AQC柱前衍生高效液相色谱方法测定康复新液中游离氨基酸和总肽的含量

目的应用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L^(-1)三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:248 nm。结果14种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在2.0~99.7、3.4~168.5、2.8~139.6、4.0~201.4、4.8~238.1、6.7~336.9、3.3~167.5、9.7~487.3、4.1~202.5、4.4~221.6、5.4~270.5、3.3~166.8、4.8~240.8、4.7~236.6μg·mL^(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.9995~1.0000);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为86.8%~108.1%,RSD为2.8%~4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为83.2%~102.7%,RSD为0.1%~3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于5.0%。结论该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法。

AQC柱前衍生法在氨基酸分析测定中的应用

氨基酸分析是生物医药研究工作中十分重要的技术之一,大多数氨基酸和胺类化合物无吸收和荧光发射特征,进行化学衍生化是提高其分析检测灵敏度和特异性的有效手段,其中,AQC柱前衍生法是近几年广为接受的方法。本文对AQC柱前衍生法在氨基酸分析测定中的原理、影响因素及其应用情况进行综述。

AQC柱前衍生化高效液相色谱法测定宝乐果中的游离氨基酸

为了测定宝乐果中游离氨基酸的种类以及含量。该文的样品用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后进行高效液相色谱(HPLC)分析。采用Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为35℃;流动相A为去离子水,流动相B为乙腈,流动相C为10 mmol/L醋酸铵缓冲液(以冰醋酸调至pH 5.10),梯度洗脱,流速为0.8～1.0 mL/min;检测波长为248 nm,同时测定宝乐果中的游离氨基酸。结果得:18种氨基酸在0.02～0.5 mmol/L浓度范围内有良好的线性关系,r均在0.998 3～0.999 2之间;宝乐果中测得14种游离氨基酸,其含量范围为0.087～2.680 mg/g,平均加样回收率为96.9%～106.9%,RSD为0.67%～3.07%。该方法可用于检测宝乐果中游离氨基酸含量,测定的结果为宝乐果质量研究和评价提供了依据。

AQC柱前衍生高效液相色谱法测定啤酒中的21种游离氨基酸

采用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，紫外、荧光双检测器串接，通过梯度洗脱，在AccQ．Tag C18氨基酸专用分析柱上同时分离并定量测定了啤酒中包括天冬酰胺和谷氨酰胺在内的21种游离氨基酸。方法操作简单，准确可靠，具有较高的灵敏度。21种氨基酸在0．01～1．25mmol／L内其浓度与响应值呈线性关系，相关系数（r^2）不小于0．995，大部分氨基酸的加标回收率为92．5％～100．1％。分析了6种啤酒样品，受酵母对氨基酸的同化规律的影响，不同酿造工艺制造的啤酒其氨基酸组成差异明显。

柱前衍生高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中的氨基酸

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定胎盘多肽注射液中游离氨基酸和水解后总氨基酸的方法。方法以α-氨基丁酸为内标,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)为柱前衍生化试剂,采用KromasilC18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,140 mmol/L醋酸铵缓冲液(pH 5.10)和57%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,同时测定胎盘多肽注射液中21种游离氨基酸和水解后氨基酸含量。结果该方法重现性好,精密度高,各氨基酸浓度在0.005～0.50 mmol/L范围内线性关系良好;各氨基酸检出限≤1.57 ng。结论建立的AQC柱前衍生-高效液相色谱法可用于检测胎盘多肽注射液中氨基酸的含量,测定的结果为胎盘多肽注射液的质量研究和评价提供了依据。

两种柱前衍生反相高效液相色谱法测定血液和尿液中游离氨基酸

建立以PITC法和AQC法为柱前衍生试剂测定血液和尿液中游离氨基酸含量的测定方法。采用Waters-e2695操作系统,色谱柱为Shim-vp,ODS(250mm×4.6mm,5μm)(日本,岛津公司),以甲醇/乙腈/水和醋酸钠溶液(pH 6.5)为流动相,梯度洗脱。分别采用紫外和荧光检测器对血液和尿液中游离氨基酸进行含量测定。结果显示,两种衍生化方法灵敏度好、分离度高,具有良好的线性范围(r>0.990 0),准确度高(平均回收率为75.1%～127.0%),进样精密度好(RSD为0.12%～3.42%)。PITC法在尿液中游离氨基酸含量测定中显示了良好的测试准确性;而AQC法测定尿液中组氨酸、苏氨酸、脯氨酸超出线性范围,需要对尿样的前处理进行深入研究。

过甲酸氧化柱前衍生HPLC法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中盐酸半胱氨酸含量

目的建立柱前衍生高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中盐酸半胱氨酸含量的方法,完善质量标准。方法盐酸半胱氨酸被过甲酸氧化后,用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)衍生化,采用Kromasil C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以140mmol·L^(-1)醋酸铵缓冲液(p H 5.00)和乙腈-水(60∶40)溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248nm,进样量5μL。结果盐酸半胱氨酸在1.78~7.11μg·m L^(-1)范围内浓度与峰面积线性相关,相关系数为0.9995;在标示浓度的80%、100%、120%三个浓度水平的平均回收率为97.5%,RSD为2.7%(n=9)。结论本法操作简便,具有较好的灵敏度与重现性。

柱前衍生HPLC法测定复方氨基酸注射液(20AA)中氨基酸含量

目的:建立柱前衍生高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液(20AA)中包括门冬酰胺和盐酸鸟氨酸在内的18种氨基酸含量的方法。方法:以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)为衍生化试剂,以γ-氨基丁酸为内标,采用Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以140 mmol·L^(-1)醋酸铵缓冲液(p H 5.10)和乙腈-水(57∶43)溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为248 nm,进样量5μL。结果:18种氨基酸在1.2~108.8μg·m L^(-1)范围内浓度与峰面积线性相关,相关系数为0.994 7~0.999 7;在标示浓度的80%、100%、120%三个浓度水平的平均回收率为97.4%~103.1%,RSD为1.3%~3.7%(n=9)。结论:本法操作简便,结果准确,优于现行标准的方法。

2种柱前衍生法测定地龙注射液主要氨基酸的含量

目的建立2种柱前衍生HPLC法测定地龙注射液中5种主要氨基酸的含量。方法分别以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯(AQC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)为衍生剂,用Agilent高效液相色谱仪,测定地龙注射液中丙氨酸、缬氨酸、盐酸赖氨酸、异亮氨酸和亮氨酸的含量。结果 2种衍生方法均可实现对地龙注射液中5种氨基酸的分离测定。结论两种方法测定结果基本一致,可根据实际情况应用于地龙注射液的生产和质量控制。

AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ—Tag法，以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，与复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸柱前衍生，用Waters2695 HPLC仪器，AccQ—Tag^TM柱，以醋酸钠（pH4．95）缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5止。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0．9996～0．9999（n=5），平均回收率为93．3％～104．4％（RSD值为0．88％～3．05％，n=6）。结论本法快速，简便，结果准确。

高效液相色谱法测定奶粉及其他乳制品中的L-羟脯氨酸

建立了柱前衍生反相高效液相色谱法测定奶粉及其他乳制品中L-羟脯氨酸的方法。采用酸水解样品,经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC试剂)衍生水解样品中的L-羟脯氨酸,以磷酸盐缓冲溶液、乙腈、水梯度洗脱,流速1.0ml/min,通过symmetry C18柱将L-羟脯氨酸与其他18种氨基酸分离,紫外检测器在248nm波长下检测。测定结果显示,在0～2.05mmol/L范围内,标准曲线呈良好的线性关系(r=0.9991),加样回收率为95.1%～101%,方法精密度RSD(n=7)为1.3%。该方法具有简单、稳定、灵敏度高、准确等优点。

超高效液相色谱法测定特殊医学用途婴儿配方食品中的19种游离氨基酸和牛磺酸

建立超高效液相色谱法同时测定特殊医学用途婴儿配方食品中19种游离氨基酸和牛磺酸的分析方法。样品经α-淀粉酶酶解,调pH值沉淀蛋白等杂质净化,采用6-氨基喹啉基-N-羟基-琥珀酰亚氨基甲酸酯为柱前衍生试剂,以甲酸-甲酸铵缓冲液(20 mmol/L,pH 2.25)为流动相A、甲酸-甲酸铵缓冲液(20 mmol/L,pH 3.00)为流动相B和乙腈为流动相C进行梯度洗脱,经AccQ-Tag Ultra C;色谱柱分离后,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明,胱氨酸浓度在5~125μmol/L之间,其余18种氨基酸和牛磺酸浓度在10~250μmol/L范围内线性良好,相关系数均大于0.999;检出限胱氨酸为1.5μmol/L,其他分析物均为3μmol/L,定量限胱氨酸为5μmol/L,其他分析物为10μmol/L。方法测定的平均回收率为90.16%~109.84%,相对标准偏差均不大于4.77%。该方法操作简单、结果准确、重复性好,可以满足特殊医学用途婴儿配方食品中19种游离氨基酸和牛磺酸的测定,可为企业质量控制和政府监管提供有力的技术支撑。