ILY重组蛋白增强利妥昔单抗杀伤骨髓瘤ARH-77细胞的实验研究

目的通过体外实验观察CD59抑制物ILY重组蛋白增强利妥昔单抗(Rituximab)对多发性骨髓瘤ARH-77细胞的补体依赖性细胞毒性效应(CDC效应),探讨联合应用该蛋白治疗多发性骨髓瘤的可行性。方法 FACS分析法侦测ARH-77细胞系的CD20和CD59抗原表达。Alarma blue及Typan blue法观察联合应用ILY重组蛋白及利妥昔单抗对骨髓瘤ARH-77细胞的CDC效应。结果 ARH-77细胞呈现高的CD20及CD59抗原表达;联合应用ILY重组蛋白,能增强利妥昔单抗对ARH-77细胞的CDC效应,逆转其耐药性。结论 ILY重组蛋白可有效地增强利妥昔单抗对多发性骨髓瘤细胞的杀伤效应,有望成为一种新的单克隆抗体治疗肿瘤的辅助药物。

迷迭香酸抑制人多发性骨髓瘤ARH-77细胞增殖的作用机制

目的研究迷迭香酸(rosmarinic acid,RosA)对ARH-77细胞的抑制作用及其机制。方法采用CCK-8法检测RosA对ARH-77细胞增殖的影响,并由该结果确定实验组用药浓度分别为:20、40、80μmol·L^(-1),作用时间48 h;通过流式细胞术检测凋亡率;采用qPCR法检测Fas、caspase-8、caspase-9 mRNA表达;采用分光光度法检测caspase-8的活性;Western blot法检测t Bid、Fas、活性caspase-3和活性caspase-9的蛋白水平。结果 RosA能明显抑制ARH-77细胞的增殖;与对照组相比:各实验组均主要发生早期凋亡(P<0.01);各实验组活性的caspase-3、caspase-9水平均明显升高(P<0.01),caspase-8 mRNA表达也明显上调,但其蛋白活性仅在Ros A 80μmol·L^(-1)时明显升高(P<0.01);在Ros A(40、80μmol·L^(-1))组,caspase-9 mRNA表达明显上调(P<0.05,P<0.01),t Bid的蛋白表达也明显升高(P<0.01);Fas mRNA和蛋白表达仅在Ros A 80μmol·L^(-1)组明显升高(P<0.01)。结论 RosA诱导ARH-77细胞早期凋亡而导致了增殖抑制,死亡受体途径和线粒体途径可能共同参与了Ros A诱导的ARH-77细胞凋亡。

热化疗对ARH-77细胞株增殖抑制、凋亡及Bcl-2表达影响的研究

[目的]观察热疗联合阿霉素对人多发性骨髓瘤细胞株ARH-77的体外增殖抑制、凋亡及Bcl-2表达的影响。[方法]采用MTT法确定阿霉素的工作浓度,以该浓度进行化疗或与热疗的联合,选择温度40℃、41℃及42℃,作用于ARH-77细胞。采用绘制肿瘤细胞生长曲线、MTT法检测对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及Bcl-2表达。[结果]阿霉素IC50为8.16μg/ml,以此为实验的工作浓度。单纯热疗组60min对ARH-77细胞有抑制作用(P<0.01),并随温度增高而增强。单纯阿霉素化疗组对ARH-77细胞也有抑制作用。各热化疗组对ARH-77均有明显的抑制作用(P<0.01)。热疗组、化疗组及热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);Bcl-2蛋白表达下降,各组之间也有显著性差异(P<0.01)。[结论]热疗联合阿霉素能增强对ARH-77细胞的体外抑制作用,提高肿瘤细胞的凋亡率,下调Bcl-2蛋白的表达,为热化疗的临床应用提供实验室依据。