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AQP4基因多态性与视神经脊髓炎遗传易感性的相关研究 被引量:1
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作者 王青松 王浩 +2 位作者 戴庆箐 徐竹 楚兰 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1084-1088,共5页
目的初步探讨AQP4外显子区域基因多态性与我国视神经脊髓炎(NMO)患者遗传易感性的关系。方法用常规酚/氯仿法从患者及正常对照组全血标本中提取基因组DNA,应用PCR扩增AQP4外显子区基因,再对PCR产物进行纯化及正反双向测序,然后通过与Gen... 目的初步探讨AQP4外显子区域基因多态性与我国视神经脊髓炎(NMO)患者遗传易感性的关系。方法用常规酚/氯仿法从患者及正常对照组全血标本中提取基因组DNA,应用PCR扩增AQP4外显子区基因,再对PCR产物进行纯化及正反双向测序,然后通过与GeneBank公布的人类AQP4基因序列比较,寻找阳性突变位点,并比较各阳性突变位点在NMO、MS、CI、NC中突变率的差异。然后通过特异性的定点诱变技术对pEGFPN1-AQP4质粒诱导相应位点的突变生成相应的突变AQP4质粒,采用脂质体转染法,将相应的质粒转染进入HEK-293T细胞稳定表达后进行NMO-IgG抗体滴度的检测。应用SPSS11.5统计软件进行相关数据分析。结果我们发现视神经脊髓炎组5号外显子区域有单核苷酸多态性(SNP)位点4个,突变的位点为C9414T、G9416C、A9458C、C9524A,而多发性硬化、脑梗死及正常对照组均未发现相应的SNP位点,同时NMO患者1号外显子区域未发现SNP位点。对不同的SNP位点突变细胞株进行相关检测后发现,组间SNP位点分布的差异有统计学意义(P<0.05),组间血清抗体滴度水平具有统计学差异(P<0.05)。结论 AQP4基因5号外显子区域共发现了4个阳性突变位点,AQP4基因编码区的变异或多态性可影响靶蛋白AQP4的表达,进而可能参与NMO的发病机制。 展开更多
关键词 视神经脊髓炎 单核苷酸多态性 aqp4基因 多发性硬化
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加味人参乌梅汤对Caco-2细胞脱水模型AQP_4基因表达的影响 被引量:9
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作者 赵琼 徐世军 +2 位作者 李秀亮 陈玲 刘彬媛 《中药与临床》 2010年第3期36-39,共4页
目的:观察加味人参乌梅汤对Caco-2脱水模型AQP4基因表达的影响,初步探讨其生津止泻的作用机制。方法:常规方法建立Caco-2细胞高渗性脱水细胞模型,以不同浓度的加味人参乌梅汤处理,光镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,并采用RT-PCR方法... 目的:观察加味人参乌梅汤对Caco-2脱水模型AQP4基因表达的影响,初步探讨其生津止泻的作用机制。方法:常规方法建立Caco-2细胞高渗性脱水细胞模型,以不同浓度的加味人参乌梅汤处理,光镜观察细胞形态,MTT法检测细胞活力,并采用RT-PCR方法检测各组细胞AQP4基因表达水平。结果:高渗培养基处理Caco-2细胞后,细胞呈现脱水现象,高渗培养液培养3h、6h、12h、24h后脱水模型组的A值均明显低于对照组,AQP4基因表达较正常对照组亦显著降低(P<0.05);用含有不同浓度加味人参乌梅汤的培养液处理细胞,细胞脱水程度明显减缓,且表现出一定的量效关系,各时间点A值均较模型组显著增高,AQP4基因表达较模型组显著增高(P<0.05或0.01)。结论:加味人参乌梅汤能显著对抗Caco-2细胞的高渗性脱水损伤,增强AQP4基因表达可能是加味人参乌梅汤益气生津止泻效应的作用靶点之一。 展开更多
关键词 加味人参乌梅汤 caco-2细胞脱水模型 aqp4基因
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水通道蛋白4基因对肿瘤坏死因子-α诱导的关节软骨细胞损伤的影响 被引量:2
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作者 范忠诚 王琮仁 李杨 《海军医学杂志》 2018年第5期448-453,共6页
目的探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)基因对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α诱导的兔关节软骨细胞损伤的影响。方法小干扰水通道蛋白4(small interference-aquaporin4,si-AQP4)组由属于小干扰RNAs(small interference RNA... 目的探讨水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)基因对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α诱导的兔关节软骨细胞损伤的影响。方法小干扰水通道蛋白4(small interference-aquaporin4,si-AQP4)组由属于小干扰RNAs(small interference RNAs,siRNAs)的si-AQP4靶向抑制AQP4,对照组由小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)经LipofectamineTM2000转染至分离培养的兔膝关节软骨细胞,采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测转染后的2组细胞中AQP4的蛋白表达水平。后续研究分为对照组、TNF-α组、AQP4-siRNA组,采用噻唑蓝[3-(4,5)-dimethylthiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT)]法检测各组细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率; western blot法检测与增殖相关的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、p21基因,与凋亡相关的survivin基因、Bax基因,与基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)相关的MMP-3、MMP-13、基质金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1),与核因子活化B细胞κ轻链增强子(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells,NF-κB)信号通路相关的NF-κB p65和KB抑制蛋白激酶α(Inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit alpha,IKKα)的蛋白表达水平。结果转染AQP4-siRNA的兔关节软骨细胞AQP4表达明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P <0. 05)。TNF-α组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。AQP4-siRNA组细胞活力及PCNA、Survivin和TIMP-1的蛋白表达水平均高于TNF-α组,细胞凋亡率及p21、Bax、MMP-3、MMP-13、NF-κB p65和IKKα的蛋白表达水平均低于TNF-α组,差异均有统计学意义(P <0. 05)。结论AQP4基因表达可通过抑制NF-κB信号促进兔骨软骨细胞活力、抑制凋亡、抑制MMPs表达,从而对TNF-α诱导的细胞损伤起保护作用。 展开更多
关键词 关节软骨细胞 aqp4基因 TNF-Α诱导 凋亡 MMPS
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AQP4 expression and its correlation with the Lac and NAA using proton magnetic resonance spectroscopy after rat cerebral ischemia 被引量:1
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作者 周仁兰 谢鹏 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 2006年第4期218-224,共7页
Objective: To determine whether AQP4 expression is associated with lactate (Lac) and Nacetyl aspartate (NAA) and with apparent diffusion coefficient (ADC) abnormality after rat cerebral ischemia. Methods: The ... Objective: To determine whether AQP4 expression is associated with lactate (Lac) and Nacetyl aspartate (NAA) and with apparent diffusion coefficient (ADC) abnormality after rat cerebral ischemia. Methods: The time courses of ADC and lactate and NAA assessed by proton magnetic resonance spectroscopy (^1HMRS) were investigated at the time point of 6 h, and 1, 3, 7 d after rat cerebral ischernia induced by middle cerebral artery occlusion. Expression of AQP4 mRNA and protein were measured using RT-PCR and Western blot analysis respectively. Results: Significant reductions of NAA concentration and increases of lactate concentration were found after rat cerebral ischemia. The expressions of AQP4 mRNA t and protein were increased at 6 h, and reached the peak at 1-3 d, then began to decrease at 7 d after rat cerebral ischemia. The expression of AQP4 was significantly correlated with NAA (rRT = -0. 856, rw = -0. 927, P〈0.01), and with lactate (rw=0. 473, rRT=0. 413, P〈0.05), and with ADC values during the period of 1-7d after rat cerebralischemia (rw=0.984, rRT=0.925, P〈0.05). In addition, correlations between Lac and the ADC values(r=-0. 677, P〈0.05)and between NAA and ADC values during the period of 1-7 d after rat cerebralischemia (r=0.909, P(0.05) were also observed. Conclusion: The data suggest that AQP4 is involved in the transport of water when brain edema is formed and cell membrane integrity is lost. 展开更多
关键词 cerebral ischemia brain edema middle cerebral artery occlusion proton magnetic resonance spectroscopy AQUAPORIN
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