基于PINK1-Parkin线粒体自噬通路探讨海昆肾喜含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用

目的研究海昆肾喜(haikun shenxi,HKSX)含药血清对N2a/APP695细胞的神经保护作用及机制。方法制备HKSX含药血清,高效薄层色谱(high performance thin layer chromatography,HPTLC)对其成分进行分析。应用含药血清干预N2a/APP695细胞,MTT检测HKSX含药血清的细胞毒性;ELISA检测Aβ_(1-42)含量;JC-1法检测线粒体膜电位、DCFH-DA法检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、ATP检测试剂盒检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)评价线粒体功能;免疫印迹法(Western blot)检测PTEN诱导的激酶1(PTEN induced putative kinase 1,PINK1)、Parkin、p62、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-proteinlight chain-3,LC3)及p-Tau S396蛋白的表达;设置线粒体自噬抑制剂Mdivi-1干预组,Western blot检测PINK1、Parkin、p-Tau S396蛋白表达,ELISA检测Aβ_(1-42)含量,验证HKSX的神经保护作用是否与线粒体自噬密切相关。结果与模型对照组(MC)相比,HKSX低、中、高剂量组Aβ_(1-42)含量明显降低,高剂量组尤为明显(P<0.01);线粒体膜电位及ROS含量明显降低(P<0.01)、ATP含量升高(P<0.01);PINK1、Parkin(P<0.01)及LC3Ⅱ(P<0.01)的表达增加,而p62的表达降低(P<0.01),p-Tau S396蛋白亦降低(P<0.01);而Mdivi-1的干预,在很大程度上抑制了HKSX对PINK1、Parkin蛋白的活化(P<0.01)及对p-Tau S396和Aβ_(1-42)的清除(P<0.01),表明HKSX的神经保护作用依赖于PINK1-Parkin信号通路。结论HKSX能够提高线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin蛋白的表达,激活线粒体自噬,提高线粒体功能,抑制Aβ及p-Tau S396蛋白在神经细胞中的沉积,发挥神经保护作用,从而起到防治AD的效果。

三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞凋亡和功能的影响

目的以APP695MT基因转染PC12细胞为细胞模型,研究三羟基异黄酮(GST)对模型细胞凋亡和功能的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、APP695转染组、GST干预组。应用激光共聚焦显微技术检测PC12细胞凋亡率,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果 APP695转染组与对照组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较细胞凋亡率降低(P<0.01),CA分泌量均明显增加(P<0.01)。结论 GST可降低APP695MT基因转染引起的PC12细胞凋亡率,同时也可提高CA的分泌量,对转染细胞有一定的保护作用,并能改善其生理功能。

APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用

目的:构建针对APP695的siRNA慢病毒载体,并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法:设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列,同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列,将以上寡核苷酸序列退火后连入pFU-GW-iRNA质粒,酶切和测序鉴定后,将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞,产生具有感染能力的慢病毒颗粒,并感染SH-SY5Y细胞,分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组;应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695mRNA的表达水平。结果:酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒;各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒;感染SH-SY5Y细胞72h后,不同组别APP695mRNA表达水平不同(F=554.442,P<0.001),APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论:成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体,该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695mRNA的表达。

GST对转染APP695基因PC12细胞形态和增殖能力的影响

目的:观察APP695MT基因转染对PC12细胞形态和增殖能力的影响及植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)的干预作用,初步探讨GST对表达APP695MT基因PC12细胞的保护作用。方法:以pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常PC12细胞,电镜观察各组细胞形态学改变,细胞计数方法检测各组细胞增殖能力差异。结果:电镜下观察可见正常对照组与空载组细胞形态无差异,细胞形态结构正常,无明显病理改变;APP695转染组细胞胞体肿胀,线粒体髓样变和空泡样变,胞核扭曲凹陷,异染色质边集;GST干预组较APP695转染组细胞形态明显改善,线粒体髓样变和空泡样变明显减少,胞核凹陷明显减轻。细胞计数结果显示,在各细胞计数时间点,与正常对照组比较,空载组细胞数目无显著变化(P>0.05),APP695转染组PC12细胞数目减少(P(0.01),细胞生长增殖能力明显受到抑制;GST各剂量处理组与APP695转染组比较细胞生长增殖能力均有不同程度的增强(P(0.01)。结论:GST能改善突变型APP695基因转染引起的PC12细胞病理变化,并提高其增殖能力,对转染细胞有一定的保护作用。

三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用

目的探讨植物雌激素三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695基因转染PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,将细胞分为对照组、空载组、APP695转染组、GST干预组。应用流式细胞仪测定细胞凋亡率,免疫细胞化学SABC法和Western blot方法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的表达。结果 APP695转染组与空载组比较,PC12细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3为强阳性表达(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较,PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.01),Caspase-3的免疫反应产物明显减弱(P<0.01),且15μmol.L-1和20μmol.L-1 GST处理组与5μmol.L-1和10μmol.L-1 GST处理组比较,Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显(P<0.01)。结论 GST能降低APP695基因转染的PC12细胞凋亡率,其机制可能与减少凋亡蛋白Caspase-3的表达有关。

Genistein对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用

目的观察Genistein(GST)对APP695转染PC12细胞凋亡的保护作用。方法将培养的PC12细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组。采用流式细胞术检测PC12细胞凋亡率。结果 APP695转染组与正常对照组比较,PC12细胞存活率明显降低,凋亡率明显升高(P<0.01)。GST干预组与APP695转染组比较,细胞存活率显著升高,凋亡率显著降低,其中1μmol/L GST组与APP695转染组比较,细胞凋亡率降低(P<0.05),5μmol/L GST组较APP695转染组细胞凋亡率则明显降低(P<0.01)。结论 GST对APP695基因转染引起的PC12细胞损伤有一定的保护作用。

GST对转染APP695基因PC12细胞β淀粉样蛋白表达和形态功能的影响

目的:观察三羟基异黄酮(Genistein,GST)对APP695转染PC12细胞β淀粉样蛋白(Aβ)表达和形态功能的影响。方法:用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP/APP695MT表达载体转染正常的PC12细胞,神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞72 h后,放射免疫法测定Aβ的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞形态学的变化,荧光分析法测定儿茶酚胺类(CA)分泌量。结果:APP695转染组与对照组比较Aβ生成量明显增加(P<0.01),细胞突起数量少、突起长度较短,CA分泌量明显降低(P<0.01);GST干预组与APP695转染组比较Aβ生成量减少(P<0.05),细胞突起数量增多、突起较长,CA分泌量明显增加(P<0.01)。结论:GST能减少APP695基因转染引起的PC12细胞Aβ的表达,改善细胞分化程度,提高CA的分泌量,对转染PC12细胞具有一定的保护作用。

5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞应激损伤的保护作用

目的探究5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞(APPsw细胞)氧化应激损伤的保护作用。方法将APPsw细胞传代培养24 h后,加入不同浓度(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)的A7预处理24 h,再加入200μmol·L^-1过氧化氢(H 2 O 2)继续培养24 h,用MTT法检测细胞活性,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7可剂量依赖性地增加过氧化氢处理后的细胞活力,经不同浓度的A7预处理后,加过氧化氢处理组的细胞活性明显低于对应单独A7处理组的细胞活性,但均高于单独过氧化氢处理组的细胞活性,差异具有统计学意义(P<0.05)。经不同浓度A7预处理后,加过氧化氢处理组与过氧化氢组比较细胞核中荧光显著变暗。过氧化氢组细胞早凋率为42.4%,A7(0.01,0.1,1.0和10μmol·L^-1)预处理24 h后加过氧化氢处理组细胞早凋率分别为22.7%,19.9%,16.4%和15.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导APPsw细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡。

Genistein对APP695基因转染PCI2细胞Caspase-3表达的影响

目的利用APP695MT基因转染PCI2细胞为细胞模型，观察植物雌激素三羟基异黄酮（GST）对PCI2细胞中Caspase-3表达的影响，初步探讨GST对表达APP695MT基因PCI2细胞的保护作用及其相关机制。方法将培养的PCI2细胞分为正常对照组、APP695转染组、GST干预组，免疫细胞化学SABC法检测凋亡相关蛋白Caspase-3在不同处理组PCI2细胞中的表达变化。，结果正常纽及空载组Pc12细胞Caspase-3阳性表达非常弱；与正常对照组比较，APP695转染组PCI2细胞Caspase-3为强阳性表达（P〈0.01）；GST干预组与APP695转染组比较．Caspase-3的免疫反应产物明显减弱（P〈0．01），且15Ixmol／L和201xmol／LGST处理组与5txmol／L和10gmol／LGST处理组比较，Caspase-3的免疫反应产物减弱更明显（P〈0．01）。结论APP695基因转染的PCI2细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达明显增强，GST的干预能显著降低其表达，对神经细胞产生保护作用。

三羟基异黄酮对转染APP695基因PC12细胞周期和凋亡的影响

目的以APP695MT基因转染PCI2细胞为细胞模型，研究三羟基异黄酮（Genistein，GST）对模型细胞周期和凋亡的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP／APP695MT表达载体转染正常的PCI2细胞，将细胞分为空载对照组、APP695转染组、GST干预组。应用流式细胞仪测定检测细胞周期和细胞凋亡率，激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态学变化。结果APP695转染组与空载对照组比较，PCI2细胞在G。和G。期明显增多，而进入s期的细胞减少，细胞增殖指数明显降低[（55．6±0．57）％，P〈0．01]，细胞凋亡率明显升高[（77．10±12．53）％，P〈0．01]；细胞死亡发出的红色荧光明显增多，胞体肿胀，细胞器崩解，细胞核固缩或碎裂。GST（15μmol／L）干预组与APP695转染组比较，PCI2细胞在G0和G1期明显减少，而进入S期的细胞增多，细胞增殖指数明显增加[（61．57±0．47）％，P〈0．01]，细胞凋亡率降低[（46．00±8．43）％，P〈0．01]；细胞死亡发出的红色荧光明显减少，绿色荧光显著增强，细胞形态较APP695转染组好转。结论GST能改善APP695MT基因转染引起的细胞周期阻滞，促进细胞向S期的过渡，降低PCI2细胞凋亡率，对转染细胞有一定的保护作用。

咪达唑仑对氧葡萄糖剥夺后N2a/APP695细胞β淀粉样蛋白的抑制作用及机制

目的探讨咪达唑仑对被剥夺氧和葡萄糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)后的N2a/APP695细胞淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)代谢变化的影响及机制。方法将处于对数生长期的N2a/APP695细胞用平衡盐缓冲液冲洗后随机分为空白组、对照组及实验组。空白组未经OGD处理,在正常培养箱内培养;对照组行OGD处理后继续培养复氧;实验组在OGD处理后加入不同浓度(分别为70、100、125、150 ng/ml)的咪达唑仑继续培养复氧。24 h后用AnnexinV-FITC/双染法流式细胞术检测各组细胞凋亡比例;用Western blot方法检测各组细胞的Caspase-3、Aβ1-42、解整合素金属蛋白酶10(adisintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10)、β-淀粉样前体蛋白水解酶1(β-site APP cleavage enzyme-1,BACE1)、早老素1(presenilin 1,PS1)蛋白水平。结果与空白组相比,对照组的细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ1-42、BACE1及PS1水平显著升高(P<0.05);APP及ADAM10水平无明显变化(P>0.05)。与对照组相比,实验组细胞凋亡比例、Caspase-3、Aβ1-42显著下降(P<0.05);咪达唑仑70 ng/ml组BACE1显著下降(P<0.05),而APP、ADAM10及PS1无明显变化(P>0.05)。结论OGD可通过上调BACE1及PS-1导致Aβ1-42表达增加促使细胞凋亡;而咪达唑仑可通过下调BACE1减少Aβ1-42表达进而减少神经细胞凋亡,发挥对OGD损伤后N2a/APP695细胞的保护作用。

三羟基异黄酮对APP695基因转染PC12细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的观察植物雌激素三羟基异黄酮（genistein，GST）对APP695基因转染PCI2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法用pIRES2-EGFP空载体和pIRES2-EGFP／APP695MT表达载体转染正常PCI2细胞，将细胞分为正常对照组、空载转染组、APP695转染组和GST干预组（5tLmol／L、15Ixmol／L）。采用免疫细胞化学SABC法和免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2在PCI2细胞中的表达。结果免疫细胞化学SABC法结果显示，与正常对照组比较，APP695转染组PCI2细胞Bax蛋白细胞阳性表达率显著升高[（78．02±1．26）％，P〈0．01）]，Bcl-2蛋白细胞阳性表达率则明显降低[（15．40±0．72）％，P〈0．01）]；15~mol／LGST组与APP695转染组比较，Bax蛋白的阳性细胞表达率显著降低[（22．35±0．49）％，P〈0．01）]，而Bcl-2蛋白的阳性表达率明显增强[（68．11±0．24）％，P〈0．01）]。Westernblot结果表明，APP695转染组与对照组比较Bax蛋白的表达量明显增多，Bcl-2蛋白表达则明显降低；GST各处理组与APP695转染组比较，Bax蛋白的表达量明显降低，Bcl-2蛋白表达显著增强。结论GST能降低APP695基因转染引起的PCI2细胞内Bax蛋白表达的水平，而提高Bcl-2蛋白的表达水平，对PCI2细胞产生保护作用。

慢性三氯化铝染毒对大鼠脊髓组织细胞和APP695 mRNA表达的影响

目的探讨慢性铝染毒对大鼠脊髓的组织细胞学和β-淀粉样前体蛋白695(APP695)mRNA表达的影响及二者的关系。方法6月龄雌性SD大鼠20只,随机等分为正常组和染毒组。腹腔注射浓度为9mg/ml的AlCl3溶液染毒大鼠,每次1ml,每连续注射3天,间隔1天,共计72天。肉眼观察大鼠运动行为的变化。HE染色检测腰部脊髓灰质的组织细胞学变化。RT-PCR检测部脊髓APP695mRNA表达水平。结果与正常组比较,腹腔注射AlCl3溶液后,部分大鼠出现短时间的后肢运动障碍。慢性铝染毒大鼠腰部脊髓灰质内,嗜运动神经元现象明显,卫星现象明显,胶质细胞显著增多,横向神经纤维明显增粗增多,血管周围胶质细胞显著增多,灰质内空泡显著增多。慢性铝染毒大鼠脊髓APP695mRNA表达显著增强。结论三氯化铝溶液可造成短暂性大鼠后肢运动障碍。慢性铝染毒可导致脊髓神经元损伤和死亡,导致胶质细胞增多和灰质空泡变性等。APP695mRNA表达增高参与了上述脊髓神经元损伤过程。

携带绿色荧光蛋白基因的APP695真核细胞表达载体的构建及鉴定

目的构建大鼠淀粉样前体蛋白（APP）695基因真核细胞荧光表达载体，进行细胞转染、表达，为阿尔茨海默病（AD）治疗药物的研究提供一种有效的细胞模型。方法设计并合成APP695基因的引物．以携带APP695基因的真核细胞表达载体pCB6质粒为模板，PCR扩增得到APP695基因全序列：将APP695基因连接到携带绿色荧光蛋白基因的载体pIRES2-EGFP上；应用酶切分析、PCR检测及DNA测序分析等鉴定所构建的真核细胞表达载体。结果以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知APP695基因大小相同，酶切也得到目的基因片段，测序结果显示与已知APP695基因序列相同。结论成功构建了携带绿色荧光蛋白基因的APP695基因真核细胞表达载体,为AD治疗药物的研究提供了一种有效的分子工具。

PACS-2在阿尔茨海默病发展中作用机制研究

目的探究磷酸呋喃酸性簇分选蛋白-2(phosphofurin acidic cluster sorting protein-2,PACS-2)在N2a/APP695swe细胞线粒体功能及细胞凋亡中的参与作用,进一步探讨PACS-2在阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)发生、发展中的作用及意义。方法CCK8法分析不同浓度的二苯乙烯苷(tetrahydroxy stilbeneglycoside,TSG)处理N2a/APP695swe细胞48h后的细胞存活率,选择合适浓度的TSG用于后续实验。体外常规培养N2a/WT细胞和N2a/APP695swe细胞,实验细胞分为3个组:空白对照组(WT组):N2a/WT细胞;模型组(APP组):N2a/APP695swe细胞;治疗组(TSG组):N2a/APP695swe细胞,合适浓度的TSG干预。TUNEL法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,JC-1法流式检测细胞线粒体膜电位,Westernblot(WB)检测PACS-2的蛋白表达情况,RT-qPCR检测PACS-2的mRNA表达情况。结果CCK8法分析不同浓度的TSG作用细胞48h后的细胞存活率:100μmol/L的TSG保护作用最显著,差异有统计学意义(P<0.01);TUNEL法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,与WT组相比,APP组的凋亡率升高,与APP组相比,TSG组的凋亡率降低,差异有统计学意义(P<0.05);JC-1法检测细胞线粒体膜电位;与WT组相比,APP组的膜电位降低,与APP组相比,TSG组膜电位升高,差异有统计学意义(P<0.05);WB检测PACS-2的蛋白表达:与WT组相比,APP组的PACS-2表达升高,与APP组相比,TSG组的PACS-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05);RT-qPCR检测PACS-2的mRNA表达:与WT组相比,APP组的PACS-2表达升高,与APP组相比,TSG组的PACS-2表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PACS-2在AD的发生、发展中有重要作用,其上调可能促进AD的发生,脑保护药物TSG可能通过下调PACS-2抑制AD模型细胞凋亡并改善线粒体功能发挥细胞保护作用。

突变型人APP基因与增强型绿色荧光蛋白基因融合载体的构建

目的构建携带突变型人淀粉样前体蛋白基因(APP695)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合载体。方法在NCBI上查找APP695的序列,设计引物。以pCB6质粒携带的野生型APP695序列为模板,以突变体引物扩增突变型APP695。将突变型APP695与pIRES2-EGFP连接并测序证实。结果经过酶切鉴定、PCR和DNA测序等方法,证实构建的pIRES2-EGFP/APP695突变型质粒载体序列正确。结论成功构建APP695-EGFP融合基因载体,为研究AD发病的分子机制和治疗时的药物筛选奠定基础。

补肾填精方防治阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆损害的分子机制

目的探讨补肾填精方防治铝致阿尔茨海默病(AD)的分子机制。方法用长期腹腔注射AlCl3复制大鼠动物模型,用RT-PCR检测端脑皮质beta-淀粉样前体蛋白mRNA异构体-APP695mRNA水平,用Y电迷宫仪检测大鼠的学习记忆能力。结果模型组大鼠端脑皮质APP695mRNA的表达水平明显升高(P<0.05),学习记忆能力明显降低(P<0.05)。中药干预后,端脑皮质APP695mRNA表达较模型组明显降低(P<0.01),学习记忆能力明显提高(P<0.05)。结论端脑皮质APP695mRNA表达水平升高与学习记忆能力减低明显相关,通过抑制端脑皮质APP695mRNA的过量表达是补肾填精方防治AD模型大鼠学习记忆能力损害的机制之一。

ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响

目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。 方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。 结果 2 4～ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48～ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。 结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。

缺氧对稳定表达人淀粉样前体蛋白HEK293细胞的存活及阿尔茨海默病相关蛋白表达的影响

目的:探讨缺氧对稳定表达人淀粉样前体蛋白的HEK293细胞(HEK293-APP695)存活及相关蛋白表达的影响,为深入研究缺氧对阿尔茨海默病的调节作用提供稳定的细胞模型。方法:利用缺氧手套箱(0.3%O2)处理HEK293-APP695细胞,CCK-8法检测细胞的存活情况;Western blot检测缺氧条件下阿尔茨海默病(AD)相关蛋白APP、APP-CTFs和BACE1的表达变化。结果:缺氧处理后,HEK293-APP695细胞的存活率明显下降,APP表达降低,其剪切体APP-CTFs表达升高。结论:缺氧导致APP剪切的增多,抑制细胞的存活,提示缺氧可能通过影响BACE1的活性在AD的发病进程中起重要的调节作用。

50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响

目的研究50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响。方法Neuro2a/APP(695)细胞简单随机分为假性辐照组和磁场暴露组(n=3)。暴露条件为1.0 mT 50 Hz正旋波磁场,4 h/d,连续3 d;假性辐照组细胞除无磁场暴露外,余同磁场暴露组。暴露结束后按标准方法送样,进行转录组测序检测,包括样品RNA提取、数据质量评价和数据分析等。结果50 Hz磁场暴露后Neuro2a/APP(695)细胞有141种定性的基因表达发生了明显的变化,其中有129种表达上调、12种表达下调。GO富集分析结果显示,Neuro2a/APP(695)细胞中62种上调差异表达基因涉及432类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程337类、细胞组分16类、分子功能79类;3种下调差异表达基因共涉及275类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程260类、细胞组分5类、分子功能10类。KEGG通路分析显示,这些差异基因可能参与了20条KEGG通路,其中2个下调差异表达基因通路,18个上调差异表达基因通路。结论50 Hz磁场暴露可能对Neuro2a/APP(695)细胞的黏附连接、Hippo信号通路、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素、蛋白消化和吸收和甘露糖型O-聚糖生物合成等方面产生影响,以上通路可能是50 Hz磁场对Neuro2a/APP(695)细胞产生影响的主要途径。