抑癌因子p14-ARF对p53-MDM2网络的影响

p53是一种重要的抑癌因子,可激活细胞周期阻滞、DNA损伤修复、衰老或凋亡,在细胞命运决定中起重要作用。用ATMp的表达水平代表DNA损伤强度,建立了由p14-ARF调控的p53-MDM2网络的数学模型。通过数值模拟,分析了ATMp和p14-ARF对p53-MDM2通路的影响。研究表明,较低的ATMp水平会使p53p稳定在低稳态,适当的ATMp会激活p53-MDM2网络的振荡。此外,p53p的表达水平随着p14-ARF表达水平的升高呈现出低稳态,振荡和高稳态的动力学。

p14^(ARF)在宫颈癌中的表达及其与p53表达相关性的研究

目的探讨宫颈癌组织p14ARF蛋白的表达及其与p53表达的相关性。方法应用免疫组化方法检测p14ARF、p53基因在41例宫颈癌及20例正常宫颈组织中的表达。结果p14ARF在正常宫颈组织中不表达,41例宫颈癌中35例表达阳性,占85.4%。病理分级为G1、G2级的宫颈癌的p14ARF阳性表达率为68.4%,G3级为100%,两者比较,有显著性差异(P<0.05)。宫颈癌组织中p53蛋白表达阳、阴性者中p14ARF蛋白表达阳性率分别为75.0%(12/16)和92.0%(23/25),两者比较,无显著性差异,p14ARF与p53表达不相关。结论p14ARF在宫颈癌中高表达有一定的诊断和估测预后价值,可能是宫颈癌新的肿瘤标志物。

大肠癌组织p14^(ARF)与p53基因变异研究

目的:观察大肠癌组织p14ARF基因遗传和表观遗传变化及p53基因突变状况,探讨两者改变的关系及p14ARF-p53通路功能破坏在大肠癌发生中的作用。方法:应用PCR、直接测序、甲基化特异PCR和RT-PCR分别检测56例原发性大肠癌及相应癌旁正常组织p14ARF基因纯合性缺失、突变、5′CpG岛甲基化、mRNA表达及p53基因突变状况。结果:①大肠癌组织p14ARF总变异率为27%(15/56),其中1例纯合性缺失,14例5′CpG岛甲基化,未见突变发生。②15例p14ARF基因变异的大肠癌组织其相应mRNA表达阴性(13例)或低水平表达(2例),41例未发生基因变异的大肠癌组织和所有癌旁正常组织p14ARFmRNA均显示明显表达。③大肠癌组织p53突变率为48%(27/56)。④56例大肠癌组织中,12例仅发生p14ARF变异,24例仅显示p53突变,3例同时有p14ARF5′CpG岛甲基化和p53突变,17例p14ARF和p53均无变异,p14ARF-p53通路总变异率为70%(39/56),p14ARF5′CpG岛高甲基化与野生型p53状态有关(P<0·05)。⑤低分化腺癌组p14ARF变异率(44%,7/16)明显高于高中分化腺癌组(20%,8/40)(P<0·05),但两组间p53突变率无显著差异(P>0·05)。结论:①大肠癌p14ARF基因5′CpG岛高甲基化是其表达失活的主要机制;②大肠癌p14ARF基因高甲基化与p53基因突变可能是相互独立的事件,两者的失活可能各自出现于不同的大肠癌亚组中;③p14ARF高甲基化或p53突变引起的p14ARF-p53通路功能破坏在大肠癌的发生中具有重要作用。

甲状腺肿瘤p14^(ARF)、p53及FHIT蛋白的表达

目的探讨p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化SP法检测20例甲状腺腺瘤和28例甲状腺癌组织中p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达。结果p14ARF、p53及FHIT蛋白在甲状腺腺瘤和甲状腺癌中阳性率分别为90%、35.7%、15%和75%、90%、7.14%,3种蛋白在甲状腺腺瘤及甲状腺癌的表达差异均有显著性(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达在甲状腺滤泡癌(FTC)与腺瘤之间,乳头状癌(PTC)与腺瘤之间差异均有显著性(P<0.05),p53及FHIT的表达在髓样癌(MTC)与腺瘤间差异也有显著性(P<0.05)。p14ARF、p53及FHIT蛋白的表达与甲状腺肿瘤的恶性进程有关,与患者年龄、性别及淋巴结转移无关。另外p14ARF与FHIT蛋白的表达呈正相关,并且它们与p53的表达均呈负相关。结论肿瘤抑制蛋白p14ARF和FHIT的缺失以及p53蛋白的高表达可能是甲状腺肿瘤发生的重要原因之一。联合检测p14ARF、p53及FHIT蛋白有助于区分甲状腺腺瘤和甲状腺滤泡癌。

ARF-mdm2-p53的相互作用途径

细胞周期素依赖性激酶4(cyclin-dependentkinase4,CDK4)抑制蛋白基因p16INK4α及其可变读框基因(alterativereadingframe,ARF)-INK4α/ARF基因位于人染色体9p21的CDKN2A位点。该位点编码两个重叠的基因:p16INK4α和ARF基因,这两个基因的阅读框架不同,因此,p16和ARF基因的氨基酸顺序是完全不同的。ARF主要通过mdm2参与mdm2-p53通路的调节。目前研究表明ARF基因在肿瘤发生过程中可能起一定的作用,ARF基因功能的失活可能主要通过该基因启动子高度甲基化。本文就ARF与mdm2及p53相互作用途径做一综述。

宫颈鳞状上皮癌变过程中细胞周期调节通路p14^(ARF)-MDM2-p53作用的研究

目的探讨细胞周期调节p14ARF-MDM2-p53通路在宫颈上皮癌变过程中的作用。方法采用免疫组化SP法检测18例正常宫颈上皮、48例宫颈上皮内瘤变(CIN)和23例宫颈鳞状细胞癌组织p14ARF、MDM2及p53蛋白的表达。结果p14ARF蛋白表达阳性率在正常宫颈上皮、CIN和宫颈鳞癌组分别为28%、42%和78%,宫颈鳞癌组表达较正常上皮和CIN组升高(P<0.05);MDM2蛋白表达阳性率在正常宫颈上皮、CIN和宫颈鳞癌组分别为0%、23%和43%,CIN和宫颈鳞癌组较正常宫颈上皮表达升高(P<0.05);p53蛋白表达阳性率在正常宫颈上皮、CIN和宫颈鳞癌组分别为6%、31%和39%,CIN及宫颈鳞癌组表达水平较正常宫颈上皮升高(P<0.05);统计分析未发现三种蛋白的表达存在显著相关性。结论p14ARF-MDM2-p53细胞周期调节通路与宫颈癌发生发展有关并有望用于CIN及宫颈癌的诊断。

p14^(ARF)、p53抑癌基因与胰腺癌发生、发展的相关研究

目的 :研究抑癌基因p14 ARF、p5 3在胰腺癌组织中的表达和胰腺癌细胞株PC 3转染p14 ARF基因前后的生长状况 ,探讨它们对胰腺癌发生、发展的影响。方法 :采用免疫组织化学法检测 10例正常胰腺组织、4 2例胰腺癌组织中p14 ARF蛋白、p5 3蛋白的表达。将外源性p14 ARFcDNA重组质粒pCI neo p14 ARF和空载体质粒pCI neo分别转染入胰腺癌PC 3细胞中 ,观察转染后胰腺癌PC 3细胞株的生长状况。结果 :正常胰腺组织中p14 ARF的表达率为 90 % ,胰腺癌组织中为 35 .7% ;正常胰腺组织中p5 3的表达率为 0 ,胰腺癌组织中为 4 5 .2 %。胰腺癌PC 3细胞的p14 ARF基因呈缺失变异。外源性野生型p14 ARF基因和空载体质粒pCI neo成功转染入PC 3细胞 ,转染p14 ARF基因的胰腺癌细胞株第 1天生长抑制率为 2 2 % ,第 5天为 2 6 %。结论 :抑癌基因p14 ARF蛋白在胰腺癌中低表达 ,突变型p5 3蛋白在胰腺癌中呈高表达 ;转染p14 ARF基因的胰腺癌细胞株生长受到抑制 ;抑癌基因p14 ARF、p5 3对胰腺癌的发生、发展可能产生影响。

p14^(ARF)、mdm2、p53在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的研究p14ARF、mdm2、p53在鼻咽癌组织中的表达与临床分期、淋巴结转移、预后等因素的关系。方法应用免疫化法检测58例鼻咽癌组织和20例慢性鼻咽炎症组织中p14ARF、mdm2、p53表达情况。结果(1)p14ARF、mdm2、p53在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎症组织中的阳性表达率分别为31.0%、41.4%、65.5%和100%、0、0,差异有统计学意义(P<0.05);(2)Spearman相关分析表明,鼻咽癌组织中p14ARF、mdm2、p53三者表达之间均无相关性;(3)p14ARF、mdm2、p53表达与鼻咽癌淋巴结转移、分期、性别、年龄无关;(4)Kaplan-Meier分析方法显示鼻咽癌组织中mdm2表达与生存时间相关(P<0.05);p14ARF、p53表达与生存时间无关。结论p14ARF、mdm2、p53可能参与了鼻咽癌的发生;mdm2表达可作为预测鼻咽癌放疗预后的一项参考指标。

p14^(ARF)、p73和p53在宫颈癌中的表达及其临床意义

目的 :探讨宫颈癌组织 p14 ARF、p73和 p5 3蛋白的表达及其临床意义。方法 :应用免疫组化方法检测 p14 ARF和 p73、p5 3基因在 4 1例宫颈癌及 2 0例正常宫颈组织中的表达。结果 :p14 ARF、p73、p5 3在宫颈癌中阳性率分别为 85 .4 % (35 / 4 1)、73.2 % (30 / 4 1)和 39.0 % (16 / 4 1) ,与正常宫颈组织相比 ,有显著差异。p14 ARF和 p73阳性率均随病理分级增高而增加 ,而与其它临床病理参数无关。p5 3表达与病理分级、临床分期和淋巴结转移有关 (P <0 .0 5 )。在宫颈癌中 ,p14 ARF与p73表达密切相关 (P <0 .0 1) ,p14 ARF与 p5 3表达不相关 (P >0 .0 5 )。结论 :p14 ARF与 p73在宫颈癌中同时高表达有一定诊断和预测价值 ,可能是宫颈癌新的肿瘤标志物。p5 3与宫颈癌的发生发展有关。

p14^(ARF)、p53蛋白与脑胶质瘤发生发展的相关性研究

目的探讨脑胶质瘤中p14ARF、p53蛋白表达与不同病理级别脑胶质瘤的相关性。方法应用免疫组织化学技术检测39例不同病理分级脑胶质瘤中p14ARF、p53蛋白表达,另8例正常脑组织作为正常对照。结果p14ARF、p53蛋白表达阳性率在低级别(Ⅰ级、Ⅱ级)分别为84.6%、61.5%,在高级别(Ⅲ级、Ⅳ级)脑胶质瘤中分别为38.5%、88.5%。p14ARF蛋白表达水平与脑胶质瘤病理分级之间呈显著负相关性(r=-0.512,P<0.01),p53蛋白表达水平与病理分级关系呈正相关性(r=0.447,P<0.01),p53与p14ARF的表达存在负相关性(P<0.05)。结论p14ARF、p53蛋白表达异常可导致细胞周期调控失常和细胞异常增殖,加速脑胶质瘤恶化,联合检测两者的协同表达可作为脑胶质瘤辅助诊断的参考指标。

p14^(ARF)、p53蛋白表达与H101治疗鼻咽癌疗效的关系

目的:观察肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达状态与E1B缺陷型腺病毒治疗鼻咽癌疗效的关系,探讨E1B缺陷型腺病毒(简称H101)基因治疗的作用机制。方法:应用免疫组织化学方法对36例H101治疗的晚期鼻咽鳞癌病例进行肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白检测,分析肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达与H101临床疗效的关系;结果:突变型p53和p14ARF蛋白在36例晚期鼻咽鳞癌中总阳性表达率分别为55.6%和44.4%;突变型p53+p14ARF+(即p14ARF蛋白无缺失)患者均无治疗有效病例;突变型p53+p14ARF-(即p14ARF蛋白有缺失)患者中有4例有效;结论:对于p53基因无突变的恶性肿瘤,p14ARF基因缺失可能是H101能在肿瘤细胞内有效复制并杀死肿瘤细胞的一个重要影响因素。

HCV核心蛋白,p53,Mdm2,p14^(ARF)在HCV肝炎肝硬化的表达及相关性

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)肝炎、肝硬化组织核心蛋白、突变p53,Mdm2,p14ARF的表达以及它们间的相关性,探讨HCV核心蛋白对突变p53,Mdm2,p14ARF的表达作用及临床意义.方法:收集HCV表达阳性的肝炎、肝硬化组织23例,采用免疫组织化学EnVision法检测HCV感染的肝炎、肝硬化组织中核心蛋白、突变p53,Mdm2,p14ARF的表达,用统计学方法及临床联系分析它们之间的关系.结果:核心蛋白、突变p53、Mdm2,p14ARF的阳性表达主要定位于细胞核中;核心蛋白阳性表达的组织中突变p53,Mdm2、p14ARF阳性率分别为87%,91.3%,65.2%;4组间的KruskalWallis检验P<0.01,差异显著,核心蛋白与p53,p14ARF间的MannWhitneyU秩和检验P值分别为0.05,0.01;HCVC蛋白与突变p53,Mdm2,p14ARF阳性强度两者间相关性Spearman检验P值分别为0.01,0.067,0.72,相关系数rp分别为0.71,0.493,0.053.结论:HCV核心蛋白可能促进野生p53突变和表达,同时也可能间接促进Mdm2和p14ARF的表达;核心蛋白、突变p53,Mdm2的共同作用可促进肝细胞增殖、非典型性增生及其转化.

p14^(ARF)和p53蛋白表达与脑胶质瘤发生发展的相关性研究

目的:探讨脑胶质瘤中p14ARF和p53蛋白表达与不同病理级别脑胶质瘤的相关性及两者之间的相互作用。方法:应用免疫组织化学技术检测31例不同病理分级脑胶质瘤中的上述遗传学改变,5例脑挫裂伤脑组织为正常对照。结果:p14ARF和p53蛋白在低级别(,级)和高级别(,级)脑胶质瘤中的表达阳性率分别为75.00%和30.43%,12.50%和69.57%。两蛋白在低级别和高级别中的表达差异均有显著性(P<0.05)。p14ARF表达水平与脑胶质瘤病理分级之间呈显著负相关性(r=-0.571,P<0.01),即随着肿瘤恶性度的升高而降低。而突变型p53蛋白正相反,与病理分级呈显著正相关性(r=0.472,P≤0.01),即随着肿瘤恶性度增高而增高。p14ARF和p53蛋白之间在肿瘤中存在明显的相互作用(P<0.05)。结论:p14ARF和p53蛋白表达异常可导致细胞周期调控失常和细胞异常增殖,并且二者之间存在协同作用,可加速脑胶质瘤恶性演进。

脑胶质瘤组织p14^(ARF)、p53和p21^(WAF1)的表达及其意义

目的:探讨p14ARF、p53和p21WAF1蛋白在不同级别脑胶质瘤组织中的表达及其在胶质瘤发生、发展中的生物学意义。方法:应用免疫组化SP法检测Ⅱ级和Ⅳ级胶质瘤组织中p14ARF、p53和p21WAF1蛋白的表达,并分析其与胶质瘤组织学分级之间的关系。结果:Ⅱ级和Ⅳ级胶质瘤中,p53蛋白的阳性表达率分别为28.00%(7/25)及60.87%(14/23)(P=0.022),其阳性表达率随胶质瘤恶性程度的增加而升高,Spearman等级相关分析显示,p53的表达与胶质瘤分级呈正相关(P<0.05);p21WAF1的阳性表达率分别为76.00%(19/25)及39.13%(9/23)(P=0.010),p14ARF的阳性表达率分别为76.00%(19/25)及34.78%(8/23)(P=0.004),二者阳性表达率均随胶质瘤恶性程度的增加而降低,Spearman等级相关分析显示,p21WAF1、p14ARF的表达与胶质瘤分级呈负相关(P<0.05)。结论:胶质瘤组织中,p53呈不同程度的过表达,且随胶质瘤恶性程度的增加而表达水平升高;p21WAF1、p14ARF随胶质瘤恶性程度的增加表达水平降低。突变型p53蛋白的过表达以及p21WAF1、p14ARF蛋白的低表达,可促进胶质瘤的发生、发展。

p14^(ARF)、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中表达的研究

目的探讨p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌中的表达及其意义。方法应用免疫组化法检测58例鼻咽癌组织和20例慢性鼻咽炎症组织中p14ARF、mdm2、p53蛋白的表达情况。结果p14ARF、mdm2、p53蛋白在鼻咽癌组织和慢性鼻咽炎症组织中的阳性表达率分别为31.0%、41.4%、65.5%和100%、0、0,各个蛋白在两组之间表达的差异有统计学意义(P<0.05)。结论p14ARF蛋白低表达以及mdm2、p53蛋白高表达与鼻咽癌有关。

脑胶质瘤中p14^(ARF)、MDM2及p53的表达及其意义

目的:探讨p14ARF、MDM2和p53蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及p14ARF-MDM2-p53通路在胶质瘤进展中的意义。方法:应用免疫组化SP法检测25例Ⅱ级和23例Ⅳ级胶质瘤组织中-p14ARF、MDM2和-p53蛋白的表达,并分析其与胶质瘤组织学分级之间的关系。结果:Ⅱ级和Ⅳ级胶质瘤中,MDM2蛋白的阳性表达率分别为24.00%(6/25)及56.52%(13/23)(P=0.021),p53蛋白的阳性表达率分别为28.00%(7/25)及60.87%(14/23)(P=0.022),二者阳性表达率均随胶质瘤恶性程度的增加而升高,Spearman等级相关分析显示,MDM2、p53的表达与胶质瘤分级呈正相关;p14ARF的阳性表达率分别为76.00%(19/25)及34.78%(8/23)(P=0.004),其阳性表达率随胶质瘤恶性程度的增加而降低,Spearman等级相关分析显示,p14ARF的表达与胶质瘤分级呈负相关(P<0.05)。结论:脑胶质瘤组织中,MDM2和p53均呈不同程度的过度表达,且随恶性程度的增加表达水平增高;而p14ARF随恶性程度的增加而表达水平降低。MDM2扩增、p53突变及p14ARF蛋白低表达均与胶质瘤的进展有关。

ARF对p53基因网络的调控作用

p53蛋白和可变阅读框(ARF)蛋白是两肿瘤抑制因子,它们在抑制肿瘤发生和细胞衰老中都有重要的作用.首次利用MM方程描述了抑癌基因ARF对癌症和衰老研究中的核心反馈环p53-Mdm2的作用,进一步认识了ARF对p53基因调控网络的影响,并通过仿真模拟说明了结果和基因网络调控的一致性.

胶质瘤中p14^(ARF)甲基化分析及其与p53表达的相关性研究

目的:探讨p14ARF甲基化与胶质瘤发生和预后的关系,及其与突变型p53(mutant type p53,mtp53)蛋白表达的相关性。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测33例胶质瘤和12例正常脑组织中p14ARF的甲基化状况。免疫组织化学法检测58例胶质瘤和12例正常脑组织中p14ARF和mtp53蛋白的表达。结果:胶质瘤与正常脑组织中p14ARF甲基化率分别为39.4%(13/33)和0(0/12),2组间差异有统计学意义(P<0.01)。低级别组胶质瘤甲基化率(6/15)与高级别组(7/18)间差异无统计学意义(P>0.05)。p14ARF甲基化情况与患者预后无明显相关性。mtp53蛋白在胶质瘤和正常脑组织中的阳性率分别为56.9%(33/58)和8.3%(1/12),2组间比较,差异有统计学意义(P<0.01),其表达在肿瘤高级别组中明显高于低级别组(P<0.05)。胶质瘤中mtp53蛋白表达与p14ARF甲基化呈负相关(P<0.05)。结论:p14ARF甲基化与胶质瘤发生密切相关,为胶质瘤发生的早期事件,检测p14ARF甲基化情况可作为胶质瘤早期诊断的分子生物学指标。

p14^(ARF)对人黑色素瘤细胞增殖的影响及其作用机理的初探

ARF (alternativereadingframe)作为INK4a/ARF的 β转录产物 ,能够稳定p5 3,诱导细胞周期阻断或凋亡 .利用高表达p1 4 ARF的人黑色素瘤细胞模型 ,探讨了ARF抑制细胞增殖的分子作用机理 .研究发现p1 4 ARF高表达能将细胞周期阻断在G1和G2期 ,p5 3,p2 1 cip1 和p2 7kip1 蛋白水平明显增强 ,而p ERK1 / 2 ,CyclinD1和CyclinE蛋白水平下降 ,明显抑制细胞生长 .提示p1 4 ARF能通过ERK (extracellularsignal regulatedkinase)

p14^(ARF)基因抑制肿瘤细胞增殖的研究

目的 :从正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增人的肿瘤抑制基因 p14 ARF,以研究其对人的多种肿瘤细胞生长的影响。方法 :应用RT -PCR技术 ,从培养的正常人肝细胞系L0 2细胞中扩增出 0 .4Kb的p14 ARFcDNA片段 ,测序正确后插入真核表达载体 pcDNA3上的BamHI和EcoRI位点 ,命名为 pcDNA3ARF。此质粒由脂质体Lipofec tamineTM介导转染肿瘤细胞Hep2、KB、KB -v2 0 0、HepG2、HLE、Huh7以及MCF7和MCF7/ADR ,经G4 18筛选 2周后统计形成的集落数。结果 :经抗生素G4 18筛选 2周后 ,发现p5 3阳性的肿瘤细胞HepG2、Hep2、MCF7形成的集落数较少 ,分别为 5 9± 2 .1,60± 2 .1和 66± 7.0 ,占各自对照组的 4 7% ,5 7% ,5 8% ;而 p5 3异常的肿瘤细胞KB ,HLE ,Huh - 7,则形成相对较多的集落 ,分别为 91± 2 .5 ,4 8± 2 .0 ,4 1± 2 .0 ,占各自对照组的 74 % ,65 % ,80 % ,但是二种p5 3异常的耐药肿瘤细胞株KB -v2 0 0和MCF7/ADR ,形成的集落数最少 ,分别为 13± 2 .0和 2 1± 1.5 ,占各自转染空载体 pcDNA3的对照组的 15 %和 17%。 结论 :p14 ARF能明显抑制 p5 3阳性肿瘤细胞的生长 ,具有 p5 3相关性 ;然而 p14 ARF对 p5 3阴性的耐药肿瘤细胞却具有强烈的抑制作用 ,由此提示 :p14 ARF抑制耐药肿瘤细胞的生长是 p5