抑癌基因ARHI在人胃癌组织中的表达及意义

目的:研究ARHI基因在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达差异及其与患者临床病理特征的相关性.方法:用免疫组织化学SP法检测胃癌组织与癌旁正常组织中ARHI基因编码蛋白的表达情况,用SPSS13.0统计软件对ARHI蛋白的表达差异及其与患者的临床病理特征进行统计学分析.结果:ARHI蛋白在试验组中阳性表达27例,阴性表达35例,表达缺失率56.45%;对照组中阳性表达21例,阴性表达7例,表达缺失率25%,组间比较有明显统计学差异(P<0.01).在试验组中,ARHI蛋白表达与患者的年龄、性别、发生部位、肿瘤大小、大体类型、是否淋巴结转移及神经、脉管侵犯均无明显统计学差异,而与肿瘤的分化程度及TNM分期有关(P<0.05).结论:ARHI蛋白在胃癌组织中表达明显下调或缺失,而在胃正常组织中普遍表达.ARHI蛋白表达与患者肿瘤的分化程度及TNM分期有关.

印迹抑癌基因ARHI在浆液性卵巢癌中的表达及甲基化研究

目的研究浆液性卵巢癌组织中印迹抑癌基因ARHI mRNA的表达及其3个CpG岛的甲基化状态,以探讨ARHI基因及其甲基化修饰在卵巢上皮癌发生机制中的作用。方法正常卵巢及浆液性卵巢癌标本各20例,采用半定量RT-PCR方法检测ARHI mRNA表达,采用DNA亚硫酸盐修饰、PCR扩增及甲基化敏感性内切酶方法检测ARHI基因3个CpG岛的甲基化状态。结果ARHI/G3PDH在正常卵巢组织中为0.73±0.09,浆液性卵巢癌中为0.43±0.37(P<0.01)。正常卵巢组织的3个CpG岛均同时扩增出ARHI甲基化和非甲基化产物,呈正常半甲基化状态;浆液性卵巢癌的3个CpG岛则存在不同比例的甲基化异常,其中6例(30%)CpGⅠ、8例(40%)CpGⅡ、5例(25%)CpGⅢ处于高度甲基化状态。在浆液性卵巢癌组织中,8例ARHI基因表达缺失者均存在CpG岛的高度甲基化,其余12例中有5例存在CpG岛的高度甲基化,表达缺失者中CpG岛的高度甲基化率显著增高(P<0.01)。结论印迹抑癌基因ARHI启动子及编码区的3个CpG岛在浆液性卵巢癌组织中存在甲基化异常,并抑制了该基因的表达。

新抑癌基因ARHI在子宫内膜异位症中的表达及其意义

目的:研究子宫内膜异位症组织中抑癌基因ARHI蛋白的表达。方法:选择抗ARHI单克隆抗体,采用W estern blot免疫印迹法,对10例子宫内膜异位症的异位囊肿组织及其在位内膜组织进行蛋白检测,并以10例正常女性的在位内膜组织作对照。用Array 3000扫描仪扫描X线片,观察W estern blot的结果,用GDS8000型凝胶成像分析系统分析图片的辉度值和比值。结果:(1)ARHI在内异症异位内膜的表达高于在位内膜(P<0.001)及正常内膜(P<0.001);(2)内异症的在位内膜组与正常对照组比较,ARHI的表达无明显差异(P>0.05)。结论:抑癌基因ARHI在子宫内膜组织中普遍表达,且在异位内膜中表达上调,提示ARHI基因可能与子宫内膜异位症的发病及进展相关。

抑癌基因ARHI研究进展

ARHI(aplasia ras homologue member I)/NOEY2是1999年新发现的一个母源性抑癌印迹基因,位于人染色体1p31,编码一个相对分子量为26kD的小GTP结合蛋白。ARHI属ras/rap超家族成员,与该家族成员有50%～60%的同源性并且两者具有相似的GTP/GDP结合域,但与该家族其它成员不同,ARHI发挥抑癌基因作用,是该家族第一个被报道的肿瘤抑制基因。ARHI基因编码的蛋白在人类多种组织表达,而该基因在人卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌等多种肿瘤中表达下调或缺失,提示其与上述肿瘤的发生、发展密切相关。ARHI可能通过作用于cyclin D1,使其不能与CDK结合形成活性激酶,从而使细胞停止于G_1期来参与细胞周期调控;可能通过依赖caspase和calpain两条途径参与信号通路传导诱发细胞凋亡;另外,该基因可通过抑制STAT3的激活而发挥抑癌基因功能,也可以调节自体吞噬和肿瘤细胞休眠。目前研究显示,ARHI基因的表达缺失主要通过遗传事件和表观遗传学机制发生,包括DNA甲基化异常、杂合性丢失,乙酰化组蛋白的低水平表达及基因突变有关,但有待进一步深入研究。可以预见,ARHI基因的深入研究必将为早期肿瘤的基因诊治提供新的思路和理论依据。

抑癌基因ARHI在子宫内膜异位症及非子宫内膜异位症患者中差异表达的意义

目的研究子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)组织中抑癌基因ARHI的mRNA和蛋白表达情况。方法利用RT-PCR和Western Blot免疫印迹的方法,对EMs的异位内膜组织、在位内膜组织和非EMs在位内膜组织(正常内膜组织)进行mRNA和蛋白表达的半定量分析。利用原位杂交和免疫组化技术对研究各组进行定性及定位分析。结果 (1)ARHI mRNA和蛋白在各组中均有表达,异位内膜的表达高于在位内膜和正常内膜,差异显著(P<0.005),在位内膜组与正常对照组比较,ARHI的表达无明显差异(P>0.05);(2)原位杂交阳性率分别为非EMs组97.3%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组93.8%;(3)免疫组化阳性率分别为非EMs组93.2%,EMs异位内膜组100%,EMs在位内膜组92.3%;(4)ARHI的DNA与蛋白表达一致;(5)5例恶变的异位内膜ARHI免疫组化检测,4例呈阴性,1例呈弱阳性表达。结论抑癌基因ARHI在子宫内膜组织中均表达,且在异位内膜中呈表达上调,而在恶变的异位内膜中多呈阴性表达,提示ARHI基因可能与子宫内膜异位症不孕及恶变相关。

ARHI对5-FU诱导胃癌细胞周期阻滞和凋亡的影响

目的探讨ARHI对5-FU诱导胃癌细胞周期阻滞和凋亡的影响。方法以稳定转染p IRES2-EGFP或p IRES2-EGFP-ARHI重组质粒的BGC-823胃癌细胞系为模型,采用5-氟尿嘧啶(5-FU)刺激细胞24 h,通过流式细胞术检测细胞周期和凋亡的改变,利用Western blot检测cyclin D1、Bax、Bcl-2及活化caspase-3蛋白的表达水平。结果 ARHI与5-FU都能够导致BGC-823细胞发生G_1期阻滞,G_1期比例分别增加至61.64%±4.56%(P<0.05)和65.71%±4.89%(P<0.01),二者联合作用效果更明显,G_1期比例增加至81.14%±5.63%(P<0.01);ARHI与5-FU引起的G_1期阻滞与cyclin D1的表达水平降低相关;ARHI对BGC-823细胞凋亡没有影响,5-FU可导致细胞凋亡,凋亡率为7.22%±1.55%(P<0.01),而二者联合作用导致更显著的细胞凋亡,凋亡率达到17.34%±2.81%(P<0.01);5-FU单独或与ARHI联合促使Bax/Bcl-2比值增高、caspase-3的活化增强。结论 ARHI能够增强5-FU诱导的胃癌细胞周期阻滞和凋亡。

ARHI基因与肿瘤的关系

近年来研究表明,一种新的抑癌印迹基因ARHI(NOEY2)的异常参与了一些肿瘤的发生。该文就ARHI(NOEY2)的结构、功能及其与某些肿瘤的关系进行综述。

卵巢肿瘤组织中抑癌基因ARHI的表达及组蛋白去乙酰化酶抑制剂对其的影响

目的:检测卵巢肿瘤组织中ARHI的表达,探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲谷抑菌素(TSA)对恶性卵巢肿瘤细胞生长抑制作用和基因表达的影响。方法:利用RT-PCR技术检测正常卵巢组织和卵巢肿瘤组织中ARHI mRNA的表达,比较ARHI基因表达与肿瘤良恶性、恶性肿瘤临床分期、组织分型的关系。利用MTT和RT-PCR检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA对4种卵巢癌细胞珠(SKOV3、A2780、COC1、OC3)的生长和ARHI基因表达的影响。结果:①正常卵巢组织中ARHI表达均为阳性(100%),卵巢良性肿瘤组织、交界性、恶性组织中不同程度表达缺失;②ARHI的表达与卵巢肿瘤的良恶性有关(P<0.05),与恶性肿瘤的组织学分型无关(P>0.05),与卵巢肿瘤临床分期有关(P<0.05);③4种卵巢癌细胞系中均未见ARHI表达,组蛋白去乙酰化酶抑制剂作用后仅SKOV3细胞系ARHI表达增强;④组蛋白去乙酰化酶抑制剂对卵巢肿瘤细胞生长有较明显抑制率且与浓度和时间有关(P<0.05),与顺铂比较,两者对4种细胞系的抑制率无明显差异(P>0.05)。结论:ARHI基因在卵巢肿瘤组织中有不同程度的低表达甚至缺失,与卵巢肿瘤的恶性程度有关。组蛋白去乙酰化酶抑制剂能有效抑制卵巢肿瘤细胞活性,是治疗肿瘤的新靶点。

ARHI与妇科恶性肿瘤的关系

自噬是细胞通过自我消化实现大分子物质的循环再利用,维持细胞自身稳定的生物学过程。自噬活性的变化、自噬性细胞死亡与恶性肿瘤的发生、发展有关。自噬相关基因ARHI通过调节自噬活性,在肿瘤的发生、发展中发挥作用。ARHI调节自噬信号通路中某些关键激酶可能为肿瘤的治疗提供新的药物作用靶点。

抑制肿瘤小G蛋白ARHI研究进展

小GTP结合蛋白在细胞的整个生命活动中起着重要的作用.人类ARHI基因是小GTP结合蛋白中Ras亚家族的一个成员,系母系印迹基因,定位于染色体1p3l.ARHI基因含有两个外显子和一个内含子,启动子区域有转录抑制因子E2F结合位点、3’末端有Au-rich区域.在ARHI基因中存在三个CpG岛,其中第一个CpG岛位于该基因的启动子区域,第二个CpG岛跨越了启动子和第一个外显子区,第三个CpG岛处于第二个外显子之内.与正常细胞相比,ARHI基因在肿瘤细胞中表达受到抑制,其原因为ARHI基因的杂合缺失,CpG岛的异常甲基化,转录抑制因子增多和多聚组蛋白脱乙酰化酶表达加强等.ARHI通过需钙蛋白酶途径诱导细胞凋亡;通过与STAT3(信号转导与转录激活因子3)的结合阻滞癌变.

ARHI基因抑制胰腺癌细胞增殖的作用机制研究

目的观察ARHI基因对胰腺癌细胞增殖的影响,探讨其抑制细胞增殖的机制。方法 2009年3-9月人胰腺癌细胞株PANC-1选自北京协和医院,根据转入质粒将培养细胞分为Control组(无转染质粒的PANC-1细胞)、Vector组(稳定表达pIRES2-EGFP质粒的PANC-1细胞)、ARHI组(稳定表达pIRES2-EGFP-ARHI质粒的PANC-1细胞)。通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法分析3组胰腺癌细胞在培养第0、1、2、3、4、5天增殖情况;应用流式细胞仪检测3组胰腺癌细胞周期;通过Western blotting法检测3组ARHI、磷酸化丝氨酸蛋白激酶(p-AKT)、MDM2、p53、p21^(WAF1)、丝氨酸蛋白激酶(AKT)表达;应用碘化丙啶(PI)-3K/AKT抑制剂LY294002干预ARHI组,检测ARHI、p-AKT、MDM2、p53、p21^(WAF1)、AKT表达。结果 3组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Vector组培养第4、5天细胞增殖情况与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组培养第1、2、3、4、5天细胞增殖情况与Control组和Vector组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组细胞周期比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。Vector组G_0-G_1期、S期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组G_0-G_1期、S期细胞所占比例与Control组和Vector组比较,差异有统计学意义(P<0.05);ARHI组G_2-M期细胞所占比例与Control组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。与Control组和Vector组相比,ARHI组p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21^(WAF1)表达增多,而AKT表达没有变化;ARHI组加入LY294002与未加入LY294002相比,p-AKT、MDM2表达降低,p53、p21^(WAF1)表达增加,而ARHI、AKT表达没有变化。结论 ARHI基因通过抑制PI-3K/AKT/MDM2,导致p53、p21^(WAF1)表达上调,在胰腺癌发生中起着重要的作用。

ARHI基因对胃癌细胞株MKN28增殖、侵袭、凋亡的影响及其机制研究

背景ARHI已经被证实表达缺失与肿瘤的发生与进展相关.但是,目前尚不清楚ARHI基因对胃癌(gastric cancer,GC)是否具有增殖抑制作用,此次实验以GC细胞株MKN28为例,构建高表达pcDNA3.1-ARHI质粒,通过细胞转染技术转染MKN28细胞株,进一步研究ARHI基因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响.目的以GC细胞MKN28为例,研究ARHI基因对GC细胞增殖、侵袭及凋亡的影响,并探讨其机制.构建pcDNA3.1-ARHI质粒,通过细胞转染技术转染MKN28细胞株,取处于对数期的空白对照组、阴性对照Mock组及ARHI高表达克隆株clone4细胞进行实验,以MTT比色法检测细胞增殖;细胞划痕检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测相关蛋白表达.结果与正常MKN28细胞48 h增殖率1.257%±0.006%相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48h细胞增殖率分别为1.163%±0.003%(P>0.05),0.826%±0.005%(P<0.05);与正常MKN28细胞48 h迁移率(19.918%±0.233%)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞迁移率分别为18.295%±0.534%(P>0.05),4.299%±1.572%(P<0.05);与正常MKN28细胞48 h侵袭率(234±3.61)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞侵袭率分别为235±4.51(P>0.05),93.3±2.08(P<0.05);与正常MKN28细胞48 h总凋亡率(3.513%±0.015%)相比,Mock组与ARHI高表达克隆株48 h细胞总凋亡率分别为3.597%±0.25%(P>0.05),14.133%±0.032%(P<0.05);Western blot检测各组细胞内蛋白结果显示:与MKN28细胞相比,Mock组中ARHI蛋白为1.037±0.003(P>0.05),血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白为1.026±0.008(P>0.05),B淋巴细胞瘤-2(B-cel l lymphoma-2,Bcl-2)蛋白为1.014±0.010(P>0.05),蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)蛋白为1.001±0.005(P>0.05),磷酸化AKT(p-AKT)蛋白为0.977±0.003(P>0.05);高表达克隆株clone4中ARHI蛋白为2.088±0.007(P<0.05),VEGF蛋白为0.456±0.004(P<0.05),Bcl-2蛋白为0.468±0.005(P<0.05),AKT蛋白为0.969±0.005(P>0.05),p-AKT蛋白为0.502±0.001(P<0.05).结论ARHI基因过表达可抑制GC细胞MKN28的增殖,促进细胞凋亡,这可能与ARHI基因高表达后导致磷脂酰肌醇3-激酶/AKT通路中的VEGF、p-AKT蛋白表达降低有关.

ARHI基因转染胰腺癌PANC1细胞后对趋化因子及其受体相关基因表达的影响

目的 观察ARHI基因转染胰腺癌PANC1细胞后对趋化因子及其受体相关基因mRNA表达的影响.方法 采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒pLNCX2-ARHI-EGFP、空质粒pLNCX2-EGFP转染胰腺癌PANC1细胞,应用G418筛选稳定转染细胞株.采用基因芯片RT2 ProfilerTMPCR Array行实时定量PCR,分析转染细胞的基因表达,包括84个趋化因子及受体相关基因,采用Real-time PCR法验证与血管生长相关基因mRNA的表达.结果 ARHI转染组细胞有36个基因mRNA表达下调,9个基因mRNA表达上调,39个基因mRNA表达变化无意义.其中肿瘤转移和侵袭相关基因CXCL12、CXCR4表达显著下调（〈-6倍）,MMP-2表达轻度下调（〈-2倍）;促肿瘤血管生成相关基因CCL2、CXCL1、CXCL2、CXCL8、CXCL12、CXCR4表达显著下调,CXCL3、CCR1、CCR2表达轻度下调;抗肿瘤血管生成相关基因CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCR3表达显著上调（〉6倍）;远端器官定位浸润和潜伏相关基因CXCL12、CXCR4、CCR7表达显著下调,CXCR5表达轻度下调;肿瘤免疫调节相关基因CXCL8、CXCR1、CCR7表达显著下调.Real-time PCR验证CXCL1、CXCL8、CXCR4、CXCR3结果与PCR Array检测结果一致.结论 ARHI基因可抑制胰腺癌细胞增殖、转移、血管生成、免疫调节相关趋化因子及其受体的基因表达.

ARHI基因转染PANC1细胞后对细胞凋亡和自噬相关基因表达谱的影响

目的 观察ARHI基因转染PANC1细胞后对细胞凋亡和自噬相关基因mRNA表达谱的影响.方法 采用脂质体法将表达ARHI基因的质粒pIRES2-EGFP-ARHI、空质粒pIRES2-EGFP转染胰腺癌PANC1细胞.采用基因芯片RT2ProfilerTM PCR Array行实时定量PCR,分析转染细胞的基因表达谱,包括84个与凋亡和自噬相关基因.结果 ARHI基因转染组PANC1细胞有9个基因mRNA表达下调,38个基因mRNA表达上调,37个基因mRNA表达变化无意义.在与凋亡相关的基因中有8个促凋亡基因表达显著上调（＞6倍）,主要为TNFR/TRFSR家族基因（TNFSF8、TNFRSF10B、TNFRSF11B、TNFRSF9）、CIDE家族基因（DFFA）、CASP家族基因（CASP10、CASP8）和死亡结构域家族基因（DAPK1）,其中以DAPK1上调尤为明显,达42.83倍;抗凋亡基因中3个基因（CD27、BCL2L10、BIRC4）表达显著上调（＞6倍）,3个基因（BCL2、BAD、BAG4）表达轻度上调（＞2倍）,1个基因（BCL2L1）表达轻度下调（＜-2倍）.在与自噬相关的基因中3个促自噬基因（TNFRSF10B、DAPK1、CASP10）表达显著上调（＞6倍）,4个基因（TNFRSF10A、FADD、TP53、TP53 BP2）表达轻度上调（＞2倍）;3个抑制自噬基因（BCL2、CASP8、FAS）表达轻度上调（＞2倍）,1个基因（MCL1）表达轻度下调（＜-2倍）.结论 ARHI基因显著上调细胞凋亡及自噬重要调控基因Caspase-8和DAPK1.

1p31杂合性丢失及ARHI抑癌基因在宫颈腺癌中的作用

目的:研究宫颈腺癌1p31杂合性丢失的发生率,探讨在此位点的ARHI基因在宫颈腺癌发生发展中的作用。方法:采用PCR银染技术检测30例宫颈腺癌中1p31杂合性丢失的发生率,其中Ⅰ,Ⅱ期18例,Ⅲ、Ⅳ期12例,免疫组化方法检测在此位点的ARHI蛋白的表达。结果:30例宫颈腺癌组织中LOH阳性的比例为63.33%(19/30),Ⅲ期、Ⅳ期LOH阳性率明显高于Ⅰ,Ⅱ期,差异有统计学意义(χ2=5.98,P<0.05)。在高、中、低分化癌中无统计学差异(χ2=4.88,P>0.05),ARHI蛋白的阳性表达率与淋巴结转移无关,差异无统计学意义(χ2=2.16,P>0.05)。宫颈腺癌组织中ARHI表达(46.67%,14/30)低于正常宫颈组织(90.0%,27/30),差异具有统计学意义(χ2=13.02,P<0.05)。结论:1p31位点可能存在宫颈腺癌相关抑癌基因,ARHI基因在宫颈腺癌发生发展过程中起重要作用。