Hic-5/ARA55蛋白的研究进展

Hic-5/ARA55基因最早是作为转化生长因子β1诱导基因（TGF-β1）和过氧化氢诱导的克隆从小鼠成骨细胞MC3T3中分离出来,属于LIM结构域蛋白家族,与桩蛋白具有高度同源性。Hic-5/ARA55蛋白主要位于细胞黏着斑,可以穿梭于细胞质和细胞核的蛋白质,

ARA55过表达激活内源性线粒体凋亡通路诱导CNE2鼻咽癌细胞凋亡

目的:研究外源性ARA55表达上调对人CNE2鼻咽癌细胞生物学特性的影响,初步探讨相关作用机制。方法:实验设过表达组、空载体组及空白对照组。采用ZLip2000将前期构建的pCMV-ARA55-EGFP重组及空白载体分别转染至人CNE2细胞系,经荧光显微镜及Western blot进一步观察和鉴定过表达组中ARA55-EGFP融合蛋白的表达;通过设置细胞增殖、侵袭迁移及凋亡等系列实验,探讨ARA55在鼻咽癌中发挥的生物学功能;Western blot检测线粒体凋亡途径中系列蛋白的表达变化。结果:转染重组过表达质粒的CNE2细胞系中可检测到ARA55-EGFP融合蛋白的表达;体外细胞功能实验结果显示,ARA55蛋白过表达后,CNE2细胞的增殖受到抑制,体外迁移和侵袭的细胞数显著减少(P<0.05)。同时,凋亡相关实验结果显示,ARA55过表达组的细胞凋亡率(早期+中晚期)较空载体组显著升高(P<0.05);Western blot进一步证实ARA55过表达组中Bcl-2蛋白的表达下调,细胞色素C(Cytochrome C)表达明显增加,下游Caspase-9和Caspase-3的剪接体表达增加。结论:过表达外源性ARA55可诱导内源性线粒体凋亡通路的激活,从而抑制CNE2鼻咽癌细胞增殖,诱导凋亡。

前列腺癌组织中ARA55 mRNA表达及临床意义

目的:探讨雄激素受体辅助因子ARA55在前列腺癌组织标本中的表达,分析ARA55 mRNA与患者的临床特征(Gleason评分、临床分期、PSA)之间的相关性。方法:应用实时定量PCR(SYBR染料法)技术,对前列腺癌组织标本中ARA55mRNA表达进行研究。结果:前列腺癌患者标本中ARA55 mRNA均有表达,但表达量有所不同,T1～T2期和T3～T4期Ct值分别为20.57±0.20和16.33±0.31;Gleason评分≤7分和Gleason评分>7分的Ct值分别为23.13±0.13和17.13±0.19;PSA≤10μg/L和PSA>10μg/L的Ct值分别为24.70±0.27和17.21±0.34;内分泌治疗有效和无效的Ct值分别为23.82±0.21和16.71±0.32,前者和后者相比均具有显著的统计学差异(P<0.05)。结论:ARA55 mRNA表达与患者的临床特征(Gleason评分、临床分期、PSA)显著相关,肿瘤分期越早、Gleason评分≤7分、PSA≤10μg/L及内分泌治疗有效的患者其ARA55 mRNA表达量越高。ARA55可能是前列腺癌预后的一个良好预测指标,对于指导前列腺癌内分泌治疗有一定的意义。

Hic-5／ARA55抑制大肠癌细胞生长的实验研究

目的研究Hic-5／ARA55对大肠癌细胞生长的影响及其机制。方法流式细胞仪检测已稳定转染Hic-5／ARA55的大肠癌细胞系（Lovo-Hic-5／ARA55组）的细胞周期，用未转染质粒（Lovo组）和转染空质粒的Lovo细胞（Lovo-Vector组）作为对照。Western blot方法检测各组细胞之间主要细胞周期蛋白的表达差异，Luciferase Assay进一步研究Hic-5／ARA55与细胞周期蛋白的作用机制。建立裸鼠皮下种植瘤模型，7周后切取瘤体并称重，应用免疫组织化学方法检测各组皮下种植瘤的Hic-5／ARA55及相关细胞周期蛋白的表达差异。结果Lovo-Hic-5／ARA55组细胞由G0／G1期进入S期明显延迟，并且细胞周期蛋白P27表达升高，Lueiferase Assay证明Hic-5／ARA55在转录水平上调P27的表达。Lovo-Hic-5／ARA55组皮下种植瘤质量[（0．33±0．23）g]明显低于Lovo组[（1．20±0．39）g]和Lovo-Vector组[（1．30±0．49）g]，差异有统计学意义（P〈0．05）。Lovo-Hic-5／ARA55组种植瘤Hic-5／ARA55和P27均高表达，而Lovo组和Lovo-Vector组均低表达或阴性表达，差异有统计学意义（P〈0．05），并且Hic-5／ARA55和P27的表达呈正相关（r=0．816，P〈0．05）。结论Hic-5／ARA55在体外和裸鼠体内均通过在转录水平上调细胞周期抑制蛋白P27的表达来抑制大肠癌细胞的生长。

雄激素受体辅助因子在治疗前列腺癌中的作用

前列腺癌是严重危害男性健康的常见疾病。雄激素的功能在前列腺癌的中具有重要作用。雄激素的生理作用是通过雄激素受体(androgen receptor,AR)介导的。雄激素受体辅助因子(androgen receptor as—sociated factor,ARA)是与雄激素受体转录功能相关的蛋白质。这些辅助因子在前列腺癌发展中的作用是不同的。ARA54、ARA70在前列腺癌细胞中的浓度明显增加,而ARA55在其中的浓度下调。这对雄激素非依赖型前列腺癌的治疗有重要意义。