绵羊ARHGAP36全长cDNA的克隆及其蛋白在睾丸精细管中的分布检测

ARHGAP36是Rho GAPs家族的一员,在成神经管细胞瘤中超表达,可能参与调节细胞增殖。为了研究ARHGAP36在羊精子发生过程中的作用,采用RACE(rapid amplification of c DNA ends)技术从绵羊睾丸组织中克隆了SARHGAP36的c DNA全长序列。内部区域c DNA序列与5'RACE和3'RACE扩增的两端序列测序后拼接,得到了2698 bp的绵羊ARHGAP36 c DNA全长,其中包含一个长1593 bp的开放阅读框(ORF),编码530 aa,与Uni Prot中预测的牛ARHGAP36氨基酸序列(A7MB27)同源性为98%,说明我们克隆的c DNA是Rho GAP家族的成员ARHGAP36。对所克隆的绵羊ARHGAP36的氨基酸序列和Uni Prot数据库中所收集的所有其它ARHGAP成员的氨基酸序列比对分析显示,ARHGAP36没有其它ARHGAP成员都有的标志性"精氨酸指"基序,而它的对应基序中的保守精氨酸残基被苏氨酸替代了,暗示ARHGAP36很可能并不依靠酶催化活性发挥其功能。当把所克隆的c DNA与Gen Bank中发布的绵羊arhgap36序列比对时发现绵羊arhgap36基因组测序结果的第一个外显子中缺少一小段DNA,导致如果用该基因组序列预测绵羊ARHGAP36的c DNA,无法得到能编码正确氨基酸的c DNA,因此,实验为进一步研究ARHGAP36这个特殊ARHGAP成员的功能提供了正确的c DNA序列。绵羊睾丸总蛋白Western blot检测发现绵羊睾丸内的ARHGAP36有3种长度,免疫组织化学检测发现ARHGAP36蛋白在绵羊睾丸精细管中的精子发生过程中各类细胞中都有分布。

MiR-4719通过靶向调控ARHGAP36抑制人乳腺癌细胞的迁移和和侵袭

目的检测miR-4719在乳腺癌组织和细胞中的表达,研究其对乳腺癌细胞侵袭迁移的影响及其分子机制。方法采用实时荧光定量PCR检测30对人乳腺癌组织和癌旁组织,乳腺癌细胞株(BT549和MDA-MB-231)以及正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中miR-4719和ARHGAP36的表达水平。生物信息手段分析miR-4719对乳腺癌患者生存率的影响,并预测miR-4719的潜在靶基因。将miR-4719模拟物,靶向ARHGAP36的shRNA、ARHGAP36过表达质粒分别转染乳腺癌细胞。Western blot和免疫组化实验检测ARHGAP36的蛋白水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测癌细胞的迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-4719与ARHGAP36的mRNA 3'-非翻译区(3'-UTR)直接结合。结果与癌旁组织、正常乳腺上皮细胞相比,miR-4719和ARHGAP36分别在乳腺癌组织(P<0.001)和乳腺癌细胞(P<0.01)中显著降低和增高。miR-4719低表达与乳腺癌患者不良预后密切相关(P<0.01)。过表达miR-4719或敲低ARHGAP36可明显抑制乳腺癌细胞的侵袭和迁移(P<0.01)。乳腺癌组织中miR-4719和ARHGAP36表达水平呈负相关(P<0.01),双荧光素酶报告实验显示miR-4719可靶向调控ARHGAP36的表达(P<0.01),向癌细胞外源性导入miR-4719可明显抑制ARHGAP36的表达(P<0.01)。此外,过表达ARHGAP36可逆转miR-4719模拟物对癌细胞迁移和侵袭能力的抑制作用(P<0.01)。结论乳腺癌组织和癌细胞中miR-4719的丧失,导致靶基因ARHGAP36的异常高表达,促进了人乳腺癌细胞的迁移和侵袭。

ARHGAP36介导Hedgehog/Gli信号通路在骨性关节炎中的研究

观察ARHGAP36介导Hedgehog/Gli信号通路在骨性关节炎中的价值。方法 选取我院2023年1月至2023年6月收治的严重关节炎并行关节置换术的患者共112例作为本次的实验对象,以数字随机的分组方法对患者进行组别的分配并分别命名为对照组和给药组,保证两组内所包括的患者数量相关,即均为56例。通过MTT、AnnexinV-FITC/PI双染法及Quantitative real-time PCR等方法检测MMP13、Adamts5、RUNX2等的表达及细胞的增值、凋亡等情况。本次的观察指标包括了膝关节活动功能参数和骨性关节炎指数评分,通过上述指标的差异来分辨两组方法的异同。结果 给药组患者的治疗后的膝关节活动功能参数比对照组更好,差异有统计学意义(P<0.05);给药组的骨性关节炎指数评分比对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARHGAP36能促进Hedgehog信号通路的活化促进骨关节炎的发生和发展,GANT61药通过阻断Hedgehog信号通路是抗骨性关节炎的机制之一,是预防和治疗骨性关节炎的重要药物。