表没食子儿茶素没食子酸酯对APP/PS1转基因小鼠认知功能和海马自噬的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对APP/PSl转基因小鼠海马神经元自噬的作用。方法8月龄APP/PSl转基因小鼠随机分为模型组(Tg)、EGCG低剂量组(Tg/EGCG-L)、高剂量组(Tg/EGCG-H),同月龄C57BL/6J小鼠作为对照组(NT)。采用Morris水迷宫检测各组小鼠学习、记忆能力;Western blot检测各组小鼠海马ULK1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的蛋白表达;免疫组织化学方法检测mTOR的表达;ELISA法检测Aβ1-42水平。结果与NT组比较,Tg组小鼠寻找平台的逃避潜伏期延长及穿越目的象限的次数减少(P<0.05),海马ULK1表达降低、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Aβ1-42表达升高(P<0.05),EGCG治疗组较Tg组各异常指标均明显改善(P<0.05)。结论EGCG可以改善APP/PSl小鼠空间学习记忆能力,其机制可能与提高海马神经元自噬活性,减少脑内Aβ沉积有关。

S14G-humanin对APP/PS1转基因小鼠认知功能和脑胰岛素抵抗的影响

目的Humanin(HN)是从AD患者大脑提取的线性多肽,S14G-humanin(HNG)是其衍生物,HNG可通过减轻炎症反应、抑制氧化应激、改善神经突触功能、减少细胞凋亡等机制发挥神经保护作用。该文探讨HNG对痴呆模型小鼠脑胰岛素抵抗及认知的作用。方法APP/PSl转基因小鼠分为模型组(transgenic,Tg)及HNG治疗组(transgenic/HNG,Tg/HNG),对照组(control group,CG)选用同月龄C57BL/6J小鼠。Morris水迷宫实验评估小鼠的空间学习记忆能力;免疫组织化学方法检测IRS-1磷酸化产物IRS-1pSer636的表达;Western blot法检测小鼠海马胰岛素抵抗相关蛋白IRS-1、IRS-1pSer636、Akt、p-Akt的表达;ELISA法检测小鼠脑内Aβ1-42水平。结果与CG组比较,Tg组寻找平台的逃避潜伏期延长(P<0.05)、穿越原平台所在目的象限的次数减少(P<0.05),海马p-Akt表达降低、IRS-1pSer636表达升高(P<0.05);经HNG治疗后各异常指标均明显改善(P<0.05);各组总IRS-1、Akt蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论HNG可减轻APP/PSl小鼠脑胰岛素抵抗、减少脑内Aβ沉积有关,从而改善空间学习记忆能力。

橄榄油改善淀粉样前体蛋白／早老素双转基因B6C3-Tg鼠认知功能的作用及机制

目的:探讨橄榄油改善淀粉样前体蛋白/早老素双转基因B6C3-Tg鼠(APP/PS1鼠)认知功能的作用及机制。方法:将16只5月龄B6C3-Tg小鼠和4只同月龄野生型小鼠分为5组:正常对照组,阳性对照组,橄榄油组,脱脂橄榄油组和β谷固醇(BS)组。正常对照组和阳性对照组小鼠用生理盐水灌胃;橄榄油组、脱脂橄榄油组和BS组小鼠则分别用橄榄油、脱脂橄榄油和BS溶液灌胃。3周后用水迷宫检测小鼠认知功能;高效液相色谱法(HPLC)检测脑组织细胞膜内BS含量;ELISA法检测脑内淀粉样前体蛋白(APP)代谢产物(sAPPα和Aβ)水平;免疫组化法检测脑内Aβ沉淀情况。结果:定位航行实验显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠的逃避潜伏期显著延长(P<0.01);而橄榄油组和BS组小鼠的逃避潜伏期与正常对照小鼠无明显差异。空间探索实验显示:阳性对照组和脱脂橄榄油组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例低于正常对照小鼠(P<0.01);而橄榄油组和BS组小鼠在目标象限的游泳距离占总的游泳距离的比例与正常对照小鼠无明显差异。HPLC分析显示,仅在橄榄油组和BS组小鼠的脑组织细胞膜内可检测到BS。ELISA和免疫组化结果显示:与正常对照小鼠相比,阳性对照和脱脂橄榄油组小鼠脑内Aβ生成增加(P<0.01),而sAPPα含量则无明显改变。橄榄油组和BS组小鼠脑内sAPPα含量与正常对照组小鼠相比有所增加(P<0.01),但Aβ的表达较阳性对照小鼠明显减少了(P<0.01)。结论:橄榄油可改善APP/PS1鼠的认知功能,其机制可能与BS在脑内的聚集以及BS对脑组织APP代谢的调节作用有关。

地黄饮子对APP／PS1小鼠行为学和RAGE／p38信号通路的影响

目的研究地黄饮子（DHYZ）对APP／PSl双转基因痴呆小鼠行为学及RAGE／p38信号通路的影响。方法将20只APP／PS1双转基因痴呆小鼠随机分为模型组、DHYZ组，每组10只；另以10只同背景同月龄的C57BL／6J阴性小鼠为空白组。DHYZ组小鼠给予地黄饮子相当于生药9．75g·kg^-1·d^-1胃，模型组和空白组小鼠给予等量蒸馏水灌胃。各组灌胃30d进行Morris水迷宫空间探索实验。采用DCFH—DA法检测脑组织ROS含量，qPCR检测皮层、海马RAGE基因表达，Westernblot检测皮层、海马磷酸化p38（p-p38）蛋白表达。结果与模型组相比，DHYZ组第5天穿越平台区次数[（0．893±0．283）次]和穿越有效区次数[（1．607±0．405）次]明显增加（P〈0．05，P〈0．01），DHYZ组有效区停留距离[（23．088±7．083）cm]及时间[（1．961±1．230）S]均明显延长（P〈0．05，P〈0．01）。DHYZ组脑组织ROS平均荧光强度（122．611±7．630）降低（P〈0．01），皮层及海马RAGE基因相对表达量（1．467±0．081，7．983±0．136）均下调（均P〈0．01），皮层及海马p-p38蛋白相对表达量（0．376±0．026，0．538±0．016）下调（P〈0．01，P〈0．05）。结论DHYZ可能通过抑制RAGE／p38信号通路提高APP／PS1鼠空间探索记忆能力。

黄芪多糖对APP/PS1转基因小鼠认知功能的自噬及凋亡的改善作用机制研究

目的探讨黄芪多糖对APP/PSl转基因小鼠海马神经元自噬及凋亡的作用。方法按照体重将APP/PSl转基因小鼠随机分为2组:模型组、实验组;将同月龄C57BL/6J小鼠作为对照组。实验组腹腔注射5 mg·kg^-1·d^-1黄芪多糖1 mL,模型组和对照组腹腔注射双蒸水1 mL·d^-1,给药4周。Morris水迷宫法检测各组小鼠学习和记忆能力;蛋白质印迹法检测各组小鼠海马B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、自噬调控因子(Beclin-1)、选择性自噬接头蛋白(P62)、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)和溶酶体关联膜蛋白(LAMP2)的表达;原位末端标记法(TUNEL)检测皮层神经元的细胞凋亡;免疫组化法检测海马β-淀粉样蛋白(Aβ)斑块沉积(光密度值)。结果对照组、模型组和实验组第5天寻找平台的逃避潜伏期分别为(29.13±2.26),(43.87±1.98)和(38.97±1.78)s;这3组的Bcl-2蛋白相对表达量分别为0.72±0.03,0.31±0.01和0.55±0.04;这3组的LAMP2蛋白相对表达量分别为0.81±0.05,0.52±0.03和0.72±0.02;这3组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白相对表达量分别为0.35±0.03,0.65±0.04和0.50±0.02;这3组的P62蛋白相对表达量分别为0.39±0.04,0.79±0.05和0.51±0.03;这3组的Beclin-1蛋白相对表达量分别为0.91±0.06,0.55±0.02和0.74±0.04;这3组的Aβ斑块沉积分别为40±3.25,492±9.32和320±7.58。上述指标:模型组与对照组比较、或实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪多糖可以改善APP/PSl小鼠空间学习记忆能力,其机制可能与提高海马神经元自噬活性、下调细胞凋亡和减少脑内Aβ沉积有关。

S14G-humanin对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用及其机制研究

目的探讨S14G-humanin(HNG)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老蛋白-1(PS1)双转基因小鼠空间学习记忆能力和海马神经元自噬功能的影响。方法将16只APP/PS1双转基因小鼠按随机数字表法分为模型组、HNG治疗组,每组8只;另取8只C57BL/6J小鼠作为对照组。对照组和模型组小鼠每天腹腔注射0.5 mL双蒸水,HNG治疗组小鼠每天腹腔注射0.5 mL HNG(50μg/kg)。连续注射4周后采用Morris水迷宫实验检测各组小鼠的空间学习记忆能力,采用Western blotting、RT-PCR实验分别检测各组小鼠海马泛素化激酶1(ULK1)、P62、兔抗微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ及组织蛋白酶D蛋白和mRNA的表达,采用免疫组化染色检测各组小鼠海马神经元β淀粉样蛋白(Aβ)的沉积。结果Morris水迷宫实验显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠的逃避潜伏期依次延长,穿梭原平台所在象限次数依次减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting、RT-PCR检测显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠海马ULK1蛋白和mRNA的表达依次减少,P62蛋白和mRNA的表达依次增加、LC3Ⅱ蛋白/LC3Ⅰ蛋白和LC3ⅡmRNA/LC3ⅠmRNA值依次增加、组织蛋白酶D蛋白和mRNA的表达依次减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫组化染色检测显示对照组、HNG治疗组、模型组小鼠海马神经元Aβ阳性表达依次增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HNG可提高APP/PS1双转基因小鼠海马神经元的自噬活性,减少脑内Aβ的沉积,从而改善小鼠的空间学习记忆能力。