缩泉丸对肾阳虚多尿大鼠肾脏AQP-2 mRNA与AVPR-V2 mRNA表达的影响

目的:观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2 mRNA和AVPR-V2 mRNA表达的影响。方法:用腺嘌呤250mg/kg灌服大鼠4w,造成肾阳虚多尿模型,分别给予缩泉丸或去氨加压素治疗4w,用实时荧光定量PCR法观察缩泉丸对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏水通道蛋白AQP-2 mRNA及加压素二型受体(AVPR-V2)mRNA表达的影响。结果:肾阳虚多尿模型组大鼠肾脏AQP-2 mRNA与AVPR-V2mRNA表达比正常对照组明显降低(P<0.01),dDAVP组和缩泉丸高剂量组AQP-2 mRNA表达与AVPR-V2 mRNA表达比模型组明显升高(P<0.05);其余给药各组与模型组相比无显著差异(P>0.05)。结论:缩泉丸能提高肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2 mRNA与AVPR-V2 mRNA表达。

从哮喘豚鼠血浆ADH和尿AQP-2的改变探讨肺主宣降的实质

目的:探讨肺气的宣降运动与水液代谢之间的相关性,揭示肺主宣降的实质。方法:豚鼠85只随机分为对照组(40只)和哮喘组(即肺失宣降组,采用卵蛋白致敏法造模,45只),Bradford法检测各组豚鼠尿AQP-2(水通道蛋白2)含量,放免法(RIA)检测血浆ADH(抗利尿激素)浓度。结果:与对照组相比,哮喘组豚鼠小便量显著减少(P<0.05)、血浆ADH及尿AQP-2均显著升高(P<0.05、P<0.01)。结论:肺气宣降运动实质包含对体内水液代谢的影响,其机制是哮喘(肺失宣降)状态下,ADH和AQP-2合成和释放量明显增多,抑制豚鼠体内水液代谢速度,并导致小便量减少。指示性摘要:本论文以哮喘豚鼠为研究对象,探讨肺气的宣降运动与水液代谢之间的相关性,揭示肺主宣降的实质,为中医多角度治疗肺系疾病提供实验依据。

红腹锦鸡肾的组织结构及EGFR、TGF-β、AQP-2在肾脏中的表达

为了解红腹锦鸡肾脏的结构特征,观察表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子-β(TGF-β)、水通道蛋白-2(AQP-2)在肾脏中的表达情况,应用组织学方法及免疫组织化学方法,观察了5只红腹锦鸡肾脏的组织结构,检测了EGFR、TGF-β(TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3)、AQP-2在肾中的表达。结果表明:红腹锦鸡肾脏主要由许多肾单位、集合管和少量结缔组织组成。肾单位是肾脏功能结构的基本单位,它由一个肾小体和一个与其连接的上皮性肾小管构成。血管球由一团迂回盘曲的毛细血管丛构成,结构简单;肾小囊足细胞的突起与毛细血管内皮细胞及基膜紧密相贴,三者构成肾小体的滤过屏障;近端小管由单层立方上皮组成,上皮细胞游离面有许多微绒毛,细胞界限不明显,侧面有许多指状突起彼此交错,质膜内褶较少;远端小管上皮细胞基底面有丰富的质膜内褶;集合管上皮细胞有明细胞和暗细胞两种类型;近端小管上皮细胞呈EGFR、TGF-β免疫反应阳性,集合管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性。EGFR、TGF-β、AQP-2可能发挥着不同的功能,对肾单位的构筑、肾小管和集合管结构的稳定以及肾脏水的平衡等可能有重要的调节作用。

MsPGN湿热型大鼠AQP-2表达及ADH变化的实验研究

目的研究系膜增生性肾炎(MsPGN)湿热型大鼠水通道蛋白-2(AQP-2)的表达及抗利尿激素(ADH)的变化及湿热蕴郁的机制,并探讨慢肾蛋白停对其的影响及作用机理。方法采用手术摘除一侧肾脏加腹腔多次注射牛血清白蛋白(BSA)与大肠杆菌内毒素(LPS)及皮下多次注射完全弗氏佐剂,复制MsPGN湿热模型,慢肾蛋白停予以防治性治疗,测定各组肾组织和血浆AQP-2及ADH。结果模型组大鼠血浆中AQP-2含量明显降低,肾组织AQP-2灰度值和血浆ADH含量明显升高,与正常对照组比较差异有统计意义(P<0.05)。而慢肾蛋白停组、肾炎四位片组能升高血浆AQP-2含量,降低肾组织AQP-2灰度值和血浆ADH含量,与模型组比较差异均有统计意义(P<0.05)。慢肾蛋白停组降低ADH含量较肾炎四位片组显著,两组比较差异有统计意义(P<0.05)。结论AQP-2与MsPGN湿热证表现出密切的相关性。慢肾蛋白停能增加血浆与肾组织AQP-2含量,降低血浆ADH水平。

益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿大鼠AQP-2与AVPR-V2表达的影响

目的:观察益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2与AVPR-V2 mRNA和蛋白表达的影响。方法:通过实时定量PCR(RT-PCR),研究AQP-2(AQP-2)mRNA和加压素二型受体(AVPR-V2)mRNA表达的影响;通过蛋白印迹法(Western blot),研究益智仁盐炙前后对肾阳虚多尿模型大鼠肾脏AQP-2及AVPR-V2蛋白表达的影响。结果:肾阳虚多尿模型大鼠各给药组AQP-2 mRNA和AVPR-V2 mRNA表达倍数(QR)较模型组明显增大(P<0.05),盐炙品组较之生品组AQP-2 mRNA和AVPR-V2 mRNA QR具有显著性差异(P<0.05),各给药组AQP-2、AVPR-V2蛋白表达灰度值也有明显增高(P<0.05)。结论:益智仁生品与盐炙品对腺嘌呤所致肾阳虚多尿模型mRNA和蛋白表达均具较好的改善作用,且盐炙后作用明显增强。

抗菌肽CGA-N12通过lncRNA CASC2/AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡的研究

通过构建小鼠念球菌感染肺损伤模型探讨抗菌肽CGA-N12通过lncRNA CASC2/AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡机制。方法 通过构建小鼠念球菌感染肺损伤模型,实验结束后,取肺组织,检测肺W/d重量比、肺MPO活性等,qRT-PCR检测lncRNA CASC2等分子的表达;western blot检测AQP-1、细胞凋亡相关蛋白表达。结果 在C. albicans诱导的ALI小鼠和肺上皮细胞中,CASC2的表达降低,此外,CASC2和AQP1是相应蛋白表达的靶标,CASC2可以通过调控间接调控AQP1的表达。此外,CASC2和AQP1通过调节靶标来控制上皮细胞的凋亡。结论 通过本次研究验证了lncRNA CASC2与AQP-1靶向结合调控机制。并揭示了抗菌肽CGA-N12通过下调lncRNA CASC2靶向调控AQP-1改善念珠菌感染引起的肺泡上皮细胞凋亡的作用机制。

补肾活血汤对慢性心衰大鼠心功能及AQP-2的影响

目的:探讨补肾活血汤对慢性心衰大鼠的疗效及心肾靶向功能的作用机制。方法:采用32周龄以上自发性高血压大鼠(SHR)为慢性心衰大鼠,分为补肾活血汤高、中、低剂量组(5.7,2.85,1.43 g.kg-1),卡托普利组0.05 g.kg-1、模型对照组,Wistar大鼠为正常对照组,予以相应药物干预,8周后检测超声心动指标及肾脏组织水通道蛋白2(AQP-2)的水平。结果:补肾活血汤可延缓心衰大鼠的左室重构进程,左室后壁厚度(LVAWT)由2.93 mm降至2.72 mm、左室舒张末期内径(LVEDD)由7.65 mm降至7.57 mm、左室收缩末期内径(LVESD)由3.87 mm降至3.68 mm、短轴缩短率(LVFS)由0.44提高至0.48、左室射血分数(LVEF由0.42提高至0.47),药物高、中、低剂量组较模型组有统计学意义(P<0.05);可降低心衰大鼠肾脏组织AQP-2的表达,平均由2.1%降至1.63%(P<0.05),其作用均与药物浓度呈正相关。结论:补肾活血汤可改善慢性心衰大鼠的心功能,并通过降低肾脏组织AQP-2的水平,从而发挥利水改善心室重构的作用。

房角关闭对兔眼小梁组织MMP-2、TIMP-2及AQP-1表达的影响

目的建立兔眼房角关闭模型,比较基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)、水通道蛋白-1(AQP-1)在对照组和模型组表达水平的变化,探讨房角关闭对小梁网功能变化的影响。方法实验研究。健康成年新西兰大白兔24只(48只眼)随机分为4组,每组6只(12只眼),每只随机选取一眼作为实验组,予玻璃体腔注入透明质酸钠联合前房放液,建立房角关闭模型,另一眼不作处理为对照组,应用免疫荧光和计算机图像分析技术分别于造模成功后1个周、1个月、2个月、4个月观察各组MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达情况。结果正常对照组和各实验组均有MMP-2、TIMP-2、AQP-1的表达。MMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);TIMP-2在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05);MMP-2/TIMP-2比值在造模后1个周、1个月组与正常对照组相比无明显差异(P>0.05),而2个月组、4个月组与正常对照组相比差异明显(P<0.05);AQP-1在实验组的表达量随造模时间延长先升高后降低,各组与正常对照组相比均有明显差异(P<0.05)。结论房角关闭早期,小梁网因代偿机制,仍存有部分功能,应尽早采取干预措施。

60例慢性收缩性心力衰竭患者中医证型与血浆AVP、尿液水通道蛋白2的相关性研究

目的:研究慢性收缩性心力衰竭患者不同心功能分级中医证型的分布特点及与血浆AVP、尿液水通道蛋白2的相关性。方法:收集2009年10月—2010年6月60例慢性收缩性心力衰竭住院患者的临床资料,分析不同心功能分级的中医证型分布规律,并检测患者血浆AVP、尿液水通道蛋白2的含量。结果:慢性收缩性心力衰竭心功能Ⅱ级患者气虚证最为常见(30/34,88.2%),其次是阴虚证(21/34,61.8%)、血瘀证(19/34,55.9%),组合证候气阴两虚证最常见(18/34,52.9%);心功能Ⅲ、Ⅳ级患者阳虚证最为常见(22/26,84.6%),其次为气虚证(18/26,69.2%)、水停证(13/26,50%),组合证候阳虚水停证(13/26,50.0%)。阳虚水停型患者血浆AVP、尿液AQP-2浓度与气阴两虚型患者相比较明显升高(P<0.01);心功能Ⅳ级较心功能Ⅱ、Ⅲ级患者的血浆AVP、尿液AQP-2的浓度明显升高(P<0.01),心功能Ⅱ、Ⅲ级患者之间血浆AVP、尿液AQP-2的浓度无明显差别(P>0.05)。结论:随着心功能的恶化,慢性收缩性心力衰竭患者中医证型由气阴两虚向阳虚水停转化,血浆AVP、尿液AQP-2浓度逐渐升高。

丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠肾脏水通道蛋白-2免疫荧光表达的影响

目的 观察中药丝瓜络（RLF）对慢性充血性心力衰竭（CHF）大鼠尿量和肾脏水通道蛋白-2（ AQP-2）免疫荧光表达的影响,探讨RLF的利尿作用及机制.方法采用异丙肾上腺素（ISO）法制备慢性充血性心衰大鼠模型,实验分为4组：正常组、CHF组、RLF大剂量组（10g·kg-1·d-1）和RLF小剂量组（5g·kg-1·d-1）.连续灌胃给药28d,末次给药后30min,采用足趾肿胀法,测量大鼠后肢足趾容积；代谢笼法,连续记录24h尿量；取肾脏髓质,免疫荧光法检测AQP-2的表达.结果丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量,减少后肢足趾容积（P＜0.05）,并可明显抑制心衰大鼠肾髓质AQP-2免疫荧光的过度表达.结论RLF对心衰大鼠有一定利尿作用,其分子生物学机制可能是通过降低肾脏髓质AQP-2蛋白的表达,从而减少水的重吸收.

黄芪多糖对糖尿病大鼠肾脏水通道蛋白2表达的影响及对肾脏的保护作用

目的观察黄芪多糖(APS)对糖尿病(DM)大鼠尿量、肾脏水通道蛋白-2(AQP-2)表达和肾脏超微结构的影响及其治疗DM的机制。方法腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DM大鼠模型,实验分4组:正常组、DM组、APS低和高剂量组,实验持续6w。采用免疫荧光检测各组大鼠肾脏AQP-2的表达,电镜观察各组大鼠肾脏超微结构,简易代谢笼法测各组大鼠24h尿量,并测定大鼠肾重/体重、尿微量白蛋白(UAER)排泄率及内生肌酐清除率(Ccr)等。结果 DM组大鼠肾脏髓质AQP-2表达较正常组明显增多,APS可抑制DM大鼠肾脏AQP-2表达。DM组大鼠肾脏超微结构呈明显退行性变,APS干预可改善其超微结构。DM组大鼠尿量明显高于正常组(P<0.01),APS可增加DM大鼠尿量(P<0.01)。APS低剂量组和高剂量组大鼠UAER、Ccr、肾重/体重低于DM组(P<0.01)。结论 APS下调肾髓质AQP-2过度表达,缓解DM水钠潴留,保护肾脏。

水通道蛋白-2、4在小鼠肾发育过程中的表达

目的观察水通道蛋白-2(AQP-2)和水通道蛋白-4(AQP-4)在小鼠肾脏发育过程中的表达位置,探讨其与肾脏发生发育的关系及作用。方法免疫组织化学SABC法染色和体视学半定量检测AQP-2、AQP-4的表达。结果AQP-2在胚龄17d的胎鼠可以明确检测到,其表达部位为集合管主细胞的管腔膜和胞浆内。体视学测量发现,从胚龄17d开始表达到生后1d的小鼠其管腔膜的面密度值逐渐增加,此后面密度值基本上没有变化。AQP-4在胚龄14d的胎鼠可见到微弱的表达,随着胚龄的增长其表达逐渐增加,到生后1d达到最大水平,以后随着日龄的增加表达量无明显变化,并且在每一个时期的表达量都远远小于AQP-2的表达量。AQP-4的表达部位为集合管的侧基底细胞膜。结论推测AQP-2对小鼠出生后肾脏水平衡的调节作用比较重要,而AQP-4对出生前水平衡的调节作用比较重要。

水通道蛋白-2在小鼠集合管发生发育中的表达

目的研究水通道蛋白-2(AQP-2)在小鼠集合管发生发育中的表达规律并探讨其作用。方法采用免疫组织化学和细胞图像分析系统测定灰度值法检测不同时期AQP-2的表达。结果AQP-2在孕16d的胎鼠检测不到,而在孕17d的胎鼠可以明显的检测到,并随着年龄的增长逐渐增加,在生后3周左右达到稳定水平。结论AQP-2在孕17d的小鼠集合管主细胞的顶浆膜和胞浆内出现,其着色强度随年龄的增加而加强,到成鼠时达到稳定水平,推测可能与尿液的浓缩能力有关。

丝瓜络对心衰大鼠肾脏水通道蛋白-2 mRNA表达的影响

目的观察丝瓜络（RLF）对慢性充血性心衰大鼠尿量及肾脏水通道蛋白-2（AQP-2）基因表达的影响，初步探讨RLF的利尿作用及其分子生物学机制。方法选取Wista大鼠，采用异丙肾上腺素法建立慢性充血性心衰大鼠模型，分别给予RLF5g·kg-1·d-1，10g·kg-1·d-1，灌胃给药，1次／d，连续用药28d。采用代谢笼法，测定各组大鼠24h尿量；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）技术，观察各组大鼠肾脏髓质AQP-2mRNA的表达。结果丝瓜络连续用药可显著增加心衰大鼠尿量并降低心衰大鼠肾脏髓质AQP-2mRNA的表达（P〈0．05）。结论丝瓜络对慢性充血性·心衰大鼠有明显利尿作用，其分子生物学机制可能与降低肾脏髓质AQP-2mRNA的表达有关。

高湿环境中大鼠肾脏AQP2与V2R的表达及意义

目的研究水通道蛋白-2(AQP2)与加压素受体-2(V2R)在高湿环境下在大鼠肾脏中的表达及其意义.方法选择50只SD大鼠,随机将其分成研究组和对照组,每组各25只.研究组大鼠每日放入人工气候箱,对照组大鼠放置于常温常湿环境下,观察两组大鼠AQP2和V2R的蛋白表达水平.结果两组大鼠在血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、肾髓质AQP2和V2R mRNA水平、AQP2、V2R的蛋白表达和AQP2的磷酸化水平方面相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论通过本研究发现,高湿环境对大鼠肾脏有一定伤害,能降低V2R和AQP2的表达水平和AQP2磷酸化水平,说明V2R和AQP2可能参与了高湿环境对大鼠肾脏损害的过程.

AQP2基因突变致先天性肾性尿崩症1例并文献复习

目的提高临床医生对肾性尿崩症(NDI)尤其是先天性NDI(CNDI)的认识。方法总结1例CNDI患儿的临床资料,检测其水通道蛋白2(AQP2)基因突变情况,并结合文献进行复习。结果患者,男,10岁,自幼多尿、多饮,曾诊断“中枢性尿崩症”,加压素替代治疗无反应;多尿、多饮逐渐加重,憋尿时间缩短影响学习成绩,10岁再次就诊,临床诊断为“肾性尿崩症”,给予氢氯噻嗪治疗,多尿、多饮症状改善;基因检测发现AQP2基因c.727delG,证实为CNDI。结论该病为少见病,普遍存在延误诊断情况,本例患儿通过基因检测后明确诊断为AQP2基因移码突变导致的CNDI,该突变为国内首次报道的新突变。

泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究

目的:本文探讨泽泻汤对梅尼埃病豚鼠模型膜迷路积水的治疗作用及其机制研究,为临床使用本方提供实验依据,并揭示其可能的作用机制。方法:采用腹腔注射醋酸去氨加压素法复制梅尼埃病膜迷路积水模型,以颞骨切片蜗管面积与蜗管面积和前庭阶面积之和的比值、耳蜗的免疫组化AQP-2的表达强度等为指标,研究泽泻汤对其影响。结果:泽泻汤组与模型组的蜗管面积与总面积的比值比较,有显著性差异(P<0.01);免疫组化中AQP-2在泽泻汤组耳蜗表达强度较模型组明显降低。结论:《金匮要略》中的泽泻汤具有显著的减轻膜迷路积水程度的作用,证实了本方治疗梅尼埃病的有效性;并揭示了本方治疗梅尼埃病的作用机制可能是通过直接抑制内耳血管纹、螺旋韧带的AQP-2表达,借助抑制内耳中的AVP-V2R-cAMP途径,从而有利于减轻耳蜗积水。

中耳压力治疗梅尼埃病的有关研究进展

梅尼埃病是一种以膜迷路积水为基本病理特征的内耳疾病,目前临床上药物、手术等治疗方法效果有限,而中耳压力治疗近年来新兴的一种无创、效果显著的治疗方法,本文就梅尼埃病的中耳压力治疗有关进展进行综述。

叶酸诱导肾损伤的小鼠肾组织水通道蛋白表达随病程迁延而减少

目的通过检测水通道蛋白(AQP)在叶酸(FA)诱导肾损伤小鼠模型中的表达变化,探讨肾小管来源的急性转慢性肾损伤发病机制。方法建立叶酸(folic acid,FA)诱导肾损伤C57BL/6雄性小鼠模型,分别于2d、7d、14d时采用PAS及Masson染色观察肾组织结构;免疫组织化学法检测肾组织AQP-1和AQP-2表达。结果FA 2d时肾皮质及外髓外带小管尤以近端小管受损严重,出现结构紊乱、细胞肿胀并呈水变性及空泡变性,变性细胞膜不表达AQP-1,而AQP-2免疫反应阳性的集合管受累不明显。FA 7d时,小管结构恢复正常,但上皮较薄,管腔及管间隙扩大,此时AQP-1表达较弱,AQP-2则表达较强。FA 14d时,Masson染色显示管周纤维沉积,PAS阳性的基底膜较厚,远端小管管腔扩张明显,近端小管上皮细胞又重现水变性及空泡变性,AQP-1仅在少量残存的上皮细胞呈弱阳性表达,AQP-2在损伤较轻的主细胞上呈高表达。结论FA诱导肾损伤模型中,近端小管损伤较集合管早;残存的小管细胞通过增强AQPs表达以适应损伤;损伤后期坏死的上皮细胞不再表达AQP-1和AQP-2。FA诱导肾损伤中AQP的表达随病程迁延而减弱。

鸡胚肾(小管)发生中相关活性物质的表达及调控意义

目的观察表皮生长因子受体（EGFR）、转化生长因子-β（TGF-β）和水通道蛋白-2（AQP-2）及Bax蛋白在鸡胚肾（小管）发生过程中的表达,探讨它们的生物活性作用及相互之间的调控意义。方法应用免疫组织化学染色和体视学半定量方法,检测EGFR、TGF-β（β1、β2、β3）、AQP-2及Bax蛋白在10～46期鸡胚共36例肾组织发生中的表达,用IPP专业图像分析软件对其表达强度进行定量分析。结果第26～46期鸡胚肾的近端小管上皮细胞呈EGFR免疫反应阳性;第26～37期中肾的近端小管上皮细胞和远端小管上皮细胞呈TGF-β免疫反应阳性,第33～40期后肾的近端小管上皮细胞和远端小管上皮细胞呈TGF-β免疫反应阳性,第44～46期近端小管上皮细胞呈TGF-β免疫反应阳性,远端小管上皮细胞呈TGF-β免疫反应阴性;第26～46期鸡胚肾的集合小管上皮细胞呈AQP-2免疫反应阳性;第26～37期中肾近端小管和远端小管上皮细胞呈Bax反应阳性,第33～46期后肾近端小管上皮细胞呈Bax免疫反应阳性。图像分析显示,在鸡胚肾发生过程中,EGFR、TGF-β（β1、β2、β3）和Bax蛋白的阳性反应呈现先增强后减弱的变化,AQP-2阳性反应呈持续增强的趋势。结论鸡的中肾具有排泄功能,中肾肾小管的退化可能与TGF-β和Bax蛋白的大量表达有关。EGFR、TGF-β、AQP-2和Bax蛋白的协同表达调控着后肾肾小管和集合小管的发生及分化成熟。在肾脏发育过程中AQP-2可能介导胚胎发育过程中水平衡的稳定。