MTS1基因ARF启动子基础转录调控区转录活性研究

目的 研究MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活及其与E2 F1转录因子之间的关系。方法 以含ARF启动子基础转录调控区E2 F1结合位点野生型序列的W6重组质粒为模板 ,设计该片段中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的引物 ,用聚合酶链反应构建该区域中E2 F1A、B、C结合位点序列突变或缺失的ZE、ZF、ZG重组质粒。再将W6、ZE、ZF、ZG重组质粒转染进Jurkat细胞 ,检测其荧光素酶报告基因的表达。结果 构建的ZE、ZF、ZG重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2 F1位点野生型重组质粒W6比较 ,突变型重组质粒ZE、ZF、ZG在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少 ,以E2 F1A位点突变的重组质粒减少明显。结论 构建ARF启动子E2 F1A、B、C结合位点序列突变的重组质粒成功 ;MTS1基因ARF启动子基础转录调控区的转录激活可能与E2 F1转录因子的作用有关。

棉花arf1启动子驱动Cry1A基因在烟草中特异性表达研究

在新一代Bt作物以及Bt作物安全性研究方面,Bt毒蛋白在植物特定发育阶段的表达特性渐受关注。本研究构建了植物表达载体pGBI121.A1Bt,其携带棉花arf1启动子驱动Cry1A基因的表达盒,启动子后面有一个Ω序列;对照载体pGBI121.4AB携带P2E35S启动子(增强子加倍的修饰CaMV35S启动子)驱动Cry1A基因的表达盒,在启动子后面也有一个Ω序列。利用根癌农杆菌介导法,将植物表达载体pGBI121.4AB和pGBI121.A1Bt转化烟草,分别获得44株和42株转基因烟草再生植株。ELISA检测表明,在pGBI121.A1Bt转基因烟草的蒴果、蒴果壳、花瓣和叶中Cry1A基因的平均表达水平分别为pGBI121.4AB的1.5、1.5、1.4和0.3倍。棉花arf1启动子在烟草中表达,证明了该启动子在植物生殖器官中具有优势表达特性,为arf1启动子应用于转基因抗虫棉,在棉花蕾铃中优势表达Bt毒蛋白,提高转基因棉花蕾铃抗虫性的新一代抗虫棉研究提供了依据。