酿酒酵母ARS305侧翼序列对其自主复制活性的影响

利用PCR技术扩增了酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ⅲ号染色体上以ARS(Autonomously replicating sequence,ARS)305为核心的不同长度侧翼序列,并将其构建到酵母整合型载体pRS405中获得了重组质粒PA500、PA1000、PA2000,然后通过电转化法转入酿酒酵母细胞中,测定了不同ARS305片段对酵母转化效率及质粒在酵母中稳定性。结果表明,并非侧翼序列越长ARS活性越高,重组质粒PA1000具有比PA2000更高转化频率和转化稳定性,推测ARS两侧序列存在一些顺式和反式的调控机制影响ARS自主复制功能。

啤酒酵母Ⅲ号染色体ARS305附近核小体的定位

以微球菌核酸酶法分离的啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)染色体单核小体DNA为模板进行PCR,根据不同靶序列PCR产物拷贝数的不同定位核小体位置。结果表明,啤酒酵母Ⅲ号染色体ARS305附近核小体位置大约在39107位到39269位、39318位到39470位及39540位到39694位之间,理论计算结果与试验结果基本一致。