β3AR通路活化诱导FGF21表达促进白色脂肪组织棕色化

目的通过活化β3AR-PKA通路,探讨成纤维细胞生长因子21(FGF21)对白色脂肪组织(WAT)棕色化的影响。方法C57BL/6小鼠分别采用标准小鼠饲料(16只)及45%千卡脂肪高脂饲料(16只)喂养。12周后,标准饲料喂养小鼠随机分为2组:对照组(NC组)注射0.9%氯化钠溶液,注射CL316,243组(CL组)注射CL316,243(1 mg/kg);高脂饲料喂养小鼠随机分为2组:高脂饮食组(HFD组)注射0.9%氯化钠溶液,高脂饮食注射CL316,243组(HFD+CL组)注射CL316,243(1 mg/kg)。14周后,Western blot检测WAT蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白(FGF21、PGC-1α及UCP1)表达;观察肝脏及脂肪组织病理学变化。培养3T3-L1前脂肪细胞,诱导成熟后分为3组:NC组,DMEM培养液;CL组,培养液+10μmol/L CL316,243;SU+CL组,培养液+50μmol/L SU5402+10μmol/L CL316,243。48 h后,检测蛋白激酶A(PKA)及棕色化相关蛋白表达,免疫荧光检测线粒体表达。结果与NC组比较,CL组PKA水平及棕色化相关蛋白升高;与CL组比较,HFD+CL组PKA水平及棕色化相关蛋白降低;而HFD+CL组相关蛋白表达高于HFD组。体外实验,与NC组比较,CL组及CL+SU组PKA水平显著升高;CL+SU组较CL组棕色化相关蛋白表达降低;免疫荧光结果显示,与NC组比较,CL组线粒体表达增多;而SU+CL组线粒体表达较CL组减少。结论活化β3AR-PKA通路可增加WAT中FGF21分泌,进而上调PGC-1α及UCP1表达,促进WAT棕色化。

结肠癌组织中补体C5a/C5aR通路活化上调FGL2的表达

目的探讨补体C5a/C5aR通路在结肠癌发病中对纤维介素蛋白-2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2,FGL2)的调节机制,明确补体系统在结肠癌发病中的功能和作用。方法收集2013年12月至2015年7月第三军医大学西南医院普外科、新桥医院消化科15例经病理活检确诊的住院临床结肠癌患者癌及癌旁组织。采用免疫组织化学方法检测结肠癌患者癌及癌旁组织中补体活化片段C5b-9、活化C3及C5aR的表达,佐证补体系统在结肠癌中的活化状态;进一步通过体内外实验(Western blot)验证结肠癌患者癌及癌旁组织MAPK信号通路中P38的磷酸化水平及FGL2的沉积,明确结肠癌发病中补体C5a/C5aR通路与二者的调节关系。结果免疫组织化学及Western blot实验证实结肠癌患者癌组织C5b-9、活化C3及C5aR的表达明显高于癌旁组织,FGL2的沉积亦显著高于癌旁组织;体外结果提示C5a能促进巨噬细胞系Raw264.7MAPK通路中P38的磷酸化水平(P=0.0013)及FGL2的产生能力(P=0.0071),加入C5aR阻断剂之后,二者表达随之减弱。结论 C5a/C5aR通路能通过MAPK信号途径中的P38信号完成对FGL2的调节作用进而参与结肠癌的发病进程。

基于AR通路及Wnt通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗去势抵抗性前列腺癌的机制

目的:从前列腺癌AR通路及肿瘤干细胞Wnt通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺(ADT)治疗控制去势抵抗性前列腺癌(CRPC)的作用机制。方法:建立CRPC荷瘤小鼠模型,采用RT-PCR、WesternBlot检测固本清源方联合ADT治疗肿瘤组织中AR、NKX3.1、PSA的表达;分选前列腺癌干细胞,观察固本清源方联合ADT治疗对接种前列腺癌干细胞荷瘤小鼠的抑瘤率,采用WesternBlot检测肿瘤组织中Wnt、β-catenin的表达。结果:中、高剂量固本清源方联合ADT治疗组AR、PSAmRNA及蛋白表达水平下调,而NKX3.1mRNA及蛋白表达水平上调,与ADT组治疗比较差异有统计学意义(P<0.05)。接种前列腺癌干细胞荷瘤小鼠较接种普通CRPC细胞荷瘤小鼠肿瘤显著增大(P<0.05)。低、中、高剂量固本清源方联合ADT治疗对前列腺癌干细胞荷瘤小鼠的抑瘤率分别为24.58%、36.67%、40.24%,与ADT组比较差异有统计学意义(P<0.05),进一步研究显示低、中、高剂量固本清源方联合ADT治疗能下调Wnt、β-catenin的蛋白表达水平,与ADT组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:固本清源方联合ADT治疗CRPC作用机制与调控前列腺癌AR通路及肿瘤干细胞Wnt/β-catenin通路有关。

C5a/C5aR通路对约氏疟原虫增殖和小鼠生存的影响

目的观察C5a/C5aR通路对约氏疟原虫17XL(P.y17XL)的增殖及其对BALB/c小鼠致死率的影响。结论将实验小鼠分为正常BALB/c组和C5aR-/-BALB/c组,每组5只,相同剂量的P.y17XL(2×105)分别感染正常BALB/c组小鼠和C5aR-/-BALB/c组小鼠,于感染后0、2、4和6d观察两组小鼠原虫血症和存活率的变化,并且采用ELISA检测感染P.y17XLBALB/c小鼠血清中C5a的水平。结果与正常组小鼠相比,C5aR-/-组小鼠生存期缩短,P.y17XL在C5aR-/-组小鼠的原虫血症较野生株小鼠高(P<0.05),而P.y17XL感染小鼠的血清中C5a含量低于未感染的小鼠。结论 C5a/C5aR能够抑制P.y17XL的增殖,并能延长感染小鼠的生存期。

可善挺通过抑制C5a/C5aR1通路对银屑病小鼠皮肤炎症和自噬的调控作用

目的本研究拟通过咪喹莫特(IMQ)小鼠银屑病模型,探究可善挺(Cosentyx)通过C5a/C5aR1通路对银屑病小鼠皮肤炎症和自噬的调控作用。方法 8周龄雄性BALB/c小鼠27只,随机分成3组(每组9只):空白对照组(Blank group)、银屑病模型组(Model group)、可善挺治疗组(Cosentyx-treat group),除空白对照组外,其余两组采用咪喹莫特(IMQ)制备银屑病模型,可善挺治疗组给与可善挺(第1、6、13天皮下注射,1 d两次,每次4.5mg/kg)干预。通过HE染色观察可善挺对银屑病模型小鼠皮肤组织的病理损伤的影响,通过ELISA检测小鼠皮损组织中促炎因子IL-4、IL-8、TNF-α、IL-1β的分泌情况,通过分光光度法检测小鼠皮损组织中髓过氧化物酶(MPO)活性,通过Western blot检测小鼠皮损组织中Beclin 1的表达量和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值,通过免疫组化法检测小鼠皮损组织C5a、C3、C5aR1、C1qB的表达水平。结果可善挺抑制了皮损组织中IL-4、IL-8、TNF-α、IL-1β和MPO的表达,提高了Beclin 1的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,同时可善挺下调了C5a/C5aR1通路中C1qB、C3、C5a、C5aR1分子的表达。结论可善挺抑制了C5a/C5aR1通路,可以通过C5a/C5aR1通路调控银屑病皮损组织中炎症因子的表达,减缓银屑病炎症反应,同时可善挺增强了银屑病皮损组织中自噬作用,但无法确定可善挺是否通过C5a/C5aR1通路对银屑病皮损组织中自噬作用进行调控,因此机制还需进一步确定。

心力衰竭与β-AR-PKA通路的关系及中医药研究进展

心力衰竭（HF）是大多数心血管疾病的最终归宿，是各种心脏结构或功能疾病损伤心室充盈或射血的结果．主要表现为呼吸困难和乏力的一种复杂的临床综合征，具有愈后差、病死率高的特点，也是心脏疾病患者最主要的死亡原因。近年来，大量动物实验研究表明在心脏功能的调节和心衰发生发展的过程中，β—AR都发挥了重要的作用。生理情况下，β—AR对心肌收缩和舒张活动起至关重要的作用，病理情况下，β—AR的长期激动可导致心肌细胞肥大、凋亡及心肌细胞坏死等，从而诱发心肌重塑性活动，与慢性心力衰竭的发病过程密切相关。随着研究的不断深入，在心衰大鼠β-AR—PKA通路的关系及中医药治疗研究方面积累了丰富的经验，现综述如下。

CRPC非AR相关信号传导通路及其相关靶向药的研究进展

去势抵抗性前列腺癌(CRPC)是前列腺癌的不可避免的后续阶段,其发生及进展有着复杂的机制,其中细胞信号传导异常是其重要机制之一。目前研究表明与CRPC关系较明确且最为密切的是雄激素受体(AR)信号异常,但近些年,越来越多的研究表明非AR信号传导通路异常也起着不容忽视的作用。故本文就非AR相关的信号传导通路在CRPC中的研究及可能靶向药进行简单的概括,以作进一步研究CRPC做出参考。

AR-V7在去势抵抗性前列腺癌中的作用

前列腺癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,雄激素受体(AR)在前列腺癌的发生、发展中起着重要作用。晚期前列腺癌的治疗方法主要是内分泌治疗,即雄激素剥夺治疗(ADT)。但在前列腺癌的治疗过程中,常常对其产生耐药,并发展成为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)。有研究表明,CRPC的发生、进展及耐药性的产生与AR信号通路的再活化有关,其中雄激素受体剪接变异体7(AR-V7)在AR信号通路的再活化中起关键作用。本文对AR-V7在CRPC中的作用做一综述。

C5a/C5aR1通过促γδT细胞IL-17A表达介导IMQ诱导的小鼠银屑病样皮炎

目的探讨补体C5a/C5aR1通过促γδT细胞IL-17A表达介导咪喹模特(IMQ)诱导小鼠银屑病样皮炎的作用及机制。方法建立IMQ诱导银屑病样皮炎模型小鼠,比较C5aR1^(+/+)及C5aR1^(-/-)小鼠银屑病样皮炎程度。免疫组化(IHC)检测皮损组织局部T细胞(CD3)及中性粒细胞(Ly-6G)浸润,炎性因子IL-17A和TNF-α的表达。流式细胞测量术(FCM)检测腋窝引流淋巴结及皮损局部IL-17A表达及其主要来源细胞亚群。C5aR1a阻断C5a/C5aR1通路后,检测IMQ诱导银屑病皮炎程度、IL-17A表达情况。此外,分离小鼠脾脏淋巴细胞,经C5a、IL-23及C5aR1a等体外刺激后,检测γδ-T细胞IL-17A表达。结果在IMQ诱导银屑病样皮炎模型小鼠中,C5aR1^(-/-)小鼠皮损表型较C5aR1^(+/+)小鼠明显减轻,并伴有T细胞及中性粒细胞浸润减少,炎性因子IL-17A和TNF-α表达明显下调(P<0.05)。FCM检测发现C5aR1^(-/-)小鼠腋窝引流淋巴结及皮损组织局部IL-17A+细胞频率显著减低,IL-17A主要由γδCD3^(+)TCR^(+)T细胞分泌。C5aR1a阻断C5a/C5aR1通路后IMQ诱导银屑病皮炎程度及IL-17A表达明显下调(P<0.05)。此外,C5aR1a显著下调C5a+IL-23诱导的γδT细胞IL-17A表达。结论补体C5a/C5aR1通路促γδT细胞IL-17A表达介导咪喹模特诱导小鼠银屑病样皮炎。特异性阻断该通路有望成为银屑病治疗的新靶点。

基于AR/mTOR信号通路探讨西黄丸对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡影响的实验研究

基于雄激素受体(androgen receptor,AR)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路,研究西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡的影响。西黄丸悬液灌胃制备SD大鼠含药血清。细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测低、中、高剂量西黄丸含药血清对前列腺癌LNCaP细胞体外增殖的影响。流式细胞术检测不同浓度西黄丸干预后LNCaP细胞的凋亡水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved cysteinyl aspartate specific proteinase caspase-3,cleaved caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、AR的蛋白表达以及mTOR蛋白的磷酸化水平。结果显示,与空白血清组相比,各给药组均能使LNCaP细胞的活力显著降低;低、中、高剂量西黄丸含药血清均能使细胞凋亡率显著增加;低、中、高剂量西黄丸含药血清组细胞中cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞中AR蛋白表达显著降低,mTOR的磷酸化蛋白p-mTOR水平显著降低。为了研究西黄丸对LNCaP细胞体内生长的影响,采用不同剂量的西黄丸干预接种了LNCaP细胞的皮下移植瘤模型裸鼠,Western blot检测AR、mTOR、p-mTOR、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达水平。结果显示低、中、高剂量西黄丸组皮下移植瘤的体积较模型组显著降低;各给药组皮下移植瘤的质量较模型组显著降低。与模型组相比,低、中、高剂量西黄丸组皮下移植瘤组织内cleaved caspase-3蛋白表达均显著升高,Bcl-2蛋白、AR蛋白表达显著降低;p-mTOR蛋白表达显著降低。进一步实验结果显示,AR激动剂R1881能够减弱西黄丸的抗增殖及促凋亡效应。西黄丸抗前列腺癌的作用机制与抑制AR/mTOR信号通路,抑制LNCaP细胞的增殖、诱导癌细胞凋亡有关。

从AR/AR-V7信号通路探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗控制去势抵抗性前列腺癌的作用机制

目的:探讨固本清源方联合雄激素剥夺治疗(ADT)控制去势抵抗性前列腺癌作用及其机制。方法:建立去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠模型,当瘤体体积达到100 mm3时,将50只BALB/c裸鼠随机分为模型组,ADT组,ADT+固本清源方低、中、高剂量组5组,每组10只小鼠,分组后保证各组动物之间,肿瘤体积差异无统计学意义。模型组给予等量生理盐水(10 mL·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次;其余组均给予比卡鲁胺(5 mg·kg^(-1))灌胃,每日1次,第10天腹腔注射醋酸戈舍瑞林(0.36 mg·kg^(-1));固本清源方组在ADT的基础上同时给予固本清源方低、中、高剂量(2.5,25,50 g·kg^(-1))灌胃,每日灌胃2次。连续给药25 d后剥离瘤体组织,记录荷瘤小鼠肿瘤的生长情况、计算肿瘤抑制率;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肿瘤组织中雄激素受体(AR),雄激素受体剪接变异体-7(AR-V7),前列腺癌特异性抗原(PSA)的mRNA及蛋白表达。结果:ADT+固本清源方低、中、高剂量组的抑瘤率分别为27.95%,46.71%,44.46%,与ADT组比较,中、高剂量组抑瘤率明显升高(P<0.05)。进一步研究显示,与ADT组比较ADT+固本清源方中、高剂量组能明显下调AR,AR-V7,PSA的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05)。结论:固本清源方联合ADT能控制去势抵抗性前列腺癌荷瘤小鼠的肿瘤生长,与AR/AR-V7信号通路的调控有关。

基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮对心肌肥厚大鼠的保护作用及分子机制

目的:基于GS/βAR/cAMP/PKA信号通路探讨蜂胶总黄酮(TFP)对异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌肥厚大鼠保护作用及分子机制。方法:将50只SD大鼠随机分为空白组(Control)组、模型组(ISO组)、阳性组(Positive组)及蜂胶总黄酮低、高剂量组(TFPL组、TFPH组)。TFPL组、TFPH组大鼠分别灌胃TFP 25、100mg/kg,灌胃14d;Positive组灌胃复方丹参片290mg/kg,灌胃14d;其余组灌胃相同剂量的0.9%氯化钠溶液。第8天除Control组外,其余组均皮下注射ISO 7d建立心肌肥厚模型。观察记录大鼠状态并绘制生长曲线;流式细胞术检测心肌细胞凋亡情况;HE、Masson染色观察心脏病理情况;检测血清中TG、T-CHO、LDL-C、HDL-C以及ATP含量;Western blot法检测GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达情况。结果:TFPH组可显著降低心肌细胞总凋亡率(P<0.01),缓解心肌肥厚大鼠心肌损伤,改善心肌结构,抑制胶原纤维化;降低心肌肥厚大鼠血清中TG、T-CHO、LDL-C含量,升高HDL-C、ATP含量(P<0.05);心肌组织中GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达水平显著上升(P<0.01,P<0.05)。结论:TFP对ISO诱导心肌肥厚大鼠具有一定的保护作用,抑制心肌纤维化,降低心肌细胞凋亡,其作用机制与激活GS/βAR/cAMP/PKA信号通路相关蛋白表达有关。