大蒜叶凝集素基因ASAL的克隆与表达载体的构建

大蒜叶凝集素基因(Allium sativum leaf agglutinin,ASAL)是一种高活性的凝集素基因,且具显著的抗虫性。克隆大蒜ASAL基因将为其在转基因作物中抗虫特性研究奠定基础。本文以GenBank公布的ASAL基因序列设计特异引物,采用RT-PCR法从当地大蒜品种二水早和新都软叶的幼苗中克隆ASAL基因。结果表明,克隆的两个ASAL基因与已知基因的碱基序列相似性分别为98.7%和98.9%,氨基酸序列相似性为98.3%。将其亚克隆至表达载体中,经菌落PCR和酶切鉴定,成功构建了重组质粒。将该载体导入农杆菌EHA5a进行保存。