蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的保护作用

目的:研究蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y细胞的作用,以探讨其可能的作用机制。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,并转染APP595/596基因,体外构建研究Aβ致病作用的细胞模型。采用CCK-8法检测细胞存活率;检测LDH评价细胞的损伤程度;流式细胞术检测细胞凋亡;用RT-PCR和Western blot法检测β-分泌酶(又称β位点APP裂解酶1,β-site APP cleaving enzyme 1,BACE 1)的mRNA及蛋白的表达;采用免疫荧光细胞化学和Western blot法检测Aβ的表达。结果:蛇床子素对转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞有保护作用,可增加细胞的存活率,降低LDH的释放,抑制细胞的凋亡,减少BACE1的mRNA与蛋白的表达,抑制Aβ的生成。结论:蛇床子素可保护转染APP595/596基因的SH-SY5Y神经细胞,其保护机制可能与减少BACE l的mRNA与蛋白表达有关。

阿尔茨海默病pcDNA3.1/APP595/596质粒的构建研究

目的构建人类阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白(APP)真核表达质粒,为深入研究该病发病机制提供基础。方法从原始质粒克隆模板中,利用PCR方法扩增目的基因APP695cDNA,将目的基因和目的载体pcDNA3.1分别酶切;纯化酶切产物后定向连接,并将其转化细菌感受态细胞,对生长出的克隆行PCR鉴定,PCR鉴定为阳性的克隆送测序并行比对分析。结果应用DNAStar软件对阳性克隆测序结果与GenBank中APP基因序列比对,证实原序列中的错义突变G已被突变回C,第4位点碱基定点突变完成。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1/APP595/596,为建立阿尔茨海默病转基因细胞模型奠定基础。