剪接因子SF2/ASF在儿童白血病细胞中的表达

目的研究剪接因子SF2/ASF在儿童白血病不同治疗阶段骨髓细胞的表达及在白血病细胞系中的表达变化。方法用Western blotting方法检测儿童急性B淋巴细胞性白血病(acute B-lymphoblastic leukemia,B-ALL)初诊和缓解骨髓细胞中SF2/ASF的表达变化情况;用Western blotting检测B-ALL细胞系SF2/ASF的表达,并用化疗药物长春新碱和阿糖胞苷体外诱导NALM-6细胞系,观察诱导前后SF2/ASF表达的改变。结果Western blotting检测结果显示SF2/ASF在初诊B-ALL患儿骨髓细胞中明显表达,而在缓解期白血病患儿及对照特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿骨髓中仅有微弱表达;SF2/ASF在NALM-6细胞系中表达升高;用长春新碱、阿糖胞苷处理后,SF2/ASF表达明显减少。结论SF2/ASF在初诊B-ALL患儿骨髓或白血病细胞系中表达升高,随着临床缓解或体外化疗药物诱导后表达减少,可以作为监测白血病治疗效果的指标之一。

PRMT1通过精氨酸甲基化作用修饰剪接因子SF2／ASF

目的:探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶1(protein arginine methyltransferase1,PRMT1)对剪接因子SF2/ASF(spli-cing factor 2/alternative splicing factor)的甲基化修饰位点。方法:构建SF2/ASF野生型和Arg93/97/109突变体质粒,在体外表达和纯化GST标签的PRMT1、SF2/ASF及其Arg突变体融合蛋白,以甲基化活性实验检测PRMT1对SF2/ASF的甲基化作用及其甲基化修饰位点,以免疫荧光实验观察甲基化修饰对SF2/ASF亚细胞定位的影响。结果:PRMT1对SF2/ASF有明显的甲基化修饰作用;当Arg93/97/109突变为赖氨酸后,PRMT1对SF2/ASF突变体的甲基化修饰程度明显降低,其中Arg97突变后SF2/ASF甲基化程度减弱最明显。甲基化修饰不影响SF2/ASF的亚细胞定位。结论:发现SF2/ASF是PRMT1新的底物蛋白,Arg93/97/109均为PRMT1的甲基化修饰位点,其中Arg97是主要修饰位点;PRMT1对于SF2/ASF的甲基化修饰并不改变后者细胞内的定位。

转染或敲除Pokemon对结肠癌SF2/ASF、BIN1、eIF4E、p-eIF4E水平的影响

目的探讨Pokemon及其相关基因SF2/ASF、BIN1、eIF4E、p-eIF4E在结肠癌中的表达及其相关性。方法通过手术保存的结肠癌、结肠腺瘤及结肠炎性息肉蜡块切片购自惠州市第三人民医院,采用免疫组化检测Pokemon阳性表达,免疫印迹及PCR检测Pokemon、SF2/ASF、BIN1、eIF4E及p-eIF4E的蛋白及mRNA表达。体外培养结肠癌细胞株HT-29进行Pokemon沉默及Pokemon扩增,观察沉默或增加Pokemon基因对结肠癌HT-29细胞SF2/ASF、BIN1、eIF4E及p-eIF4E水平影响及相关性分析。结果Pokemon在结肠癌中呈现强阳性表达,在结肠腺瘤中呈现阳性表达,在结肠炎性息肉中弱表达;与结肠炎性息肉组织相比,结肠腺瘤组织中Pokemon、SF2/ASF、eIF4E及p-eIF4E表达升高,BIN1降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);与结肠腺瘤组织相比,结肠癌组织中Pokemon、SF2/ASF、eIF4E及p-eIF4E表达升高,BIN1降低,组间比较差异有统计学意义(P<0.05);Pokemon转染组12 h、24 h及48 h时SF2/ASF及eIF4E/p-eIF4E表达增强,BIN1降低。Pokemon沉默组12 h、24 h及48 h时SF2/ASF及eIF4E/p-eIF4E表达降低,BIN1增加;Pokemon与SF2/ASF、eIF4E呈正相关(R _(SF2/ASF)=0.651,R_(eIF4E)=0.286;P均<0.001),与BIN1呈负相关(R=-0.527,P<0.001)。结论过表达Pokemon通过调控SF2/ASF信号抑制BIN1表达,加快eIF4E磷酸化而促进结肠癌发生发展。

流感病毒A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs的低效拼接提高NS1蛋白表达量的研究

A型流感病毒编码的2个片段(7和8)产生的mRNAs拼接后,可潜在地改变NS1蛋白和NS2蛋白及M1蛋白和蛋白M2的比例。本试验研究了A型流感病毒自然发生的序列多态性对其mRNAs拼接的影响,通过对A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)和A/Netherlands/178/95(H3N2)及多个H5N1禽流感病毒株片段7和8mRNAs拼接效率进行比较,发现与其他毒株的片段7和8mRNAs相比,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段7和8 mRNAs拼接效率低,导致更高水平的NS1功能蛋白的产生,可能有利于A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)的致病性。结果还显示,A/Brevig Mission/1918/1(H1N1)片段8 mRNAs对SR蛋白过表达的应答与A/Netherlands/178/95(H3N2)不同。