CRPC非AR相关信号传导通路及其相关靶向药的研究进展

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是前列腺癌的不可避免的后续阶段,其发生及进展有着复杂的机制,其中细胞信号传导异常是其重要机制之一。目前研究表明与CRPC关系较明确且最为密切的是雄激素受体(AR)信号异常,但近些年,越来越多的研究表明非AR信号传导通路异常也起着不容忽视的作用。故本文就非AR相关的信号传导通路在CRPC中的研究及可能靶向药进行简单的概括,以作进一步研究CRPC做出参考。

AR-V7在去势抵抗性前列腺癌中的作用

前列腺癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,雄激素受体(AR)在前列腺癌的发生、发展中起着重要作用。晚期前列腺癌的治疗方法主要是内分泌治疗,即雄激素剥夺治疗(ADT)。但在前列腺癌的治疗过程中,常常对其产生耐药,并发展成为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。有研究表明,CRPC的发生、进展及耐药性的产生与AR信号通路的再活化有关,其中雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在AR信号通路的再活化中起关键作用。本文对AR-V7在CRPC中的作用做一综述。

基于AR/mTOR信号通路探讨西黄丸对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡影响的实验研究

基于雄激素受体(androgen receptor,AR)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路,研究西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。西黄丸悬液灌胃制备SD大鼠含药血清。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测低、中、高剂量西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞体外增殖的影响。流式细胞术检测不同浓度西黄丸干预后LNCaP细胞的凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase caspase-3,cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、AR的蛋白表达以及mTOR蛋白的磷酸化水平。结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使LNCaP细胞的活力显著降低;低、中、高剂量西黄丸含药血清均能使细胞凋亡率显著增加;低、中、高剂量西黄丸含药血清组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞中AR蛋白表达显著降低,mTOR的磷酸化蛋白p-mTOR水平显著降低。为了研究西黄丸对LNCaP细胞体内生长的影响,采用不同剂量的西黄丸干预接种了LNCaP细胞的皮下移植瘤模型裸鼠,Western blot检测AR、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果显示低、中、高剂量西黄丸组皮下移植瘤的体积较模型组显著降低;各给药组皮下移植瘤的质量较模型组显著降低。与模型组相比,低、中、高剂量西黄丸组皮下移植瘤组织内cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白、AR蛋白表达显著降低;p-mTOR蛋白表达显著降低。进一步实验结果显示,AR激动剂R1881能够减弱西黄丸的抗增殖及促凋亡效应。西黄丸抗前列腺癌的作用机制与抑制AR/mTOR信号通路,抑制LNCaP细胞的增殖、诱导癌细胞凋亡有关。

从AR/AR-V7信号通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗控制去势抵抗性前列腺癌的作用机制

目的:探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗(ADT)控制去势抵抗性前列腺癌作用及其机制。方法:建立去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠模型,当瘤体体积达到100 mm3时,将50只BALB/c裸鼠随机分为模型组,ADT组,ADT+固本清源方低、中、高剂量组5组,每组10只小鼠,分组后保证各组动物之间,肿瘤体积差异无统计学意义。模型组给予等量生理盐水(10 mL·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次;其余组均给予比卡鲁胺(5 mg·kg^(-1))灌胃,每日1次,第10天腹腔注射醋酸戈舍瑞林(0.36 mg·kg^(-1));固本清源方组在ADT的基础上同时给予固本清源方低、中、高剂量(2.5,25,50 g·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次。连续给药25 d后剥离瘤体组织,记录荷瘤小鼠肿瘤的生长情况、计算肿瘤抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肿瘤组织中雄激素受体(AR),雄激素受体剪接变异体-7(AR-V7),前列腺癌特异性抗原(PSA)的mRNA及蛋白表达。结果:ADT+固本清源方低、中、高剂量组的抑瘤率分别为27.95%,46.71%,44.46%,与ADT组比较,中、高剂量组抑瘤率明显升高(P<0.05)。进一步研究显示,与ADT组比较ADT+固本清源方中、高剂量组能明显下调AR,AR-V7,PSA的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。结论:固本清源方联合ADT能控制去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,与AR/AR-V7信号通路的调控有关。

基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮对心肌肥厚大鼠的保护作用及分子机制

目的:基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮(TFP)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌肥厚大鼠保护作用及分子机制。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组(Control)组、模型组(ISO组)、阳性组(Positive组)及蜂胶总黄酮低、高剂量组(TFPL组、TFPH组)。TFPL组、TFPH组大鼠分别灌胃TFP 25、100mg/kg,灌胃14d;Positive组灌胃复方丹参片290mg/kg,灌胃14d;其余组灌胃相同剂量的0.9%氯化钠溶液。第8天除Control组外,其余组均皮下注射ISO 7d建立心肌肥厚模型。观察记录大鼠状态并绘制生长曲线;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;HE、Masson染色观察心脏病理情况;检测血清中TG、T-CHO、LDL-C、HDL-C以及ATP含量;Western blot法检测GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达情况。结果:TFPH组可显著降低心肌细胞总凋亡率(P<0.01),缓解心肌肥厚大鼠心肌损伤,改善心肌结构,抑制胶原纤维化;降低心肌肥厚大鼠血清中TG、T-CHO、LDL-C含量,升高HDL-C、ATP含量(P<0.05);心肌组织中GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达水平显著上升(P<0.01,P<0.05)。结论:TFP对ISO诱导心肌肥厚大鼠具有一定的保护作用,抑制心肌纤维化,降低心肌细胞凋亡,其作用机制与激活GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达有关。

木瓜总三萜和奥美拉唑联用对吲哚美辛诱导大鼠胃溃疡的治疗作用研究

观察木瓜总三萜和奥美拉唑联用对吲哚美辛诱导胃溃疡大鼠治疗作用,并探寻其可能作用机制。将大鼠随机分为正常组、模型组、奥美拉唑(3.6 mg·kg-1)组、木瓜总三萜(100 mg·kg-1)组、木瓜总三萜和奥美拉唑联用(100 mg·kg-1+3.6 mg·kg-1)组。除正常组外,各组按照20 mg·kg-1灌胃给予吲哚美辛,每天1次,连续7 d,然后灌胃给予相应药物,每天1次,连续14 d。末次给药次日,每组随机选取一半大鼠进行胃黏膜血流量、胃液量测定和血液中TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-4,IL-10含量检测;每组余下大鼠在末次给药后4 h行幽门结扎术,8 h后取胃,收集胃内容物,检测胃内分泌物体积、pH和分泌物总酸度,然后进行胃损伤组织学分析、MPO活性、cAMP含量检测和形态学分析;实时定量PCR法检测TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-4,IL-10,VEGFA,A2AR mRNA表达,Western blot法检测胃组织中VEGFA,A2AR,PKA,p-PKA,CREB,p-CREB,EGF,EGFR,p-EGFR,MUC6,TFF2蛋白表达。结果显示,木瓜总三萜和奥美拉唑联用可显著增加胃黏膜血流量、胃黏液量,降低胃内分泌物体积、分泌物总酸度和黏膜损伤,降低血液和胃组织中TNF-α,IL-1β,IL-6含量和表达,升高IL-4,IL-10含量和表达,抑制胃组织中MPO活性,增加胃组织中cAMP含量,上调胃组织中VEGFA和A2AR mRNA和p-PKA,p-CREB,VEGFA,A2AR,EGF,p-EGFR,MUC6和TFF2蛋白表达,升高p-PKA/PKA,p-CREB/CREB和p-EFGR/EFGR比值,其中木瓜总三萜和奥美拉唑联用治疗效果比两者单用效果更加明显。结果表明木瓜总三萜和奥美拉唑联用对吲哚美辛诱导大鼠胃溃疡有显著治疗作用,其作用机制可能与其调节A2AR/AKT/CREB,A2AR/VEGFA,EGF/EGFR和MUC6/TFF2信号通路,抑制促炎因子生成、增加胃黏膜血流量、上调促进黏膜细胞增殖因子和保护因子蛋白表达有关。