lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mRNA表达水平明显降低,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显升高,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显升高,ARAP1-AS2表达水平明显降低(P<0.05);过表达ARAP1-AS2后,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显升高,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显降低,Synaptopodin mRNA表达水平明显升高,Desmin mRNA、Vimentin mRNA表达水平明显降低,p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3表达水平明显降低(P<0.05)。JAK2/STAT3信J号通路抑制剂AG490增强了ARAP1-AS2对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及Synaptopodin、Desmin、Vimentin表达的影响。结论过表达lncRNA ARAP1-AS2可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路促进MPC-5细胞存活,抑制高糖诱导的足细胞损伤。

糖尿病和糖尿病肾病患者循环lncRNA表达谱的分析

目的分析健康对照组、糖尿病患者、糖尿病肾病患者循环lnc RNA及m RNA表达谱的差异,探讨糖尿病和糖尿病肾病的表观遗传学发病机制,为糖尿病肾病寻找新的治疗靶点提供依据。方法采集2015年1月至3月中国医科大学附属第一医院肾内科收治的肾活检病理明确为结节性糖尿病肾小球硬化症患者21例(DN组)、2型糖尿病患者9例(DM组)及19名正常健康人(N组)的血清。采用Arraystar Human lnc RNA/m RNA V3.0芯片进行lnc RNA和m RNA表达谱检测,使用Agilent Feature Extraction软件对获得的微阵列图像包含的讯息进行提取,采用Gene Spring GX软件包对获得lnc RNA及m RNA原始表达讯息进行标准化。结果与糖尿病组及正常对照组相比,糖尿病肾病组患者尿白蛋白/肌酐比值和血清肌酐显著升高,估计肾小球滤过率(estimated glomeruar filtration rate,e GFR)显著下降(P<0.05)。与健康对照组相比,糖尿病组血清中有245个lnc RNA表达上调和680个lnc RNA表达下调。与糖尿病组相比,糖尿病肾病组血清中有45个lnc RNA表达上调和813个lnc RNA表达下调。自正常组到糖尿病组,再到糖尿病肾病组,lnc RNA-ARAP1-AS2表达逐渐上调(DM/N 2.82倍,DN/DM 2.47倍),lnc RNAARAP1-AS1表达逐渐下调(DM/N 2.24倍,DN/DM 4.79倍),其靶基因ARAP1(Arf GAP with Rho GAP domain,ankyrin repeat and PH domaim 1)m RNA的表达逐渐上调(DM/N 2.25倍,DN/DM 2.45倍)。结论表达下调的lnc RNA-ARAP1-AS1和表达上调的lnc RNA-ARAP1-AS2作用于靶基因m RNA-ARAP1,使m RNA-ARAP1在糖尿病和糖尿病肾病中表达上调,可能通过调控Rho激酶和EGF受体途径,参与了糖尿病和糖尿病肾病的发生,其有望成为糖尿病和糖尿病肾病新的生物标志物。