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越南非洲猪瘟疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)研究工作分析与思考 被引量:1
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作者 戈胜强 沙洲 +5 位作者 左媛媛 初薛霏 徐天刚 张永强 李金明 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2024年第2期36-41,共6页
非洲猪瘟(Afcrian swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。近日,越南正式将经临床试验验证的非洲猪瘟弱毒疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)在其全国推广使用。本文对越南非洲猪瘟弱... 非洲猪瘟(Afcrian swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的烈性传染病。近日,越南正式将经临床试验验证的非洲猪瘟弱毒疫苗AVAC ASF LIVE(ASFV-G-ΔMGF)在其全国推广使用。本文对越南非洲猪瘟弱毒疫苗ASFV-G-ΔMGF相关研究数据进行了总结分析,分别从ASFVG-ΔMGF株攻毒保护能力评价、传代细胞培养株临床动物实验、野猪口服接种试验、毒力返强验证等方面,结合国内相关ASFV基因缺失株试验数据进行了分析。总结分析发现:越南上市的ASFV-G-ΔMGF疫苗株,二次免疫接种后攻毒保护效果更好,但在对野猪的口服接种评价中,其口鼻接种效果存在不确定性;随着疫苗株在动物体内的不断传代,其存在毒力返强和毒株变异风险,导致接种猪只临床症状明显;ASFV-G-ΔMGF株虽然有较好的攻毒保护能力和可靠的生产优势,但仍缺乏相关研究数据,特别是在垂直传播、交叉保护、基因突变等方面。后续仍需对ASFV-G-ΔMGF株的临床应用效果进一步评价。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 减毒活疫苗 越南 asfv-G-ΔMGF疫苗株
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不同全自动核酸提取仪对ASFV、PEDV提取效果的比较
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作者 黄丽娜 陈秀萍 +2 位作者 甘跃灵 谢璐娜 王雪妹 《今日养猪业》 2024年第3期1-3,共3页
【目的】以倍比稀释的ASFV(非洲猪瘟病毒)阳性对照样品以及PEDV(猪流行性腹泻病毒)阳性对照样品为检测对象,对比3款全自动核酸提取仪对DNA和RNA的提取效果,旨在帮助猪场配备的实验室筛选合适、可靠的全自动核酸提取仪。【方法】倍比稀... 【目的】以倍比稀释的ASFV(非洲猪瘟病毒)阳性对照样品以及PEDV(猪流行性腹泻病毒)阳性对照样品为检测对象,对比3款全自动核酸提取仪对DNA和RNA的提取效果,旨在帮助猪场配备的实验室筛选合适、可靠的全自动核酸提取仪。【方法】倍比稀释好的ASFV、PEDV阳性对照样品,每个梯度设置3个平行重复,诺维赞核酸提取仪(VNP-32P)为处理1,西安天隆核酸提取仪(NP968-C)为处理2,博日核酸提取仪(NPA-32P)为处理3,根据3款全自动核酸提取仪及提取试剂盒的说明书将对应阳性样品进行核酸提取,再根据英迪康的virotype?非洲猪瘟病毒2.0 PCR检测试剂盒以及世纪元亨的流行性腹泻病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒的说明书进行体系配制、上样、程序设置,进行核酸扩增。【结果】同一浓度梯度的ASFV、PEDV阳性对照样品,处理3所提核酸的扩增结果 CT值较处理1和处理2的低,而处理1和处理2提取效果不相上下。【结论】3款核酸提取仪的稳定性都满足需求;博日核酸提取仪(NPA-32P)的提取效果优于另外2款,诺维赞核酸提取仪(VNP-32P)和西安天隆核酸提取仪(NP968-C)的提取效果接近。 展开更多
关键词 全自动核酸提取仪 asfv PEDV 稳定性效果
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越南非洲猪瘟疫苗NAVET-ASFVAC(ASFV-G-ΔI177L)研究现状及思考
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作者 戈胜强 徐天刚 +5 位作者 尼博 刘春菊 韩乃君 王晓华 郑辉 王志亮 《中国动物检疫》 CAS 2023年第10期82-86,共5页
非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的猪高度致死性传染病,迄今全球还没有能预防它的有效疫苗。目前基因缺失减毒活疫苗和亚单位疫苗是最具潜力的疫苗研发策略。据报道,越南... 非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染引起的猪高度致死性传染病,迄今全球还没有能预防它的有效疫苗。目前基因缺失减毒活疫苗和亚单位疫苗是最具潜力的疫苗研发策略。据报道,越南正式批准了ASFV基因缺失弱毒疫苗NAVET-ASFVAC(ASFV-G-AI177L)在其全国范围内使用。ASFV-G-AI177L疫苗株是首个能诱导产生免疫且不排毒的毒株,针对越南地方品种猪具有良好的安全性并可抵抗母本强毒株(ASFV-G)的攻击;在疫苗接种后21 d可产生全面保护,并且大剂量接种安全,带毒时间小于90 d,连续5次传代未观察到毒力返祖。但是临床条件下ASFV-G-AI177L疫苗株仍存在水平传播和病毒血症逐代升高的风险,并且对野猪和妊娠母猪缺乏安全性评价。本文针对越南自美国引进的ASFV-G-AI177L毒株相关临床研究数据进行综述,以期为我国ASF疫苗研究及防控政策制定提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 减毒活疫苗 越南 asfv-G-ΔI177L
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ASFV解旋酶D1133L蛋白表达和抗体检测方法的建立及初步应用 被引量:4
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作者 侯景 申超超 +9 位作者 张大俊 杨博 史喜绢 张婷 杨泽晓 张克山 郑海学 李丹 党文 刘湘涛 《江西农业学报》 CAS 2021年第6期1-6,共6页
为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133... 为了建立快速检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的血清学方法,本研究原核表达了ASFV的D1133L重组蛋白,并以其为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种快速检测ASFV的间接ELISA方法,并采用该方法检测了ASFV感染猪后D1133L的抗体应答情况。结果显示:成功表达纯化了D1133L蛋白,以此为抗原建立了ELISA抗体检测方法,该方法特异性高,灵敏性强,其检测结果与市售试剂盒检测结果的符合率达100%。家猪在感染ASFV后,针对D1133L的抗体在第5天可被检测到,在第7天抗体水平达到顶峰。 展开更多
关键词 asfv 解旋酶 D1133L 抗体检测 应用
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ASFV核酸防污染恒温隔绝式荧光PCR检测方法的建立
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作者 陈雪蓉 徐林 +2 位作者 王远微 汤承 岳华 《四川畜牧兽医》 2022年第8期33-36,共4页
本研究基于UNG酶的生物学特性(能特异性识别并切割DNA分子中出现的尿嘧啶核苷),在PCR反应体系中引入UNG酶,使用农业农村部172号公告推荐的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对上下游引物、探针、Taq酶等反应体系的优化,建立防污染的恒... 本研究基于UNG酶的生物学特性(能特异性识别并切割DNA分子中出现的尿嘧啶核苷),在PCR反应体系中引入UNG酶,使用农业农村部172号公告推荐的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对上下游引物、探针、Taq酶等反应体系的优化,建立防污染的恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)检测方法。结果显示:优化后的iiPCR方法特异性好,只扩增出ASFV的特异片段,对猪瘟病毒、高致病性蓝耳病病毒、伪狂犬病毒、流行性乙型脑炎病毒、猪细小病毒、猪流行性腹泻病毒等病原不能检出,检测下限为25.5拷贝/μL;具有良好的稳定性,组内和组间变异系数均<5%。该方法对实验室环境及操作人员的要求不严格,对PCR反应的反应性、便捷性和时效性无影响,也不影响后续实验,同时可以解决阳性对照物及扩增产物对PCR扩增体系污染的问题,减少假阳性的出现,提高检测方法的可靠性,为ASFV的诊断提供了可靠的手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) UNG酶 防污染 恒温隔绝式荧光PCR
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外环境中ASFV核酸检出情况及分析 被引量:4
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作者 王久红 《湖北畜牧兽医》 2021年第11期23-24,共2页
为切断非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)传播途径,避免其传入猪场,开展了对ASFV污染情况的调查。对湖北金林原种畜牧有限公司2020年至2021年上半年外来车辆、人员及购进物资等采集的共3778份样品进行了ASFV核酸的检测,以评估... 为切断非洲猪瘟病毒(Africanswinefevervirus,ASFV)传播途径,避免其传入猪场,开展了对ASFV污染情况的调查。对湖北金林原种畜牧有限公司2020年至2021年上半年外来车辆、人员及购进物资等采集的共3778份样品进行了ASFV核酸的检测,以评估外环境中非洲猪瘟疫情的风险。结果显示,人员和物资ASFV核酸检出率分别为0.53%(12/2278)和0.63%(6/948),车辆ASFV核酸检出率最高,为4.53%(25/552);在车辆样品中,外来生猪运输车辆ASFV核酸检出率最高,为13.50%(22/163),外出售猪车辆和外出接送人员车辆分别为6.25%(1/16)和3.03%(2/66)。表明养猪企业应持续加强对车辆、人员及物资的检测,尤其是对外来生猪运输车的检测,还需加强猪场消毒,切断ASFV传播途径,阻挡ASFV传入猪场。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 检测 防控 外环境
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ASFV transcription reporter screening system identifies ailanthone as a broad antiviral compound 被引量:1
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作者 Yuhang Zhang Zhenjiang Zhang +7 位作者 Fan Zhang Jiwen Zhang Jun Jiao Min Hou Nianchao Qian Dongming Zhao Xiaofeng Zheng Xu Tan 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2023年第3期459-469,共11页
African swine fever(ASF)is an acute,highly contagious and deadly viral disease in swine that jeopardizes the worldwide pig industry.Unfortunately,there are no authoritative vaccine and antiviral drug available for ASF... African swine fever(ASF)is an acute,highly contagious and deadly viral disease in swine that jeopardizes the worldwide pig industry.Unfortunately,there are no authoritative vaccine and antiviral drug available for ASF control.African swine fever virus(ASFV)is the etiological agent of ASF.Among the ASFV proteins,p72 is the most abundant component in the virions and thus a potential target for anti-ASFV drug design.Here,we con-structed a luciferase reporter system driven by the promoter of p72,which is transcribed by the co-transfected ASFV RNA polymerase complex.Using this system,we screened over 3200 natural product compounds and obtained three potent candidates against ASFV.We further evaluated the anti-ASFV effects and proved that among the three candidates,ailanthone(AIL)inhibits the replication of ASFV at the nanomolar concentration(IC_(50)=15 nmol/L).Our in vitro experiments indicated that the antiviral effect of AIL is associated with its inhibition of the HSP90-p23 cochaperone.Finally,we showed the antiviral activity of AIL on Zika virus and hepatitis B virus(HBV),which supports that AIL is a potential broad-spectrum antiviral agent. 展开更多
关键词 African swine fever virus(asfv) Replication inhibition Broad-spectrum antiviral drugs Ailanthone(AIL)
原文传递
基于模式病毒评价商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒的消杀效果
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作者 倪征 朱寅初 +6 位作者 孙冰冰 云涛 陈柳 徐辉 叶伟成 华炯钢 张存 《浙江农业科学》 2024年第8期1944-1949,共6页
为了解常用商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的消杀效果,为其消毒剂的筛选提供参考。该研究利用伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)与ASFV病毒理化特征的相似性,以PRV作为替代标识毒株,建立了消毒剂细胞评价模型,于体外检测了3种市售... 为了解常用商品化消毒剂对非洲猪瘟病毒(ASFV)的消杀效果,为其消毒剂的筛选提供参考。该研究利用伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)与ASFV病毒理化特征的相似性,以PRV作为替代标识毒株,建立了消毒剂细胞评价模型,于体外检测了3种市售消毒剂对生长在BHK-21细胞中PRV的灭活效果。分别从3类消毒剂的不同方面对消毒剂抗病毒作用的影响进行消杀效果的评估。研究显示,有效含量为0.125 g·L^(-1)的戊二醛癸甲溴铵溶液,以及有效含量为0.5 g·L^(-1)的过氧乙酸溶液和二氯异氰脲酸钠,在室温作用30 min,均可有效灭活PRV。其中,过氧乙酸综合评价最优;戊二醛癸甲溴铵性价比最高,但所需消杀时间较长,受低温影响比较严重。该研究可为养殖场防控ASFV的感染提供消毒剂筛选的理论依据,并对ASFV的消毒标准提供参考。 展开更多
关键词 消毒剂细胞评价模型 asfv PRV 杀灭病毒效果
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非洲猪瘟病毒感染与致病机制的研究进展
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作者 高鹏 叶苗苗 +5 位作者 张永宁 周磊 盖新娜 郭鑫 杨汉春 韩军 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期77-88,共12页
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,对家猪致死率可达100%,严重威胁我国及世界养猪业可持续发展,目前尚无确实安全有效的预防用疫苗。本文总结了ASFV的流行历史与态势、生物学特性与复制、感染与致病... 非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的猪的一种高度接触性传染病,对家猪致死率可达100%,严重威胁我国及世界养猪业可持续发展,目前尚无确实安全有效的预防用疫苗。本文总结了ASFV的流行历史与态势、生物学特性与复制、感染与致病机制、与靶细胞的相互作用以及适应性免疫应答,并讨论了相关预防与控制措施,以期为我国ASFV研究和防控提供帮助。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 流行病学 病原生物学 感染与致病机制 预防与控制
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非洲猪瘟病毒B602L蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备
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作者 郭晨云 宋金星 +5 位作者 王梦翔 孙俊如 闫若潜 谢彩华 吴亚楠 张改平 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3980-3989,共10页
【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是对生猪养殖业危害极大的一种病原体,B602L蛋白作为其重要的非结构蛋白,是衣壳蛋白p72折叠为正确的三级结构的伴侣分子之一,在病毒组装成二十面体结构的过程中发挥着关键作用。... 【目的】非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是对生猪养殖业危害极大的一种病原体,B602L蛋白作为其重要的非结构蛋白,是衣壳蛋白p72折叠为正确的三级结构的伴侣分子之一,在病毒组装成二十面体结构的过程中发挥着关键作用。特异性抗体对于抗非洲猪瘟免疫应答机制及血清学检测方法研究具有重要意义,本研究旨在获取ASFV B602L蛋白,并制备抗ASFV B602L蛋白的多克隆抗体,为ASFV B602L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】以ASFV China/2018/AnhuiXCGQ株的B 602 L基因为研究对象,应用生物信息学软件对B602L蛋白的理化性质、信号肽、跨膜结构、抗原性和蛋白结构进行分析后,利用同源重组的方法将其克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得B602L重组蛋白,利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE和Western blotting对B602L蛋白纯化效果进行验证。将纯化后的B602L蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价,通过Western blotting和Dot blotting检测多克隆抗体特异性。【结果】生物信息学分析表明,B602L蛋白属于稳定性亲水蛋白,无跨膜区和信号肽。二级结构主要含有α-螺旋(54.91%)、延伸链(9.81%)和无规则卷曲(32.08%)。成功构建了ASFV B602L重组质粒,SDS-PAGE和Western blotting结果显示,重组菌pET-28a-B602L-BL21在16℃、0.5 mmol/L IPTG诱导下高效表达,获得的重组蛋白主要表达在BL21菌株上清中,大小约为70 ku,且能与ASFV阳性血清特异性结合。间接ELISA检测结果显示,制备的抗B602L鼠源多克隆抗体效价达1∶409600,Western blotting和Dot blotting试验结果表明,抗B602L鼠源多克隆抗体能够特异性识别B602L蛋白。【结论】原核表达的B602L重组蛋白具有良好的免疫原性,能够与ASFV阳性血清特异性结合,制备的鼠抗ASFV B602L蛋白多克隆抗体具备较好的生物学活性。本试验结果可为进一步研究ASFV B602L蛋白的生物学功能和非洲猪瘟诊断方法的建立提供生物材料和理论支撑。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) B602L蛋白 原核表达 多克隆抗体
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针对非洲猪瘟病毒K205R基因实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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作者 乔思娜 李丽薇 +8 位作者 赵款 高飞 周艳君 姜一峰 童武 赵冉 童光志 李国新 董世山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第4期67-72,共6页
为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异... 为了快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swin fever virus,ASFV),本文根据我国流行毒株ASFV SY18(GenBank ID:MH766894.1)已公布的K205R基因序列设计并合成特异性引物及探针,建立针对K205R基因的TaqMan荧光定量PCR检测方法。经过特异性试验、敏感性试验、重复性试验和临床样品检测试验分析显示,本文建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法Ct值与标准品在1×10^(11)~1×10^(2)copies/μL范围内具有很好的线性关系,相关系数为0.998,斜率为-2.797,检测下限为10^(2)copies/μL,与其他能引起相似临床症状的猪源病毒无交叉反应。重复性试验结果显示,组间与组内变异系数均小于1.53774%,重复性好。本方法适用于临床样品及本实验室构建的表达ASFV K205R基因的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的鉴定及检测,对ASFV快速检测及ASF早期诊断有重要意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) K205R基因 荧光定量PCR 检测方法
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白胞内域与胞外域的原核表达及其抗原性分析
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作者 李艳蕊 任静 +6 位作者 崔锦蔷 袁晨 王云霄 马亚娟 刘志昌 李永社 宋勤叶 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1660-1670,共11页
【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组... 【目的】应用大肠杆菌表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)CD2v蛋白胞外域(N-端,CD2v-N)与胞内域(C-端,CD2v-C)并分析两者的抗原性,为ASFV检测方法的研发提供试验依据和指导。【方法】构建CD2v-N和CD2v-C的重组原核表达质粒,在体外表达并纯化CD2v-N和CD2v-C蛋白,通过Western blotting对表达蛋白进行鉴定;用表达的CD2v-N和CD2v-C蛋白分别肌内接种免疫新西兰大白兔,共免疫3次,每次间隔2周;每次免疫后14 d,应用ELISA方法测定CD2v-N或CD2v-C的特异性抗体水平;用纯化后的CD2V-N和CD2v-C蛋白作为包被抗原,通过ELISA方法检测95份ASFV感染猪的血清CD2v-N或CD2v-C特异性抗体,比较CD2v-N和CD2v-C在猪体内诱导的免疫反应水平。【结果】重组蛋白CD2v-N和CD2v-C分别以包涵体和可溶性形式表达,分子质量分别为22.9和34.0 ku,均能与猪抗ASFV血清特异性结合;用CD2v-N蛋白首免家兔后14 d,血清中未检测到特异性抗体,而在CD2v-C首免的家兔血清中检测到了高滴度的特异性抗体;三免后14 d,CD2v-N和CD2v-C蛋白免疫家兔的血清特异性抗体效价分别为1∶125000和1∶107;ELISA检测结果显示,ASFV感染猪的血清中CD2v-C特异性抗体水平显著高于CD2v-N(P<0.05)。【结论】本研究表达了ASFV CD2v蛋白胞内域和胞外域,前者的抗原性比后者高,CD2v胞内域作为ASFV免疫学检测技术研究与开发的靶标更具优势。该研究结果对ASFV检测方法的研究与开发具有重要指导意义。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) CD2v蛋白 胞外域 胞内域 蛋白表达 抗原性
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非洲猪瘟病毒P54蛋白原核表达及间接ELISA检测方法建立
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作者 王程 夏应菊 +1 位作者 王海东 刘业兵 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4440-4449,共10页
【目的】建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化,将优化后的P54序列克隆到pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET28a-P... 【目的】建立一种具有良好特异性和敏感性的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体间接ELISA检测方法。【方法】根据ASFV P54蛋白基因序列进行大肠杆菌密码子优化,将优化后的P54序列克隆到pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET28a-P54,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的P54蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种间接ELISA方法,对包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育等反应条件进行优化后,对其临界值、特异性、灵敏性和重复性进行验证。【结果】SDS-PAGE结果显示,P54蛋白分子质量为42 ku,纯度在95%以上;Western blotting结果显示,P54蛋白与ASFV阳性血清能产生特异性反应。优化后的ELISA反应条件为:0.3125μg/mL抗原37℃包被1 h,5%脱脂奶粉37℃封闭1 h,1∶800稀释的血清37℃孵育2 h,1∶15000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h。该ELISA检测方法仅与ASFV阳性血清产生特异性反应,与猪瘟病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、牛病毒性腹泻病毒、猪伪狂犬病病毒和乙型脑炎病毒的阳性血清均无明显交叉反应;该方法灵敏性较高,ASFV阳性血清稀释度为1∶3200时仍有明显反应。批间重复和批内重复变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其阳性符合率为95.45%,阴性符合率为96.05%,总符合率为95.83%。【结论】本研究建立了一种以ASFV P54蛋白为检测抗原的ASFV间接ELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于ASFV的血清学检测,为非洲猪瘟的快速诊断提供更多选择。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 间接ELISA方法 P54蛋白 原核表达
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非洲猪瘟p62蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
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作者 张安之 孙卓 +2 位作者 张洪亮 单虎 杨瑞梅 《青岛农业大学学报(自然科学版)》 2024年第1期26-31,共6页
为了获得非洲猪瘟(african swine fever virus,ASFV)p62蛋白进行血清学诊断技术研究。根据GenBank ASFV参考序列合成CP530R基因(编码p62蛋白),插入pET-32a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE及Western blot鉴定。采用N... 为了获得非洲猪瘟(african swine fever virus,ASFV)p62蛋白进行血清学诊断技术研究。根据GenBank ASFV参考序列合成CP530R基因(编码p62蛋白),插入pET-32a(+)载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE及Western blot鉴定。采用Ni柱纯化p62蛋白,然后免疫Balb/c雌鼠,制备鼠抗ASFV p62蛋白的多克隆抗体,ELISA检测多抗效价。结果表明,成功构建了pET32a-p62质粒,表达蛋白为56.1 kDa,以包涵体表达为主。Western blot显示该蛋白能与ASFV阳性血清结合。Ni柱纯化获得p62蛋白浓度为2.9 mg/mL。用该蛋白免疫小鼠,三免后抗体效价达1∶256000。表明表达蛋白具有良好抗原性,制备的p62多克隆抗体具有较高的反应性和特异性,为进一步研究p62蛋白的特性和诊断奠定基础。 展开更多
关键词 asfv 62蛋白 大肠杆菌表达 多克隆抗体
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非洲猪瘟病毒抗体化学发光检测方法的建立与应用
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作者 向国庆 孙菁晗 +6 位作者 宋帅 温肖会 吕殿红 贾春玲 牛瑞辉 顾有方 罗胜军 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1362-1371,共10页
【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体化学发光检测方法,用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白,用适量的牛血清白蛋白... 【目的】建立一种特异性强、敏感度高、操作简捷、高通量的非洲猪瘟病毒(African swine fever,ASFV)抗体化学发光检测方法,用于早期监测ASFV的流行情况。【方法】本研究以羧基磁珠作为固相载体偶联ASFV重组p72蛋白,用适量的牛血清白蛋白(BSA)进行封闭,加入检测样品进行反应,以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标抗体,加入相应底物进行显色,优化各项反应条件,建立ASFV抗体化学发光检测方法,并对该方法的特异性、敏感度、重复性和检出率进行验证。【结果】建立的ASFV抗体化学发光检测方法蛋白与羧基磁珠偶联最适pH为7.0,最佳蛋白偶联浓度为5μg/mL,使用10%BSA溶液封闭效果最佳,反应磁珠终浓度为1.00 mg/mL,酶标二抗最佳工作稀释度为1∶40000。同时该方法反应时间为30 min,血清稀释度为1∶512,敏感度高于商品化ASFV抗体ELISA检测试剂盒,与猪瘟病毒、A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒gE、猪伪狂犬病病毒gB抗体阳性标准血清均无交叉反应。重复性试验中,批内变异系数为4.41%~8.70%,批间变异系数为2.43%~8.07%,均<10%。通过检测120份血清样品并与商业化ASFV抗体ELISA检测试剂盒进行对比分析,商业化ELISA试剂盒检出率为96.7%,本研究建立的化学发光检测方法检出率为100%。【结论】本研究建立的ASFV抗体化学发光检测方法可用于ASFV感染后抗体水平检测,为后续试剂盒的开发提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 重组p72蛋白 化学发光 抗体
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非洲猪瘟病毒致病机制及防治策略研究进展
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作者 王美乐 于扬帆 +6 位作者 徐朋 陈青 安珂兰·安维尔 李姝璇 杨松华 尹素改 冯书营 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3041-3055,共15页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种急性、出血性、高度接触性的烈性传染病,对世界养猪业和食品安全产生了巨大的负面影响,目前仍无商品化疫苗和特效药物。其病原体非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是一种大型、结... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种急性、出血性、高度接触性的烈性传染病,对世界养猪业和食品安全产生了巨大的负面影响,目前仍无商品化疫苗和特效药物。其病原体非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)是一种大型、结构复杂的双链DNA病毒,但80%的编码蛋白功能未知,因此其致病机制及药物研究现状对防控具有重要意义。作者概述了ASFV的病原体特征、传播途径及其引起的临床表现;从病毒入侵过程、免疫细胞功能改变及其相关通路变化等方面梳理了病毒致病机制的最新进展;介绍了ASFV的最新检测技术及疫苗新进展;系统总结了最新的中西药治疗研究现状,并对中药防治ASFV的未来前景进行展望,提出了未来重点研究方向和相关问题解决策略,以期为ASF的治疗提供借鉴和指导。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 致病机制 预防措施 中药
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基于非洲猪瘟病毒MGF505-3R蛋白的间接ELISA检测方法的建立
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作者 全吉玛 杨福荣 +10 位作者 李栋凡 田永祥 杨克礼 李畅 刘威 郭锐 袁芳艳 高婷 刘泽文 姚敏 周丹娜 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第17期57-63,114,共8页
为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA检测方法,试验基于ASFV MGF505-3R基因序列,构建pET-28a(+)-3R原核表达系统和pFastBac1-3R杆状病毒表达系统,分别通过37℃诱导5 h和28℃培养5 d获得3R重组蛋白,以此为包被抗原建立快速检测ASF... 为了建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的间接ELISA检测方法,试验基于ASFV MGF505-3R基因序列,构建pET-28a(+)-3R原核表达系统和pFastBac1-3R杆状病毒表达系统,分别通过37℃诱导5 h和28℃培养5 d获得3R重组蛋白,以此为包被抗原建立快速检测ASFV的间接ELISA检测方法,对该检测方法的反应条件、阴阳性临界值、敏感性、特异性及重复性进行检测,并用该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒对70份临床血清样品进行符合率验证试验。结果表明:原核表达系统与杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白抗原特异性均良好。利用杆状病毒表达系统表达的3R重组蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法的最佳条件为:包被浓度为2μg/mL,血清稀释度为1∶80,5%BSA 37℃封闭2 h,ASFV阳性血清(一抗)37℃孵育90 min,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgG(二抗)37℃孵育45 min。该间接ELISA检测方法的批间和批内变异系数均小于10%;与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪圆环病毒2型(PCV-2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等常见病原阳性血清无交叉反应;该检测方法的临界值为0.38,ASFV阳性血清稀释至640倍检测仍高于临界值。该检测方法与ASFV抗体ELISA检测试剂盒的阳性符合率、阴性符合率、整体符合率分别为92%(37/40)、86%(26/30)、90%(63/70)。说明试验基于3R重组蛋白建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性与重复性,可以用于临床血清样品中ASFV抗体的检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(asfv) 原核表达系统 杆状病毒表达系统 3R蛋白 间接ELISA
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非洲猪瘟分子生物学和免疫学检测技术研究进展
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作者 张人俊 彭启凤 +3 位作者 潘鸿 张毅 沈朝建 刘平 《中国猪业》 2024年第4期25-36,共12页
非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒引起家猪和野猪急性、烈性、高度接触性的传染病。自非洲猪瘟首次被报道至今,世界范围内尚无有效的疫苗和治疗方法,因此,非洲猪瘟的早期诊断对该病的防控显得尤为重要。国内外实验室... 非洲猪瘟(African Swine Fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒引起家猪和野猪急性、烈性、高度接触性的传染病。自非洲猪瘟首次被报道至今,世界范围内尚无有效的疫苗和治疗方法,因此,非洲猪瘟的早期诊断对该病的防控显得尤为重要。国内外实验室针对非洲猪瘟的诊断开展了大量的研究,建立了一系列的检测方法。ASF实验室检测技术的推广和应用,为非洲猪瘟的防控和净化提供了关键的技术支撑。本文对近年来国内外非洲猪瘟检测方法研究进展进行了综述,特别对分子生物学和免疫学检测方法进行了梳理归纳,比较了优缺点,以期为非洲猪瘟的早期诊断检测和新检测技术的开发提供帮助。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 分子生物学 免疫学 特异性 灵敏性
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非洲猪瘟病毒CD2v蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
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作者 陈艳 祝贺 +5 位作者 童明龙 陆冠亚 茹小桐 姜焱 周斌 龙云凤 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第3期86-93,共8页
本研究以原核系统表达的非洲猪瘟病毒CD2v膜内区重组蛋白为免疫原接种BALB/c小鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和多次亚克隆获得了8株能够稳定分泌CD2v蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为RH1、RH3、RH4、RH5、RH6、RH8、RH9和RH10... 本研究以原核系统表达的非洲猪瘟病毒CD2v膜内区重组蛋白为免疫原接种BALB/c小鼠,经过细胞融合、间接ELISA筛选和多次亚克隆获得了8株能够稳定分泌CD2v蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为RH1、RH3、RH4、RH5、RH6、RH8、RH9和RH10。8株单克隆抗体的轻链类型均为Kappa型,其中RH1、RH5、RH9这3株单克隆抗体的重链亚型为IgG2b,其余5株单克隆抗体的重链亚型为IgG1。Western blot和免疫荧光试验证明获得的单克隆抗体具有良好的反应性,能特异地识别昆虫杆状病毒表达系统重组表达的CD2v蛋白,可为非洲猪瘟病毒结构蛋白的功能解析以及血清学诊断方法的开发提供重要的生物学材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 单克隆抗体
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Regulation of antiviral immune response by African swine fever virus(ASFV) 被引量:7
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作者 Xiaojie Zheng Shengming Nie Wen-Hai Feng 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2022年第2期157-167,共11页
African swine fever(ASF)is a highly contagious and acute hemorrhagic viral disease with a high mortality approaching 100%in domestic pigs.ASF is an endemic in countries in sub-Saharan Africa.Now,it has been spreading ... African swine fever(ASF)is a highly contagious and acute hemorrhagic viral disease with a high mortality approaching 100%in domestic pigs.ASF is an endemic in countries in sub-Saharan Africa.Now,it has been spreading to many countries,especially in Asia and Europe.Due to the fact that there is no commercial vaccine available for ASF to provide sustainable prevention,the disease has spread rapidly worldwide and caused great economic losses in swine industry.The knowledge gap of ASF virus(ASFV)pathogenesis and immune evasion is the main factor to limit the development of safe and effective ASF vaccines.Here,we will summarize the molecular mechanisms of how ASFV interferes with the host innate and adaptive immune responses.An in-depth understanding of ASFV immune evasion strategies will provide us with rational design of ASF vaccines. 展开更多
关键词 African swine fever virus(asfv) Innate immunity Adaptive immunity Immune evasion VACCINE
原文传递
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