siRNA沉默ARK5基因对SMMC-7721细胞侵袭及MMP-2蛋白分泌的影响

目的:观察siRNA沉默ARK5基因的表达对肝癌SMMC-7721细胞侵袭及MMP-2蛋白分泌的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot法检测SMMC-7721细胞和正常肝细胞LO2中ARK5的表达。体外合成靶向ARK5基因的siRNA,转染肝癌SMMC-7721细胞,并设阴性对照和空白对照,采用Western blot方法检测3组细胞中ARK5蛋白的表达,通过Transwell小室模型检测细胞的体外侵袭能力,采用ELISA法检测细胞培养基中MMP-2蛋白的含量。结果:SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白的表达水平高于LO2细胞(P<0.05);沉默ARK5基因后,SMMC-7721细胞的侵袭受到抑制,且MMP-2蛋白的分泌水平低于阴性对照和空白对照(P<0.05)。结论:沉默ARK5基因可能通过MMP-2途径抑制SMMC-7721细胞的侵袭。

ARK5在肝癌组织中的表达及其对肝癌SMMC-7721细胞生长的影响

目的:检测ARK5在肝癌组织及肝癌SMMC-7721细胞中表达水平,探讨其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用PCR和Western blotting法检测30例肝癌组织及癌旁组织、正常肝细胞LO2及肝癌SMMC-7721细胞中ARK5 mRNA和蛋白表达水平;合成ARK5的小干扰RNA(siRNA)和阴性对照siRNA,转染至SMMC-7721细胞分别为实验组和阴性对照组,同时设空白对照组,采用MTT法和流式细胞术检测各组肝癌细胞的增殖活性和细胞凋亡率。结果:PCR和Western blotting法检测,肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中ARK5mRNA和蛋白表达水平明显高于癌旁组织和LO2细胞(P<0.05)。MTT法检测,实验组24、48和72h细胞生长抑制率分别为(19.39±5.42)%、(23.19±0.53)%和(20.74±1.23)%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01);流式细胞术检测,实验组细胞凋亡率为(15.017±0.945)%,与空白对照组[(8.770±0.656)%]和阴性对照组[(8.763±1.201)%]比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ARK5在肝癌组织和肝癌SMMC-7721细胞中表达水平明显升高,抑制其表达可抑制肝癌细胞生长,促进肝癌细胞凋亡,提示ARK5可能作为一种癌基因促进肝癌的形成。