ARLTS1基因重组质粒对卵巢癌细胞株SKOV3生长和凋亡的影响

目的探讨Ras超家族成员ARLTS1基因对卵巢癌细胞株SKOV3生长及凋亡的影响。方法构建真核表达质粒pCMV-Tag3B-ARLTS1,并转染卵巢癌SKOV3细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测ARLTS1基因转染组、空载体pCMV-Tag3B转染组和未转染组中ARLTS1 mRNA及蛋白表达水平,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等生物学行为的变化,Western blot检测细胞caspase-3和bcl-2蛋白表达水平的变化。结果真核表达质粒pCMV-Tag3B-ARLTS1转染SKOV3细胞后,经PCR和Western blot证实转染成功。ARLTS1转染SKOV3细胞后,细胞生长明显受抑(P<0.05)。流式细胞术检测发现ARLTS1基因转染组与空载体转染组及未转染组细胞相比,S期细胞比例明显增多(P=0.035和0.011),细胞凋亡率(36.7%)显著高于另两组细胞(P均<0.001)。ARLTS1基因转染组细胞中caspase-3和bcl-2蛋白表达水平分别下降34.9%和47.7%,与未转染组细胞相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论ARLTS1基因转染后能抑制人卵巢癌细胞SKOV3的生长,调控SKOV3细胞周期,可能通过caspase途径促进肿瘤细胞凋亡。

逆转录病毒介导ARLTS1基因表达抑制肝癌细胞HepG2的增殖

目的构建高表达ARLTS1基因的逆转录病毒载体(PLEGFP-IRES-ARLTS1),探讨外源性ARLTS1基因对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法 RT-PCR扩增ARLTS1 cDNA,克隆至重组逆转录病毒载体PLEGFP-IRES。重组质粒转染病毒包装细胞PT67,产生病毒后感染HepG2细胞,荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,Western Blot检测细胞内ARLTS1蛋白表达,并对感染后细胞的增殖状况进行分析。结果酶切及基因测序证实重组质粒PLEGFP-IRES-ARLTS1构建成功;荧光显微镜观察到70%左右靶细胞内有绿色荧光蛋白表达;Western Blot证实,ARLTS1蛋白在HepG2-ARLTS1内表达显著升高;MTT实验显示,HepG-2-ARLTS1细胞组体外增殖率较各对照组明显降低(P<0.05)。结论获得了稳定表达外源性ARLTS1蛋白的HepG2细胞株,外源性ARLTS1抑制HepG2细胞增殖,为后续研究ARLTS1抗肿瘤机制奠定了基础。

ARLTS1基因在早发性卵巢癌中的突变分析

目的探讨中国南方地区汉族妇女早发性卵巢癌与ADP核糖体化因子样肿瘤抑制基因1(ARLTS1)突变的关系。方法采集早发性卵巢癌、晚发性卵巢癌患者及健康对照妇女的病理石蜡卵巢癌标本及新鲜血液标本,抽提DNA行ARLTS1基因的PCR扩增,扩增产物进行高效液相色谱法分析(DHPLC),对杂合峰型的DNA样本测序以确定特异性的突变。结果早发性卵巢癌组ARLTS1 Cys148Arg(T442C)基因突变所致的发病风险显著高于健康对照组(TC+CC vs TT,OR=3.93,95%CI为1.50～10.32,P=0.0044;CC vs TT,OR=5.25,95%CI为1.28～21.58,P=0.017)。与晚发性卵巢癌组相比,ARLTS1 Cys148Arg基因突变也可显著增高早发性卵巢癌风险(TC+CC vs TT,OR=3.56,95%CI为1.36～9.33,P=0.0085;CC vs TT,OR=4.0,95%CI为1.04～15.38,P=0.038)。与健康对照组相比,ARLTS1 Cys148Arg基因突变对晚发性卵巢癌的发病风险影响无明显差异(TC+CC vs TT,OR=1.11,95%CI为0.46～2.66,P=0.82)。ARLTS1 Ser99Ser(S99S)突变在早发性卵巢癌组、晚发性卵巢癌组和健康对照组间发生率均差异无统计学意义。结论ARLTS1Cys148Arg突变与早发性卵巢癌发生风险显著相关,提示ARLTS1基因突变可能是早发性卵巢癌发病相关的重要遗传学因素。

新的肿瘤抑制基因-ARLTS1

小分子GTP蛋白涉及肿瘤发生中多条信号通路的改变。类核糖基化因子肿瘤抑制基因1（ADP-ribosylation factor-like tumor suppressorgene1，ARLTS1），是小分子GTP蛋白Ras超家族中ARF家族的成员之一。该基因是低显性基因，可因启动子超甲基化而失调。有两种ARLTSl的多态性与肿瘤的家族风险相关。ARLTS1表达下调与部分肿瘤发生有重要关系，而恢复其表达则会诱导caspase依赖的细胞凋亡发生，并减少肿瘤的体内生长。通过基因微阵列实验发现，转导ARLTS1基因诱导细胞凋亡过程中众多涉及细胞存活、增殖和发育的信号通路。