盐霉素联合ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨盐霉素联合Apogossypolone(Apo G2)对鼻咽癌细胞CNE-2的促凋亡作用及其可能的机制。方法:CCK-8测定不同浓度盐霉素和Apo G2单药毒性及联合应用对CNE-2细胞的增殖抑制作用;迁移实验观察单药及联合用药时细胞迁移能力的改变;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;比色法检测caspase-3酶活性变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果:CCK8结果显示,盐霉素及Apo G2对细胞的抑制作用均随着药物浓度的增加而增强,且联合组抑制作用强于单药组。迁移实验结果显示两药均能抑制CNE-2细胞迁移,且联合组强于单药组;Hoechst33258染色显示联合用药后出现更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;caspase-3活性药物组均较对照组增加,且联合组比单药组更明显;流式细胞术检测显示,联合用药后的凋亡率较单药组增加。结论:盐霉素和APOG2联合应用能协同抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移能力,且能诱导细胞发生凋亡。

γ射线辐照外周血单个核细胞联合ApoG2体外杀伤PC-3细胞的效应

目的:观察低剂量辐射外周血单个核细胞联合棉酚衍生物ApoG2对体外培养人前列腺癌PC-3细胞的杀伤作用。方法:采用1Gyγ射线照射人外周血单个核细胞,辐射剂量率为17Gy/min,实验设对照组、照射及未照射的外周血单个核细胞与PC-3细胞共培养组、ApoG2处理组及照射的外周血单个核细胞与ApoG2联合作用组。利用吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色法及MTT法,观察外周血单个核细胞和/或ApoG2对肿瘤细胞的杀伤情况。结果:辐照的外周血单个核细胞及ApoG2处理组对PC-3的杀伤作用明显增强,杀伤活性明显高于未辐照组(P<0.05),而联合作用组的杀伤活性明显高于辐照组及ApoG2处理组((P<0.01)。结论:低剂量辐射外周血单个核细胞联合ApoG2可以明显提高其体外的抗肿瘤效应。

ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬的最低浓度探讨

目的:探究不同浓度棉酚衍生物Apo G2对乳腺癌细胞株MDA-MB231诱导自噬的最低浓度,寻找抗肿瘤效应的最适合浓度。方法:CCK8法检测细胞的增殖活性;透射电镜下观察细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期阻滞情况;细胞免疫荧光法检测各组细胞LC3-II荧光强度;RT-PCR及Western blot法检测细胞自噬蛋白LC3-I及LC3-II表达强度。结果:CCK8法示Apo G2对乳腺癌MDA-MB231细胞呈浓度、时间依赖性抑制增殖且各组间差异存在统计学意义;透射电镜下发现Apo G2可诱导凋亡及自噬;流式细胞仪检测发现Apo G2诱导凋亡呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期且10μmol/L浓度组最明显;细胞免疫荧光法发现10μmol/L组细胞LC3-II荧光最弱;RT-PCR及Western blot法示细胞自噬蛋白LC3-I表达各组间无明显差异,LC3-II在10μmol/L浓度组表达量最弱,80μmol/L浓度组表达量最强。结论:10μmol/L为Apo G2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬最低浓度,也是抑制自噬,促进凋亡的抗肿瘤最适浓度。

ApoG2联合紫杉醇对鼻咽癌细胞及其移植瘤的抑制作用观察

目的探讨新型棉酚衍生物ApoG2和紫杉醇(PTX)联用对鼻咽癌的体内外抑制作用及可能机制。方法将不同浓度PTX、ApoG2单药及两药联用作用于人鼻咽癌CNE-2细胞48 h,采用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率。将12只CNE-2鼻咽癌皮下移植瘤裸鼠模型随机分为四组,对照组不干预,ApoG2组、PTX组及联合组分别予ApoG2、PTX及ApoG2与PTX联合应用(腹腔给药)。观察移植瘤生长情况,计算抑瘤率;采用免疫组化SP法检测各组Bcl-2蛋白表达。结果 ApoG2与PTX单药对细胞的抑制作用随药物浓度提高而增强,呈浓度依赖性;联合用药有协同作用(CDI<1);联合组细胞凋亡率明显高于对照组及ApoG2组、PTX组,P均<0.01;与ApoG2组及PTX组比较,联合组肿瘤体积明显减小(P<0.01),抑瘤率明显升高(P<0.01);Bcl-2表达率显著减低,P均<0.01。结论 ApoG2与PTX联用可协同抑制鼻咽癌细胞及其移植瘤生长;其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关。

ApoG2联合放疗对鼻咽癌CNE-2细胞自噬与凋亡的影响研究

目的探讨ApoG2联合放射治疗对鼻咽癌(NPC)的CNE-2细胞自噬与凋亡的影响。方法将人NPC CNE-2细胞株分成空白对照组(仅加培养液,不加细胞)、放射治疗组、ApoG2组、联合组(放射+ApoG2),采用CCK-8法测定ApoG2+放射治疗对细胞增敏的作用,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态的变化,吖啶橙染色观察细胞自噬形态变化,检测细胞凋亡率的变化;Western bolt检测Beclin1、Bcl-2蛋白的表达情况变化。结果不同的放射剂量组间细胞增殖抑制率比较具有显著性差异(P<0.01),随着放射剂量的增加,鼻咽癌CNE-2细胞的抑制率也随之上升;不同的ApoG2药物浓度组间细胞增殖抑制率比较差异也具有显著性意义(P<0.01),随着药物浓度的增加,鼻烟癌CNE-2细胞的抑制率也上升。4组CNE-2细胞的凋亡率组间比较具有显著性差异,联合组凋亡率显著高于其他3组(F=140.2,P<0.01)。4组的Bcl-2、Beclinl的蛋白表达量组间比较差异具有统计学意义(Bel-2:F=71.24,P<0.01;Beclinl:F=107.53,P<0.01),其中联合组的Bcl-2蛋白表达量最低,Beclinl的蛋白表达量最高。结论ApoG2联合放疗能够通过诱导鼻咽癌CNE-2细胞的自噬与凋亡,从而抑制CNE-2细胞的增殖。

ApoG2对胃癌细胞SGC7901粘附与迁移的影响及机制研究

目的探讨去醛基棉酚醌(ApoG2)对胃癌SGC7901体外细胞粘附、迁移及侵袭能力的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法 ApoG2与胃癌细胞株SGC7901共孵育后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ApoG2对细胞增殖能力的影响;细胞粘附实验和侵袭小室法检测其对细胞粘附及侵袭能力的影响;RT-PCR法检测ApoG2对SGC7901细胞中与转移相关基因的变化。结果 ApoG2能抑制SGC7901细胞的增殖,其细胞的增殖抑制率与浓度成正相关。用20μmol·L-1ApoG2与SGC7901细胞共孵育后,可明显降低SGC7901细胞的粘附、迁移及迁徙能力。ApoG2能有效地抑制胃癌SGC7901细胞中NF-κB mRNA的表达。结论 ApoG2在体外具有抑制胃癌SGC7901细胞转移作用,其分子机制可能与下调NF-κB mRNA的表达有关。

ApoG2联合紫杉醇抑制乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其机制的探讨

目的:研究Apogossypolone(ApoG2)联合紫杉醇在体外应用对人乳腺癌MCF-7的协同抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度紫杉醇及ApoG2单药毒性及两者联合应用对MCF-7细胞的抑制作用,并计算两药相互作用指数(CDI);荧光显微镜观察经Hoechst33258及吖啶橙(AO)染色后细胞凋亡与自噬形态的改变;流式细胞仪检测细胞凋亡率与自噬荧光强度的变化;蛋白质印迹法检测Bcl-2与Beclin1蛋白表达情况。结果:MTT检测提示,不同浓度ApoG2、紫杉醇对MCF-7细胞分别作用48h后具有生长抑制作用(FApoG2=156.916,P=0.000;Fpaclitaxel=129.904,P=0.000),两者联合作用48h后,抑制率随着两者药物浓度的增加逐渐增强,两者之间存在交互效应,F=12.402,P=0.000。通过计算CDI<1,两药联合应用具有协同效应。Hoechst33258荧光染色结果显示,联合用药组呈现明显的核固缩和碎裂、染色质凝集和凋亡小体形成的凋亡现象。AO荧光染色结果发现,联合用药组出现胞质和核仁被染成亮红色现象,提示酸性自噬泡的存在。FCM检测表明,不同处理组凋亡率及自噬率差异有统计学意义(F凋亡率=571.563,P凋亡率=0.000;F自噬率=204.422,P自噬率=0.000)。联合作用组细胞凋亡率和自噬率均较单独处理组升高,P<0.05。免疫蛋白印迹检测表明,不同处理组Beclin1和Bcl-2蛋白表达差异有统计学意义(FBeclin1=57.266,PBeclin1=0.000;FBcl-2=138.495,PBcl-2=0.000);两者联合作用组Beclin1蛋白表达较单独处理组升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达较单独处理组降低,P<0.05。结论:ApoG2与紫杉醇联合作用于MCF-7细胞,具有协同抑制作用,其机制可能与促进MCF-7细胞发生凋亡和自噬有关。

ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的观察

目的:研究新型棉酚衍生物ApoG2在体外应用对鼻咽癌CNE-2细胞凋亡与自噬的影响。方法:CCK-8检测增殖抑制率;Hoechst 33258染色、吖啶橙(AO)染色、透射电镜观察细胞凋亡与自噬形态学变化;FCM检测凋亡率与自噬荧光强度;蛋白质印迹法检测Bcl-2和Beclin1蛋白表达情况。结果:CCK-8法结果显示,不同浓度的ApoG2作用于CNE-2细胞24、48和72h后,均可见对细胞具有生长抑制作用,且呈剂量-时间依赖性。72h的IC50值为23.61μmol/L。Hoechst33258染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;AO染色显示,ApoG2作用后可观察到更多的亮红色酸性自噬泡。透射电镜可观察到细胞体内大空泡及膜性双层结构增多。FCM检测显示,对照组和ApoG2组凋亡率分别(3.83±0.23)%和(20.06±2.10)%,差异有统计学意义,F=176.823,P=0.000。FCM检测显示,对照组和ApoG2组自噬荧光强度分别为(1.05±0.54)%和(26.91±7.65)%,差异有统计学意义,F=34.019,P=0.004。蛋白质印迹法显示,Bcl-2蛋白表达下调差异有统计学意义,F=68.909,P=0.001;Beclin1蛋白表达上调差异亦有统计学意义,F=497.906,P=0.000。结论:ApoG2在体外可以抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖并诱导细胞凋亡与自噬。

Apogossypolone诱导前列腺癌PC-3细胞在体外的自噬

目的研究ApoG2对前列腺癌PC-3细胞在体外的作用,了解其杀伤肿瘤细胞的机制。方法采用MTT法、吖啶橙染色、透射电镜、流式细胞技术、Western blot、免疫组织化学等方法观察了ApoG2对PC-3细胞的自噬与凋亡的诱导作用。结果 ApoG2可明显抑制PC-3细胞增殖;ApoG2作用于PC-3细胞72小时可诱导细胞自噬;加入自噬抑制剂3-MA可增强ApoG2诱导凋亡作用;ApoG2可以增强细胞内LC-3Ⅱ及Beclin-Ⅰ的表达,降低Bcl-2的表达水平。结论 ApoG2主要以诱导PC-3细胞发生自噬为主,抑制自噬可以促进凋亡的发生。

Inhibitory effects of apogossypolone on subcutaneous implants of human LNCaP prostatic carcinoma cells

Objective:The aim of this study was to investigate the inhibitory effect of apogossypolone (ApoG2) on subcutaneous implants of human LNCaP prostatic carcinoma cells, and explore its mechanism. Methods:To establish human LNCaP prostatic carcinoma cell line subcutaneous xenograft models and observe the inhibitory effect of ApoG2 on the tumor model. Immunohistochemistry was employed to observe the expression of Bcl-2, PCNA, CD31, caspase-3 and-8 in tumor tissues. The microvessel density was calculated. Results:ApoG2 could obviously inhibit the growth of subcutaneous prostatic carcinoma implant. ApoG2 decreased the expression of PCNA and CD31, and increased the expression of caspases-3,-8 in tumor tissues. Conclusion:ApoG2 has an inhibitory effect on prostatic carcinoma implants.

Apogossypolone对乳腺癌MCF-7细胞株放射增敏的体外实验研究

[目的]探讨Apogossypolone(ApoG2)对乳腺癌MCF-7细胞株的放射增敏作用及其作用机制。[方法]①MTT法检测ApoG2单药对MCF-7细胞的抑制率,确立细胞半数抑制浓度(IC50)。②根据MTT结果选取低浓度(<IC50)的ApoG2进行克隆形成实验,检测ApoG2对MCF-7细胞的放射增敏作用。③流式细胞仪检测经ApoG2、射线及两者联合作用细胞的凋亡率及自噬荧光强度。④Western Blot检测经ApoG2、射线及两者联合作用细胞的Bcl-2及Be-clin1蛋白表达情况。[结果]ApoG2对乳腺癌细胞株MCF-7细胞的抑制作用随药物浓度的升高,抑制率明显增强,呈一定的剂量依赖性。平板克隆形成实验表明不同浓度ApoG2作用后SF2、Do和Dq均低于照射组。流式细胞技术检测结果显示,与照射组比较,ApoG2与射线联合作用可增加MCF-7细胞凋亡率及自噬荧光强度(P<0.05)。Western Blot结果表明,与照射组比较,ApoG2与射线联合可明显上调Beclin1表达,下调Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。[结论]A-poG2对MCF-7乳腺癌细胞株有放射增敏作用,其作用机制不仅与诱导细胞发生凋亡有关,还涉及自噬。自噬可能起到主要抑制作用。