白术内酯Ⅲ调控ASCT2介导的线粒体-溶酶体互作诱导肝星状细胞衰老的抗肝纤维化机制研究

目的探究白术内酯Ⅲ诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)衰老抗肝纤维化作用及机制。方法ASCT2 siRNA及白术内酯Ⅲ(40μmol·L^(-1))分别作用于人源肝星状细胞LX2以抑制ASCT2,MTT评估细胞活力,EdU法检测细胞增殖,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;Western blot检测LX2细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的变化,激光共聚焦检测LC3自噬流和错误蛋白堆积的变化,同时观察溶酶体标记物LAMP1的荧光情况,以检测溶酶体功能和数量;试剂盒检测LX2细胞内ROS、MDA水平及SOD活力,流式细胞术分析线粒体ROS水平及膜电位。构建CCl 4诱导的小鼠肝纤维化模型,白术内酯Ⅲ20、30、40 mg·kg^(-1)治疗性给药,HE、Masson和Sirius Red染色观察肝脏组织破坏以及胶原沉积情况,Western blot检测各组小鼠P21、P16表达水平,SA-β-Gal染色以及免疫组化分析衰老细胞的情况和来源。结果抑制ASCT2后,LX2细胞活力降低、衰老增加(P<0.01),同时细胞自噬功能增强、溶酶体数量增多但功能减弱,加入氯喹(Chloroquine,CQ)清除溶酶体后,细胞活力和自噬功能增加(P<0.01)。抑制ASCT2后,LX2细胞内MDA、ROS水平上升,SOD活力下降(P<0.01),其中线粒体ROS水平上升及膜电位下降(P<0.01),加入鱼藤酮后,细胞氧化还原稳态和溶酶体数量恢复(P<0.01)。体内实验结果表明,与模型组比较,白术内酯Ⅲ改善肝组织结构破坏以及胶原沉积,诱导肝纤维化小鼠肝组织中的HSC发生衰老,抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,促进衰老指标P16、P21的表达(P<0.01)。结论白术内酯Ⅲ通过抑制ASCT2诱导线粒体ROS增多、膜电位下降,进一步促进HSC自噬功能增强、溶酶体数量增多和功能减弱,从而诱导活化型HSC发生衰老。

髓外多发性骨髓瘤的治疗进展

多发性骨髓瘤(Multiple myeloma, MM)是一种浆细胞异常克隆性增殖导致的恶性肿瘤,髓外多发性骨髓瘤(Extramedullary multiple myeloma, EMM)为MM细胞恶性增殖后产生侵蚀骨表面或骨外部组织的实体瘤。有70%的MM患者尸检时发现伴有髓外肿块,表明EMM的发生率高。现有的治疗手段虽使MM的疗效得到巨大改善,但EMM的预后仍较差。本文就EMM的治疗现状进行综述,主要从蛋白酶体抑制剂(Proteasome inhibitors, PI)联合免疫调节剂治疗(Immunomodulatory drugs, IMiD)、嵌合抗原受体T细胞(Chimeric antigen receptor T-cell, CAR-T)免疫治疗、自体干细胞移植(Autologous stem cell transplantation, ASCT)、核输出蛋白抑制剂及单克隆抗体苯达莫司汀治疗6个方面进行介绍,以期为临床医生选择治疗方案提供参考。

基于MAS的农产品供应链可追溯系统研究

为了克服现有农产品供应链追溯系统的缺陷,提出了一种基于多Agent系统的可追溯系统。通过定性研究的方法,对Agent技术运用在农产品质量追溯方面的相关问题进行了研究。构建了该系统的实体模型,确定了系统的追溯体系结构,最后对主要实体的实现算法进行了描述。通过对算法的分析,证明该系统在提高产品追溯的广度与深度有一定参考价值。

肠黏膜上皮细胞的载体分布及功能

目的:谷氨酰胺是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内。研究IEC-6细胞膜上分布的谷氨酰胺载体种类及其功能。方法:体外培养肠黏膜上皮细胞株IEC-6,检测细胞膜上不同谷氨酰胺载体(ASCT2、SN1、SN2、ATA1、ATA2、LAT1、LAT2)的mRNA;检测载体ASCT2蛋白;测定不同载体对同位素标记谷氨酰胺的转运特性。结果:在IEC-6细胞膜上载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2的mRNA均得以表达。细胞外缓冲液中Na+存在时,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(164.07±37.94)fmol/(mg protein.10 min);Na+不存在时,[3H]-谷胺酰胺摄取率为(58.71±10.51)fmol/(mg protein.10 min);饱和剂量甲氨基异丁酸(methylamino-isobutyric acid,MeAIB)阻断A类载体后,[3H]-谷氨酰胺摄取率为(81.02±19.59)fmol/(mg protein.10 min)。结论:在IEC-6细胞膜上可能存在载体ASCT2、SN1、ATA1、LAT1、LAT2;Na+依赖性氨基酸载体起主要作用(约64.22%),其中A类载体占50.62%,非A类载体占13.60%,非Na+依赖载体起次要作用(35.78%)

Syncytin及其受体ASCT2在子前期胎盘的表达以及缺氧对其表达的影响

目的研究syncytin及其受体ASCT2在胎盘发育、子癎前期胎盘中的表达以及缺氧对两者表达的影响。方法实时PCR检测syncytin及ASCT2 mRNA的表达。比较25例正常妊娠胎盘（分妊娠7～12周、30～36周和37～40周三组）syncytin和ASCT2表达的不同；比较8例子癎前期胎盘与正常妊娠胎盘syncytin及ASCT2表达的不同；比较正常和缺氧条件下forskolin诱导BeWo细胞分化成合体滋养细胞时，syncytin及ASCT2表达的变化。结果①与妊娠7～12周相比，syncytin mRNA的表达在妊娠30～36周显著增加（P〈0．05），妊娠37周后减少，但仍高于妊娠7～12周（P〈0．05），ASCT2 mRNA妊娠30～36周起减少（P〈0．05），以后一直维持较低水平。②将对照组胎盘和子癎前期组胎盘孕周匹配后比较发现，子痴前期组胎盘syncytin mRNA表达减少（P〈0．01），ASCT2mRNA表达无明显变化。③BeWo细胞分化成合体滋养细胞时，伴syncy—tinmRNA表达增加和AScT2mRNA表达降低（P〈0．05），缺氧抑制syncytin mRNA的表达（P〈0．05），对ASCT2 mRNA的表达无明显影响。结论Syncytin及其受体ASCT2在胎盘的表达与孕周有关，并参与合体滋养细胞形成的调控，子癎前期合体滋养细胞异常可能与缺氧导致syncytin表达异常有关。

肿瘤坏死因子-α对肠黏膜上皮细胞谷氨酰胺载体功能及其表达的影响

目的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是感染中最重要的调节因子,谷氨酰胺需经过其载体转运至细胞内才能被利用。文中研究TNF-α对肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell line,IEC)-6细胞膜谷氨酰胺载体功能、ASCT2mRNA及蛋白表达的可能影响,揭示TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的影响机制。方法体外培养IEC-6,分为对照组(不与TNF-α共孵育)和实验组(与TNF-α共孵育):实验组与不同剂量的TNF-α(2、5、8、10ng/ml)共孵育2h后,测定细胞[3H]-L-谷氨酰胺摄取率;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、5、8、10h)后,测定ASCT2载体mRNA水平;实验组与5ng/mlTNF-α共孵育不同时段(2、6h)后,检测载体ASCT2蛋白表达水平。结果不同TNF-α剂量孵育的实验组[3H]-L-谷氨酰胺摄取率显著低于对照组(P<0.01),实验组之间差异无显著性意义(P>0.05);孵育2h的实验组ASCT2载体mRNA水平显著高于对照组(P<0.01),时间延长后逐渐下降,10h则与对照组差异无显著性意义(P>0.05);不同时段实验组载体ASCT2蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01),实验组间差异无显著性意义(P>0.05)。结论TNF-α抑制IEC-6细胞膜谷氨酰胺载体的摄取功能,抑制ASCT2蛋白表达,但不抑制IEC-6细胞ASCT2载体mRNA的表达。TNF-α对细胞膜谷氨酰胺载体功能的抑制可能发生在载体蛋白的翻译或以后水平。

Na^+-依赖性谷氨酰胺载体ASCT2的生物学功能及表皮生长因子的调控作用

目的:Na+-依赖性中性氨基酸载体ASCT2,是一种广谱的氨基酸载体,它的生理功能主要是转运肠腔内谷氨酰胺、丙氨酸、丝氨酸和半胱氨酸等中性氨基酸。本研究拟对ASCT2载体转运特性及表皮生长因子对其的调控机制作一探讨。方法:体外培养Caco-2细胞,观察ASCT2对核素标记谷氨酰胺的转运特性、动力学特征及底物特异性;利用ASCT2多克隆抗体及TaqMan实时定量PCR方法,研究表皮生长因子对ASCT2功能的调控作用。结果:Caco-2细胞中Na+-依赖性3H-L-谷氨酰胺(50μmol)的转运速率为(635±80.1)pmol/(mgprotein·min),大部分中性氨基酸如丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸等可对其产生竞争性抑制;在表皮生长因子(100μg/L)孵育下,可以提高其转运活性约100%(P<0.01),Western-blot及real-timePCR显示其蛋白及mRNA表达增高。结论:谷氨酰胺载体ASCT2对核素标记谷氨酰胺具有强大的转运活性,对中性氨基酸底物具有亲和特异性;表皮生长因子对其转运活性、蛋白表达、mRNA丰度具有上调作用。

应用RNA干扰技术检测ASCT2功能

目的谷氨酰胺(glutamine,GLN)是肠道细胞的主要氧化燃料,必须通过载体的转运才能进入细胞内,其中载体ASCT2起重要作用,文中将应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术研究肠黏膜上皮细胞株(intestinal epithelial cell,IEC)-6细胞膜GLN载体ASCT2的转运功能。方法体外培养IEC-6,RNAi慢病毒颗粒进行细胞感染,3 d后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,5 d后采用RT-PCR检测载体ASCT2的mRNA表达,7 d后采用Western blot检测其蛋白表达,同时测定[3 H]-L-GLN摄取率。结果病毒转染细胞中均有GFP表达,载体ASCT2的mRNA表达下降60%,蛋白表达几近消失,[3H]-L-GLN摄取率下降15%。结论通过慢病毒载体介导的RNAi这一方便有效的方法,证实了ASCT2载体在整个细胞的GLN转运中起15%以上的作用。

正常妊娠和子痫前期胎盘Syncytin表达差异探讨

【目的】探讨syncytin及其受体ASCT2在子痫前期(PE)和正常妊娠胎盘组织中的表达改变。【方法】纳入研究病人共37例,分为2组,PE组21例,正常对照组16例,采用定量RT-PCR方法检测syncytin及ASCT2 mRNA的转录水平,Western blot法测定syncytin蛋白表达强度,比较两组较检测结果。【结果】两组均检测到syncytin mRNA、syncytin蛋白及ASCT2 mRNA,PE组胎盘syncytin mRNA水平(1.5±1.4)和蛋白表达强度(55.7±26.1)明显低于正常对照组(6.2±3.0,92.2±36.4,P<0.01),ASCT2 mRNA水平无明显差异(P>0.05)。【结论】胎盘组织syncytin表达下调与PE发病密切相关,其受体ASCT2与PE发生无相关性。

Syncytin及其受体ASCT2 mRNA在正常妊娠和子痫前期胎盘中的表达

目的研究人内源性逆转录病毒的膜糖蛋白syncytin及其受体ASCT2 mRNA在正常妊娠和子痫前期胎盘中的表达差异。方法应用实时定量RT-PCR测定正常妊娠晚期胎盘组织(11例)和子痫前期胎盘组织(11例)中syncytin及其受体ASCT2 mRNA的相对表达量。结果syncytin mRNA在两组中均有表达,其在子痫前期胎盘的表达明显低于正常妊娠晚期胎盘的表达(P=0.0024)。ASCT2 mRNA在两组中表达差异无显著性(P=0.1877)。结论syncytin mRNA表达下降,可能与子痫前期的病因及病理生理有关。

肿瘤坏死因子对谷氨酰胺促大鼠小肠蛋白质合成的影响及途径

目的谷氨酰胺(glutamine,Gln)需经过载体转运至细胞内才能被利用,感染状态下Gln疗效不佳。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)是感染中重要的调节因子,故研究TNF-α与Gln促蛋白质合成及其与Gln载体之间的关系对揭示感染状态下Gln代谢途径、提高疗效具有重要意义。文章研究TNF-α对Gln促大鼠小肠蛋白质合成及其对细胞膜Gln载体ASCT2mRNA、蛋白表达的影响,揭示TNF-α影响Gln促蛋白质合成的途径。方法 30只雄性SD大鼠按单纯随机法分3组:对照组、Gln组和TNF-α组。所有大鼠均行3 d全肠外静脉营养。对照组仅给予普通全肠外营养;Gln组给予添加丙氨酰谷氨酰胺二肽的肠外营养,Gln剂量为0.3 g/(kg·d),计72 h;TNF-α组给予添加丙氨酰谷氨酰胺二肽的肠外营养,并在第3天持续24h静脉滴注TNF-α,速度5μg/(kg·h)。所有大鼠均在取材前0.5h一次性静脉注射[L-15N]亮氨酸,剂量1.0 mmol/kg。实验结束时分别测定血浆TNF-α、Gln浓度、小肠Gln浓度、蛋白质合成率、ASCT2载体mRNA及蛋白表达水平。结果 TNF-α组血浆TNF-α浓度显著高于其他2组;TNF-α组血浆及小肠中Gln浓度最高;Gln组和TNF-α组小肠中蛋白质合成率均高于对照组,且Gln组最高;以上各组之间差异有统计学意义(P<0.01)。对照组ASCT2的mRNA及蛋白表达均显著低于其他2组(P<0.01)。Gln组ASCT2的蛋白显著高于其他2组(P<0.01)。结论 TNF-α能够升高大鼠血浆及小肠中Gln的浓度,抑制Gln的促蛋白质合成作用,其途径是TNF-α抑制氨基酸载体的转运功能,Gln不能顺利进入细胞,导致组织蛋白质合成下降,这种抑制发生在翻译及以后水平。

MAC方案作预处理ASCT治疗老年多发性骨髓瘤

目的：探讨采用自体外周血干细胞移植（简称ＡＳＣＴ）治疗老年多发性骨髓瘤（简称ＭＭ）疗效及安全性。方法：采用大剂量马法兰联合阿糖胞苷和环磷酰胺作预处理，大剂量阿糖胞苷结合Ｇ－ＣＳＦ作动员剂。结果：２例患者均顺利渡过危险期。主要副作用是骨髓抑制、胃肠道反应及口腔溃疡等。生存期分别为２４月和１２月，移植后缓解时间分别为１６月和５月。结论：ＡＳＣＴ采用ＭＡＣ方案作预处理疗效好、安全性高。

Agricultural Supply Chain Traceability System Based on Multi-Agent System

In order to overcome defects in existing ASCTS(Agricultural Supply Chain Traceability System,a new traceability system based on Multi-Agent System(MAS) is put forward.By qualitative method,I analyze problems of application of Agent technology in tracing quality of agricultural products.Physical model is built for this system and structure of traceability system is determined.Finally,algorithm is presented for major entities.From analysis of algorithm,it is proved that this system has some reference value in improving breadth and depth of product traceability.

肿瘤坏死因子-α削弱谷氨酰胺促大鼠骨骼肌蛋白质合成的途径

目的:研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对谷氨酰胺促大鼠骨骼肌蛋白质合成及对细胞膜谷氨酰胺载体ASCT2 mRNA和蛋白表达的影响,揭示TNF-α影响谷氨酰胺促蛋白质合成的途径。方法:30只雄性SD大鼠,随机分为3组:对照组,谷氨酰胺组(Gln组)和谷氨酰胺+肿瘤坏死因子组(Gln+TNF-α组)。所有大鼠均行72 h全肠外静脉营养(TPN)。对照组给予普通TPN;Gln组给予添加丙氨酰谷氨酰胺二肽的肠外营养,谷氨酰胺剂量为0.3 g·kg^(-1)·d^(-1);Gln+TNF-α组TPN方法同Gln组,并于实验结束前24 h持续静脉滴注TNF-α(5μg·kg^(-1)·h^(-1))。所有大鼠均于取材前0.5 h一次性静脉注射L^(-1)5N亮氨酸1.0 mmol/kg。TPN后72 h分别取血和下肢骨骼肌,测定血浆TNF-α浓度(双抗体夹心ELISA法)、血浆和骨骼肌Gln浓度(高效液相色谱分析法)、骨骼肌蛋白质分数合成率(质谱仪测定后计算)、载体ASCT2 mRNA(RT-PCR方法)及蛋白(Western Blot法)表达水平。结果:Gln+TNF-α组血浆TNF-α浓度显著高于其他两组;Gln+TNF-α组血浆及骨骼肌中谷氨酰胺浓度最高;Gln组和Gln+TNF-α组骨骼肌中蛋白质合成率均高于对照组,并且Gln组最高,各组间差异显著(P<0.01)。对照组ASCT2 mRNA表达最低(P<0.01),而另两组间差异无显著性(P>0.05)。3组ASCT2蛋白均有表达,Gln组显著高于对照组和Gln+TNF-α组(P<0.01)。结论:TNF-α能够升高大鼠血浆及骨骼肌中谷氨酰胺的浓度,削弱谷氨酰胺的促蛋白质合成作用;其途径是抑制谷氨酰胺载体蛋白的合成,降低了骨骼肌细胞对谷氨酰胺摄入,导致组织蛋白质合成下降。

重症急性胆管炎术后高渗性非酮症糖尿病昏迷的诊治（附6例分析）

重症急性胆管炎术后高渗性非酮症糖尿病昏迷的诊治（附６例分析）李星洪，李光昭，王存川（汕头市第二人民医院外科，５１５０３６，汕头；暨南大学医学院附属医院外科，５１０６３２，广州）高渗性非酮症糖尿病昏迷外科文献少有报告，本症早在１８８６年由Ｄｒｅｓｃｈｆ...

CEAC预处理方案在自体造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤临床观察

目的评估采用CEAC(环己亚硝脲、依托泊苷、阿糖胞苷、环磷酰胺)预处理方案在自体造血干细胞移植(ASCT)治疗恶性淋巴瘤中的疗效。方法回顾性分析在我科行ASCT且预处理为CEAC方案的75例恶性淋巴瘤病例,对其进行生存因素分析。结果移植后73名患者造血重建,外周血中性粒细胞计数(ANC)≥0.5×109/L的平均时间为(11±0.27)d;血小板(Plt)≥20×109/L的平均时间为(12±0.43)d。中位随访时间44个月(1-103),1、3、5年OS分别为84.0%、75.9%、70.9%;PFS分别为84.0%、57.3%、53.0%;预处理相关不良反应主要为感染、恶心呕吐、腹泻、Ⅰ/Ⅱ级肝功能受损等,经对症处理后均好转。结论 CEAC预处理方案在自体造血干细胞移植治疗恶性淋巴瘤中疗效肯定且毒性可耐受,是一种理想的预处理方案,尤其对于弥漫大B细胞淋巴瘤,提高了疾病的无进展生存。

谷氨酰胺转运蛋白ASCT2的研究进展

谷氨酰胺在细胞蛋白质和能量代谢中起着核心作用。谷氨酰胺必需通过细胞膜上特异性载体的转运才能进入细+胞内发挥作用,其中Na依赖性谷氨酰胺载体2(alanine-serine-cysteine transporter2,ASCT2)最为重要。ASCT2不仅在正常组织器官中广泛表达,而且在肿瘤中的表达明显增加,以满足肿瘤急剧增加的谷氨酰胺需求。ASCT2生物学功能的调控与人类健康密切相关。ASCT2的N糖基化位点是N163和N212,对ASCT2转运到膜上至关重要,但对ASCT2的内在转运功能影响不大。ASCT2与其他蛋白间的相互作用和翻译后修饰对ASCT2的稳定性、转运活性具有重要调节作用。该文主要总结ASCT2生物学功能调控及其对疾病治疗的意义。