蜡样芽胞杆菌YSQ08碱性蛋白酶aprA基因在毕赤酵母中的表达

从蛇消化道内容物分离出的一株产角蛋白酶菌株为蜡样芽孢杆菌YSQ08。通过分析Bacillus cereus ATCC 14579的基因组和蛋白酶家族,对比分析蜡样芽孢杆菌YSQ08纯化角蛋白酶的酶活特性,确定碱性蛋白酶aprA基因(1194 bp)为目标角蛋白酶。为深入研究角蛋白酶的潜在能力,对蜡样芽孢杆菌YSQ08碱性蛋白酶aprA基因在毕赤酵母X33上进行克隆、表达和优化重组。结果其10倍浓缩的角蛋白酶酶活达到122.60 U/mL。经优化后的aprA基因在表面展示重组酵母中得到高效表达,并且具有较高的角蛋白酶活性,酶活最高可达到295.78 U/g干细胞重。酶学性质分析结果表明,表面展示表达的重组aprA蛋白酶性质与天然型相比具有更高的热稳定性,最适反应温度为55℃,最适pH为8.0。Fe^(2+)可显著提高重组蛋白的酶活性,最高可达329.08%。表面展示表达的重组角蛋白酶可作为全细胞固定化催化剂,具有更好的热稳定性并能降低酶的纯化回收成本。

数据处理软件APRAS后台公式应用

APRAS作为统计系统内部的数据处理软件在第二次全国农业普查及其它日常应用中起着非常重要的作用。其审核、汇总、计算等功能均是通过后台公式实现。

铜绿假单胞菌碱性蛋白酶AprA及其抑制剂AprI的表达、纯化和初步的活性验证

目的利用大肠杆菌BL21(DE3)重组表达铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)重要毒力因子碱性蛋白酶(AprA)、碱性蛋白酶抑制剂(AprI)和鞭毛蛋白(flagellin),并检测AprA和AprI的生物学活性。方法以该菌PAO1的基因组为模板,PCR扩增apr A、apr I和flic基因,构建重组表达载体p ET-28a-AprA、p ET-28a-AprI和p ET-28a-鞭毛蛋白,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG诱导表达,将包涵体变性、复性后纯化获得AprA蛋白,通过镍亲和树脂纯化获得AprI和鞭毛蛋白。利用SDS-PAGE检测AprA裂解鞭毛蛋白活性。结果重组蛋白AprA以包涵体的形式表达,AprI和鞭毛蛋白以可溶性形式表达。AprA能裂解鞭毛蛋白,加入AprI可抑制AprA裂解鞭毛蛋白。结论 PAE分泌的AprA蛋白具有裂解鞭毛蛋白的活性,该活性能被AprI抑制。该研究为深入研究PAE的AprA的致病机制奠定了基础。

反式头孢丙烯的酶法合成及其体外抗菌活性

以7-苯乙酰氨基-3-E-丙烯基-3-头孢菌素-4-羧酸(反式GPRA)为原料,在青霉素酰化酶作用下,首先酶法水解得到3-E-丙烯基-3-头孢菌素-4-羧酸(反式APRA),过滤固相酶,滤液调pH分离得到反式APRA固体;在青霉素酰化酶作用下,反式APRA再与对羟基苯甘氨酸乙二醇酯缩合,得到反式头孢丙烯;酶法合成所得的产品与进口反式头孢丙烯对照品一致。初步体外抗菌试验表明,反式头孢丙烯对金葡菌和大肠埃希菌的体外抗菌活性比临床用头孢丙烯(顺式90.0%,反式9%)弱。

珠江沉积物中硫酸盐还原菌的分离筛选及其性质鉴定

由于能够形成可以与重金属反应形成沉淀的硫化物,硫酸盐还原菌对于改善水体质量、确保食品和饮水安全上有着重要意义。从珠江沉积物中分离出一株硫酸盐还原菌SCUT-3,该细菌呈杆状、革兰氏染色为阴性,能够以乳酸、乙酸、丙酸作为唯一碳源,以硫酸盐作为电子受体进行生长,不能以葡萄糖、乙醇等作为唯一碳源,硫代硫酸盐和亚硫酸盐为电子受体进行生长。对该细菌的16S rRNA基因和aprA基因序列进行分析,发现其16S rRNA基因与Desulfovibrio acrylicus的16S rRNA基因的一致性最高,达到87%,其aprA基因与Desulfovibrio vulgaris str.Hildenborough的aprA基因一致性最高(通过blastx比对),达到90%。因此可判断其属于脱硫弧菌属(Desulfovibrio),但两基因的序列与已知序列同源性均不超过91%,判断该细菌属于脱硫弧菌属中的一个新种。

试析秘鲁民众主义发展的“悖论”

秘鲁军队对阿普拉主义运动长期奉行敌视和打击的政策,但是1968年秘鲁军政府上台后,却继承和发扬了阿普拉主义的精髓,这是秘鲁民众主义运动发展的一个"悖论"。这一"悖论"现象产生的原因,从浅层看是"特鲁希略事件"的积怨、寡头集团的阻挠,以及阿普拉党与军队性质的相互转变导致的。从深层看则是秘鲁现代化发展的迟缓、资产阶级力量的不成熟以及阿普拉党政策失误造成的。这一"悖论"现象表明,拉美民众主义运动是现代化转型时期的产物,该时期的一些旧的社会经济发展瓶颈需要借助民众主义运动来打破。一个国家社会经济发展的迟滞性决定了这个国家民众主义运动的迟发性、长期性和曲折性。

基于无线局域网中船舶自动识别通信平台设计

随着现代航运业的发展,国与国之间的海上交流愈加频繁,海上自动识别系统成为保障各国海上安全航行的关键。基于雷达及APRA的传统识别系统技术,识别效率较低,不能满足现代航海需求。计算机网络及数字通信技术的发展,基于AIS的船舶自动识别系统成为其发展方向。本文研究现有的AIS系统,结合海上无线局域通信网络,设计基于无线局域网的自动识别通信平台,实现船舶与监控中心的高效连接。

澳大利亚养老金投资监管研究

通过梳理澳大利亚养老金投资监管的相关法律和养老金监管体系,分析澳大利亚养老金投资监管模式,对APRA当局的监管效率作出评价。

头孢丙烯合成过程中杂质乙氧羰基头孢丙烯的控制

以7-氨基-3-((Z/E-丙烯)-1-基)-3-头孢烯-4-羧酸(7-APRA)和D-对羟基苯甘氨酸邓钾盐为起始原料,经混酐、成盐及缩合反应后,得到头孢丙烯N,N-二甲基甲酰胺溶剂化物,之后用水将DMF置换,得到头孢丙烯一水合物。在混合酸酐制备过程中,加入甲酸,可以减少杂质乙氧羰基头孢丙烯的产生,提高产品质量。

阿普拉斯焊接在白车身的应用及优势

阿普拉斯焊接应用对改善焊接外观质量、适用狭小空间焊接有明显的优势,在白车身上应用也越来越广。简述阿普拉斯焊接的工艺特点与在白车身上应用的优势。

阿亚·德拉托雷的早期思想与其形成原因

维克多·劳尔·阿亚·德拉托雷是美洲人民革命联盟和秘鲁阿普拉党的主要创始人,他的早期思想是对“内外交困的拉美国家路在何方”这一时代命题的回答,其内涵由“拉丁美洲面临的根本问题”、“拉丁美洲历史与现实的特殊性”、“拉丁美洲反帝反封建力量的构成及其领导阶级”和“在拉丁美洲实现社会主义的主体与方式”四个相互关联、层层递进的部分组成。促使他早期思想形成的因素有多个方面,其中最为关键的是20世纪初秘鲁社会转型的时代背景、阿亚的个人经历以及秘鲁国内外思潮的影响。阿亚的早期思想是试图在当时的资本主义和社会主义制度之外开辟“第三条道路”,它立足本土实际,不盲从,不僵化,具有进步意义;但它受社会中间阶层矛盾心理的影响,并将拉丁美洲实际的特殊性夸大为例外性,因而具有一定局限性。尽管如此,阿亚早期思想中的“谋求发展”、“摆脱依附”和“实现社会正义”等核心主张为当时拉丁美洲的社会变革指明了方向,它的进步意义大于局限性。

高脂饲料诱导的肥胖大鼠肠道内硫酸盐还原菌的定量检测

目的检测高脂饲料诱导大鼠肥胖过程中,大鼠肠道内硫酸盐还原菌(sulfate-reducing bacteria,SRB)的数量变化,为研究SRB与肥胖的关系提供参考。方法 20只Wistar大鼠随机分为2组(每组10只),一组饲喂高脂饲料(HFD组)18周,另一组饲喂正常饲料(NCD组,即对照组)18周。以编码腺苷酰硫酸还原酶α亚基的基因(aprA)作为分子标记,通过荧光定量PCR的方法检测两组大鼠在0、8和18周,肠道内SRB的数量变化;同时,以16S rRNA基因作为标记基因定量大鼠肠道内总菌的数量,以计算肠道内SRB在总菌中的比例变化。结果分组饲喂8周后,高脂饲料饲喂组大鼠的体重与正常饲料组相比显著升高。对SRB的定量结果显示,饲喂8周和18周,高脂饲料组大鼠肠道内SRB的数量和含量与正常饲料组相比显著升高。结论大鼠肠道中的硫酸盐还原菌与饮食诱导的肥胖密切相关,为进一步研究SRB在肥胖及其相关代谢疾病的发生发展中的作用提供了依据。