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胸腺嘧啶糖苷酶对人ARPE19细胞增殖迁移的影响
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作者 杨延辉 田静 +4 位作者 刘通 陈赢 刘河涛 王琦 王大军 《大医生》 2019年第16期11-13,共3页
目的研究胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)在人视网膜色素上皮细胞(ARPE19)中低表达对细胞增殖和迁移的影响。方法利用CRISPR/Cas9、慢病毒、测序、Western Blot和显微呈像技术,测定对细胞的增殖和迁移的影响。结果干扰TDG基因后,TDG蛋白在ARPE19细... 目的研究胸腺嘧啶糖苷酶(TDG)在人视网膜色素上皮细胞(ARPE19)中低表达对细胞增殖和迁移的影响。方法利用CRISPR/Cas9、慢病毒、测序、Western Blot和显微呈像技术,测定对细胞的增殖和迁移的影响。结果干扰TDG基因后,TDG蛋白在ARPE19细胞中被抑制;同时也抑制了ARPE19细胞的增殖和迁移,TDG基因敲低组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。结论干扰TDG基因能抑制ARPE19细胞的增殖和迁移,提示TDG可能是治疗PVR的潜在新靶标。 展开更多
关键词 增生性玻璃体视网膜病变 胸腺嘧啶糖苷酶 增殖 迁移 arpe19
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雷帕霉素对ARPE19细胞分化的调控作用
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作者 蒋超 赵晨 +1 位作者 石厚霞 丁思加 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1064-1068,共5页
背景视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是多种遗传性视网膜变性疾病治疗的研究方向,但体外培养的RPE细胞系都存在细胞的去分化问题,而研究表明哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的异常激活会导致RPE细胞的去分化状态。因此抑制m... 背景视网膜色素上皮(RPE)细胞移植是多种遗传性视网膜变性疾病治疗的研究方向,但体外培养的RPE细胞系都存在细胞的去分化问题,而研究表明哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的异常激活会导致RPE细胞的去分化状态。因此抑制mTOR信号通路应有助于抑制RPE细胞的去分化状态。目的观察雷帕霉素是否能够抑制mTOR信号通路,调控人RPE细胞系ARPE19细胞的分化。方法将ARPE19细胞接种于12孔板进行培养并分为对照组和雷帕霉素组,分别在培养基中添加DMSO和终浓度400nmol/L的雷帕霉素,分别于细胞培养后24h和48h收集各组细胞,通过免疫荧光法检测各组细胞中闭锁小带1(ZO-1)蛋白的表达,分别采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中RPE特异性基因和蛋白的相对表达量。结果免疫荧光检测结果显示,雷帕霉素组细胞培养后24h和48h,细胞中ZO-1表达的荧光强度均明显增强。实时荧光定量PCR结果显示,雷帕霉素组ARPE19细胞处理后24h,RPE细胞特异性基因RPE65、MERKT和LRAT mRNA相对表达量较对照组分别提高了25.97%、29.71%和13.00%,差异均有统计学意义(P=0.04、0.04、0.04);雷帕霉素组细胞处理后48h,RPE65、LRAT、rLBP1、BEST1、keratin18和MERKT mRNA的相对表达量较对照组分别提高了174.00%、88.00%、56.18%、193.81%、10.83%和35.02%,差异均有统计学意义(P=0.00、0.04、0.U1、0.04、0.04、0.03)。Western blot检测结果显示,雷帕霉素组细胞处理后24h和48h,细胞中Akt/mTOR信号通路相关蛋白p-mTOR、p-P70S6和p—S6表达条带均较对照组均明显减弱;雷帕霉素处理细胞后24h,细胞中RPE特异性蛋白ZO-1蛋白的相对表达量提高40%,差异有统计学意义(P=0.01);雷帕霉素处理细胞后48h,ZO-1、MERKT、Catenin和LRAT蛋白的相对表达量较对照组分别提高36.00%、57.37%、13.68%和41.07%,差异均有统计学意义(P=0.Ol、0.00、0.04、0.04)。结论雷帕霉素可以抑制mTOR信号转导通路的激活,上调ARPE19细胞中RPE特异性基因的表达;抑制mTOR信号转导通路后体外培养的RPE细胞系更接近于活体RPE细胞。 展开更多
关键词 arpe19细胞 雷帕霉素 哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白信号通路 分化
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Biosafety of a 3D-printed intraocular lens made of a poly (acrylamide-co-sodium acrylate) hydrogel in vitro and in vivo 被引量:1
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作者 Jia-Wen Li Yi-Jian Li +4 位作者 Xi-Su Hu Yu Gong Ben-Bin Xu Hai-Wei Xu Zheng-Qin Yin 《International Journal of Ophthalmology(English edition)》 SCIE CAS 2020年第10期1521-1530,共10页
AIM:To assess the biosafety of a poly(acrylamide-cosodium acrylate)hydrogel(PAH)as a 3D-printed intraocular lens(IOL)material.METHODS:The biosafety of PAH was first evaluated in vitro using human lens epithelial cells... AIM:To assess the biosafety of a poly(acrylamide-cosodium acrylate)hydrogel(PAH)as a 3D-printed intraocular lens(IOL)material.METHODS:The biosafety of PAH was first evaluated in vitro using human lens epithelial cells(LECs)and the ARPE19 cell line,and a cell counting kit-8(CCK-8)assay was performed to investigate alterations in cell proliferation.A thin film of PAH and a conventional IOL were intraocularly implanted into the eyes of New Zealand white rabbits respectively,and a sham surgery served as control group.The anterior segment photographs,intraocular pressure(IOP),blood parameters and electroretinograms(ERG)were recorded.Inflammatory cytokines in the aqueous humor,such as TNFαand IL-8,were examined by ELISA.Cell apoptosis of the retina was investigated by TUNEL assay,and macro PAHge activation was detected by immunostaining.RESULTS:PAH did not slow cell proliferation when cocultured with human LECs or ARPE19 cells.The implantation of a thin film of a 3 D-printed IOL composed of PAH did not affect the IOP,blood parameters,ERG or optical structure in any of the three experimental groups(n=3 for each).Both TNFαand IL-8 in the aqueous humor of PAH group were transiently elevated 1 wk post-operation and recovered to normal levels at 1 and 3 mo post-operation.Iba1+macroPAHges in the anterior chamber angle in PAH group were increased markedly compared to those of the control group;however,there was no significant difference compared to those in the IOL group.CONCLUSION:PAH is a safe material for 3D printing of personal IOLs that hold great potential for future clinical applications. 展开更多
关键词 CATARACT BIOSAFETY lens epithelial cells arpe19 cells intraocular lens 3D printing poly hydrogel rabbit
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CDADC1在人视网膜色素上皮细胞中功能研究 被引量:1
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作者 沈旻倩 刘锦 +1 位作者 周建丽 刘庆淮 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第23期4454-4459,共6页
目的:研究细胞增殖相关基因CDADC1在人视网膜色素上皮细胞ARPE19中的表达及对ARPE19细胞增殖的影响。方法:采用基因重组技术构建荧光表达载体pEGFP-C1-CDADC1和真核表达载体pcDNA3.1-myc-CDADC1,用脂质体转染法转染ARPE19细胞,观察GFP-C... 目的:研究细胞增殖相关基因CDADC1在人视网膜色素上皮细胞ARPE19中的表达及对ARPE19细胞增殖的影响。方法:采用基因重组技术构建荧光表达载体pEGFP-C1-CDADC1和真核表达载体pcDNA3.1-myc-CDADC1,用脂质体转染法转染ARPE19细胞,观察GFP-CDADC1融合蛋白在ARPE19细胞的表达定位,流式细胞仪测定CDADC1转染后对ARPE19细胞生长周期、凋亡的影响。结果:FP-CDADC1融合蛋白亚细胞定位显示,CDADC1低表达于ARPE19细胞胞浆,高表达于细胞核;pcD-NA3.1-myc-CDADC1瞬时转染ARPE19细胞显示24小时细胞无明显改变,48小时后重组质粒转染组S期细胞占细胞总数的19.37%,pcDNA3.1-myc空载质粒转染组S期细胞占10.87%,而空白对照组S期细胞占3.33%,重组质粒转染组与两对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CDADC1在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生和发展过程中可促进DNA的合成,引起细胞增生。 展开更多
关键词 CDADC1 细胞增殖 arpe19 增生性玻璃体视网膜病变
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