF-α和NOS-2 mRNA表达(P<0.05);LPS刺激后,罗格列酮降低血浆IL-12 p70的水平(P<0.05)。黄连解毒汤干预并未改善血脂水平,但显著降低外周血单核细胞及其炎症亚型Ly6C^(++)比例以及TLR4和CD36在单核细胞的表达水平(P<0.05),降低主动脉组织IL-1β、IL-12和NOS-2 mRNA表达(P<0.05)。结论黄连解毒汤、阿托伐他汀、非诺贝特和罗格列酮减轻高脂血症引发的固有免疫反应,且其免疫调节作用不依赖于降脂作用。其中黄连解毒汤和罗格列酮对全身固有免疫的调控作用优于阿托伐他汀和非诺贝特。

异鼠李素对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的保护作用及机制研究

目的探讨异鼠李素对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的保护作用及潜在分子机制。方法细胞实验中,巨噬细胞随机分为对照组、氧化低密度脂蛋白ox-LDL组及异鼠李素5、10、20μmol/L组,并予相应的干预措施。采用油红O染色法检测各组巨噬细胞内泡沫细胞占比,采用Western blot法检测巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)、CD36、磷酸化核因子κB抑制蛋白α/核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα/IκBα)蛋白表达水平,流式细胞术检测各组巨噬细胞凋亡水平。动物实验中,选取6只6周龄雄性C57BL/6小鼠作为对照组,18只6周龄雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组及异鼠李素中、高剂量组。所有小鼠均采用高脂饲料喂养;异鼠李素中、高剂量组分别予以异鼠李素100、200 mg(/kg·d)灌胃给药。检测各组小鼠干预后主动脉组织相关细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18及核转录因子κB p65(NF-κB p65)水平,氧化应激指标一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测各组主动脉均浆组织IL-18、髓样分化因子88(MyD88)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、TLR4、NF-κB p65 mRNA表达水平;油红O染色观察各组小鼠主动脉粥样硬化情况。结果在细胞学实验中,异鼠李素5、10、20μmol/L组泡沫细胞占比均低于ox-LDL组(P<0.05);ox-LDL组CD36、TLR4、p-IκBa/IκBa蛋白表达水平及细胞凋亡水平均显著高于对照组(P<0.05);异鼠李素5、10、20μmol/L组CD36、TLR4、p-IκBa/IκBa蛋白表达水平及细胞凋亡水平均显著低于ox-LDL组(P<0.05)。在动物实验中,模型组小鼠IL-1β、IL-18、NF-κB p65、NO、MDA水平及TLR4、NF-κB p65、MyD88、IL-18 mRNA表达水平、油红O染色斑块面积均高于对照组(P<0.05),SOD浓度及MMP-13 mRNA表达水平均低于对照组(P<0.05);异鼠李素中、高剂量组小鼠IL-1β、IL-18、NF-κB p65、NO、MDA水平及TLR4、NF-κB p65、MyD88、IL-18 mRNA表达水平、油红O染色斑块面积均低于模型组(P<0.05),SOD浓度及MMP-13 mRNA表达水平均高于模型组(P<0.05)。结论异鼠李素可以抑制ApoE^(-/-)小鼠炎症反应和促动脉粥样硬化通路,其机制可能与下调TLR-4、NF-κB p65信号通路相关蛋白表达有关。

西方饮食饲料对APOE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化造模的影响

目的为了研究西方饮食饲料快速建模及对APOE^(-/-)小鼠生物学指标及组织病理学的影响。方法用48♀48♂APOE^(-/-)小鼠、48♀48C57BL/6J进行了试验,分为8组,分别为APOE^(-/-)普通繁殖料组(24♀24♂)和APOE^(-/-)西方饮食饲料组(24♀24♂)、C57BL/6J普通繁殖料组(24♀24♂)和C57BL/6J西方饮食饲料组(24♀24♂)。从3周开始饲喂,直到20周实验结束。实验结束后采集血清检测生化指标,分离主动脉做大体油红O染色及分析,主动脉根部做石蜡切片和HE染色。结果西方饮食没有显著增加APOE^(-/-)体重,但可以显著提高APOE^(-/-)鼠的血脂指标、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白,促进动脉粥样硬化斑块的形成,雄鼠适合主动脉大体斑块的造模,雌鼠适合主动脉弓根部斑块造模。结论西方饮食饲料可以促进APOE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化造模,增加主动脉斑块面积比,缩短建模时间,提高建模的均一性。

IgM亚类抗体3A6抑制ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成

目的探究天然属性抗氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)IgM亚类抗体3A6对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成的影响。方法以ApoE^(-/-)小鼠为研究对象,将小鼠(18只)随机分为3组,即对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)、5G8组(腹腔注射天然属性抗LDL的IgM亚类抗体)和3A6组(腹腔注射天然属性的抗ox-LDL的IgM亚类抗体),每组各6只。高脂高胆固醇饮食饲喂12周,观察各组小鼠体质量,检测小鼠血脂的水平;苏木精-伊红染色分析小鼠主动脉的病理变化及斑块面积。结果3组小鼠的体质量、血脂水平和ox-LDL水平比较,差异无统计学意义(P=0.087);与对照组比较,3A6组小鼠动脉粥样硬化斑块面积显著减少,差异有统计学意义(P=0.023)。结论天然IgM亚类抗体3A6能够抑制ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块的形成。

2-甲氧基雌二醇对布-加综合征模型小鼠肝纤维化的影响

目的:探讨2-甲氧基雌二醇(2-MeOE2)对布-加综合征(BCS)所致肝纤维化的影响和可能机制。方法:40只C57BL/6J雄性小鼠随机分为4组,每组10只,BCS组、BCS+2-MeOE2组采用下腔静脉部分结扎法制备BCS模型,假手术组和2-MeOE2组行造模操作但不结扎;2-MeOE2组和BCS+2-MeOE2组每隔1日腹腔注射2-MeOE2(15 mg/kg)1次。6周后处死小鼠,取血清检测ALT与AST水平;取肝组织,HE染色观察病理改变,天狼星红染色观察胶原沉积情况,免疫组化染色观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,实时荧光定量PCR法检测肝组织中纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达,Western blot法检测上述蛋白的表达。结果:与假手术组相比,BCS组小鼠肝脏淤血,胶原沉积,ALT、AST水平升高,α-SMA表达水平升高,FN、ColⅠ、HIF-1αmRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05);2-MeOE2可拮抗BCS导致的上述指标的变化(P<0.05)。结论:2-MeOE2可以改善BCS所致的小鼠肝纤维化,作用机制可能与改善肝细胞缺氧有关。

参附黄配方对脓毒症小鼠不同脑区IL-33/ST2轴的影响

目的 观察参附黄配方对脓毒症小鼠不同脑区白细胞介素-33(IL-33)/ST2轴的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、脓毒症组和参附黄组。脓毒症组和参附黄组采取盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒症模型。参附黄组术后给予每日2次的2.5 g/kg参附黄配方0.5 m L灌胃;脓毒症组和对照组给予每日2次的纯净水0.5 mL灌胃。采用临床分级评价小鼠临床指数,采用神经功能分级评价神经功能指数,采用酶联免疫标记法评价各组小鼠前额叶皮层和海马区IL-33和ST2的含量。结果 与对照组比较,脓毒症组小鼠临床指数显著增高,神经功能指数显著降低(P<0.05);前额叶皮层和海马区IL-33和ST2蛋白表达显著增多(P<0.05)。与脓毒症组相比较,参附黄组临床指数显著降低(P<0.05),神经功能指数显著增高(P<0.05);前额叶皮层和海马区IL-33蛋白表达显著增高(P<0.05),ST2蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论 参附黄配方对CLP小鼠临床症状和神经功能具有一定保护作用,其机制可能与调节IL-33/ST2轴有关。

miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析

[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化.

γ-亚麻酸对糖尿病小鼠记忆衰退的影响及机制

目的 探究γ-亚麻酸(GLA)对糖尿病小鼠记忆衰退的影响及机制。方法 选取16只8周龄野生型小鼠,雌雄各半,分成GLA组及对照组,对所有小鼠使用1 g/kg D-果糖加10%饮用水饮食(持续40 d)诱导糖尿病小鼠记忆衰退模型。对照组小鼠给予每日1 mg/kg生理盐水灌胃,GLA组小鼠给予每日1 mg/kg GLA灌胃。干预7 d后,以Morris水迷宫评估小鼠的学习和记忆障碍情况,处死小鼠取大脑皮层及海马组织,以HE染色检查二者病理改变,以透射电镜观察小鼠海马神经元超微结构变化,以Western Blot实验检测小鼠海马组织中GRP78、GRP94、NOX2和NOX4蛋白表达水平。结果 GLA组小鼠的逃逸潜伏期短于对照组,穿越环次数高于对照组(P<0.05)。GLA组小鼠大脑皮层和海马组织病理变化以及海马神经元超微结构损伤程度均较对照组轻。GLA组小鼠海马组织GRP78、GRP94、NOX2和NOX4蛋白表达水平低于对照组(P<0.05)。结论 GLA能通过抑制海马神经元内质网应激反应,进而改善糖尿病小鼠记忆衰退。

基于Wnt/β-连环蛋白通路探究金天格对肿瘤坏死因子-α诱导的小鼠MC3T3E1细胞生物学功能的影响实验研究

目的:探讨金天格通过调节Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)通路对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的小鼠成骨细胞(MC3T3E1)细胞生物学功能的影响。方法:体外培养MC3T3E1细胞,分为对照组、TNF-α组(50 ng/ml TNF-α)、L-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-6) g/L金天格)、M-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10-5 g/L金天格)、H-金天格组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格)、Dickkopf-1(DKK-1)组(50 ng/ml TNF-α+10 ng/ml Wnt/β-catenin通路抑制剂DKK-1)、H-金天格+LiCl组(50 ng/ml TNF-α+10^(-4) g/L金天格+20μmol/L Wnt/β-catenin通路激活剂LiCl)。用CCK-8试剂盒对细胞活性进行检测,用流式细胞仪对细胞凋亡情况进行检测,用酶联免疫吸附试验对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-6水平进行检测,用Western blot对细胞凋亡相关蛋白及Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达情况进行检测。结果:与对照组比较,TNF-α组细胞活性、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞程序性死亡配体-1(PD-L1)蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及B细胞淋巴瘤(Bax)、β-catenin、转录因子7样2(TCF7L2)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白表达升高(均P<0.05)。与TNF-α组比较,L-金天格组、M-金天格组、H-金天格组、DKK-1组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达升高,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达降低(均P<0.05)。与H-金天格组比较,H-金天格+LiCl组细胞活性及Bcl-2、PD-L1蛋白表达降低,细胞凋亡率、IL-1β、IL-6水平以及Bax、β-catenin、TCF7L2、Cyclin D1蛋白表达升高(均P<0.05)。结论:金天格可能通过抑制Wnt/β-catenin通路减轻TNF-α诱导的MC3T3E1细胞损伤。

当归-白芍联合BM-MSCs移植对NASH相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响

目的观察当归-白芍药对联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响,探讨其可能机制。方法采用西式饮食联合四氯化碳复合诱导法制备NASH相关肝硬化小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、当归-白芍组、BM-MSCs组和当归-白芍+BM-MSCs组,每组12只。造模成功后,按分组予相应干预,连续4周。HE染色观察肝组织形态;检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、三酰甘油(TG)、白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)含量及肝组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、肝细胞生长因子(HGF)含量;RT-qPCR检测肝细胞Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(MyD88)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA表达;分离肝脏原代细胞,行体外CpG ODN 2216诱导刺激,提取细胞上清液,检测IL-1β和TNF-α含量。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织炎性细胞浸润,伴肝细胞坏死和胶原沉积,形成假小叶;血清ALT、AST、TBil、TG含量升高,ALB含量下降,肝组织HGF含量下降,IL-1β、TNF-α含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肝细胞TLR9、MyD88、TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达升高(P<0.05),CpG ODN 2216诱导后肝细胞上清液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05)。与模型组比较,当归-白芍+BM-MSCs组小鼠肝组织炎性细胞浸润及肝细胞坏死减少,肝纤维化程度减轻,当归-白芍组和BM-MSCs组小鼠肝组织损伤轻度好转;除BM-MSCs组血清TG含量外,各干预组检测指标均明显改善(P<0.05)。与当归-白芍组及BM-MSCs组比较,当归-白芍+BM-MSCs组相关检测指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论当归-白芍联合BM-MSCs移植可有效改善NASH相关肝硬化小鼠肝功能,促进肝细胞再生,其机制与下调TLR9/NF-κB信号通路表达及功能,抑制炎症因子分泌,改善肝脏炎症微环境有关。

调肝导浊方对apoE^(-/-)小鼠血脂及主动脉斑块面积的影响

[目的]观察调肝导浊方对apo E^(^(-/-))小鼠血脂及主动脉斑块的影响。[方法]将apo E^(-/-)小鼠随机分成模型组和调肝导浊组并予以高脂饮食12周,C57BL/6L小鼠作为对照组给予普通饮食,12周后,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的水平;油红O染色评估主动脉斑块的范围;小动物超声仪检测主动脉的斑块面积及狭窄程度。[结果]模型组与对照组相比,TC、TG、HDL-C、LDL-C均升高(P<0.05或P<0.01);调肝导浊组与模型组相比,LDL-C水平降低(P<0.05),TC、TG、HDL-C无明显差异。油红O染色显示模型组的斑块范围最大,其次是调肝导浊组,最后是对照组。B超结果显示与对照组相比,模型组主动脉的斑块面积及狭窄程度明显增大(P<0.01);调肝导浊方干预后,斑块面积减小(P<0.05),狭窄程度明显减轻(P<0.01)。[结论]调肝导浊方可以降低apo E^(-/-)小鼠的血清LDL-C水平,减少主动脉的斑块面积,并改善血管的狭窄程度。

补肾活血方对去势骨质疏松小鼠骨-血管形成偶联调节作用的实验研究

目的:基于骨-血管形成偶联调节作用探讨补肾活血方对去势骨质疏松小鼠骨量及骨代谢的影响。方法:选取40只雌性ICR小鼠按随机数字表法分为假手术组(10只)和去势组(30只)。去势组小鼠行卵巢去势手术后常规饲养8周,随机抽取3只小鼠证实骨质疏松造模成功后,按随机数字表法分为模型组和中药组,每组各10只。假手术组及模型组予以等量生理盐水灌胃。中药组成模后采用补肾活血方(8.6 mg/kg)灌胃干预,8周后处死小鼠收集样本。进行Micro-CT、TRAP染色、免疫荧光染色(EMCN、CD31)、骨代谢指标检测。结果:Micro-CT显示模型组较假手术组骨小梁显著减少,中药组较模型组骨小梁增加。定量分析结果显示,模型组骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)低于假手术组,而中药组BV/TV、Tb.N、Tb.Th高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。骨组织TRAP染色及定量分析显示,模型组TRAP阳性表达的数目高于假手术组,中药组阳性表达的数目少于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组干骺端H血管的比例相比假手术组显著减少,中药组干骺端H血管的比例较模型组增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。与假手术组相比,模型组PINP水平降低,TRACP水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);中药组PINP水平较模型组升高,而TRACP降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾活血方可通过促进骨-血管形成,增加骨生成,减少骨吸收,提高去势骨质疏松小鼠的骨量。

芳香新塔花总黄酮通过调控PPARγ/LXRα/ABCA1通路对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢紊乱的影响

目的探究芳香新塔花总黄酮对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢及对PPARγ/LXRα/ABCA1通路的影响。方法60只ApoE^(-/-)小鼠给予高脂饲料喂养8周后随机分为模型组、阿托伐他汀组(3 mg/kg)及芳香新塔花总黄酮低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg),每组12只。灌胃给予相应剂量药物干预12周,给药同时继续饲喂高脂饲料;另取12只C57BL/6J小鼠为空白组,灌胃给予生理盐水,同时喂养普通饲料。给药结束后,油红O染色观察肝组织脂质沉积情况,HE染色观察主动脉斑块形态,全自动生化分析仪检测血脂水平,ELISA法检测血清IL-18、IL-1β、MCP-1水平,试剂盒检测肝组织TC、TG、NEFA、FC水平,Western blot法检测肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达。结果与空白组比较,模型组肝脏脂滴面积增加(P<0.01),血清TC、TG、LDL-C、IL-18、IL-1β、MCP-1水平和肝组织TC、TG、NEFA、FC水平均升高(P<0.05,P<0.01),血清HDL-C水平和肝组织PPARγ、LXRα、ABCA1、ABCG1蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组和总黄酮中、高剂量组上述指标均有改善(P<0.05,P<0.01)。结论芳香新塔花总黄酮可抑制ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏脂质代谢水平,其机制可能与激活PPARγ/LXRα/ABCA1通路有关。

心脉康增强血管平滑肌细胞自噬改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化

目的探讨心脉康(鳖甲、三棱、莪术等组成)调节血管平滑肌细胞(VSMC)自噬改善动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法72只敲除载脂蛋白E基因(ApoE^(-/-))的小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物(阿托伐他汀钙片)对照组(2.6 mg·kg^(-1))及心脉康低、中、高(30、60、90 g·kg^(-1))剂量组,每组12只。空白组小鼠喂养常规饮食,余下各组喂养高脂饮食12周,建立AS模型。模型复制成功后给予心脉康灌胃6周,每天1次。检测小鼠血清血脂四项:总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C);油红O、HE和Masson染色观察小鼠主动脉根部血管组织病理变化;免疫荧光检测主动脉根部血管组织微管相关蛋白l轻链3B(LC3B)和平滑肌22 alpha蛋白(SM22α)的表达;采用Western Blot法检测主动脉血管组织中LC3B、自噬效应蛋白1(Beclin-1)和SM22α蛋白的表达水平;qRT-PCR法检测主动脉中LC3B、Beclin-1和SM22αmRNA的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠血清血脂四项结果显示,HDL-C下降,TC、TG、LDL-C均升高(P<0.05);油红O、HE和Masson染色结果显示,小鼠主动脉根部血管组织斑块面积增多,内壁增厚并伴有大量胆固醇结晶以及炎症细胞浸润,胶原纤维含量减少;免疫荧光结果显示,LC3B和SM22α共定位面积明显减少(P<0.05);qRT-PCR和Western Blot结果显示,LC3B,Beclin-1和SM22α蛋白及m RNA表达下降(P<0.05)。与模型组比较,心脉康低、中、高剂量组及阳性药物对照组HDL-C水平明显升高,TC、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05);主动脉内斑块面积减少,胆固醇结晶以及炎症浸润降低,胶原纤维含量增多;LC3B和SM22α共定位面积明显增加(P<0.05);LC3B、Beclin-1、SM22α蛋白以及mRNA表达增加(P<0.05)。结论心脉康能降低血脂水平,减少斑块面积,改善动脉粥样硬化,其机制可能与增强血管平滑肌细胞自噬水平有关。