比索洛尔通过ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路改善缺血再灌注诱导的H9C2心肌细胞损伤的研究

目的:探讨比索洛尔对缺血再灌注(I/R)诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞,将H9C2心肌细胞分为对照组(Control组)、缺氧/复氧(H/R)模型组(Model组)、比索洛尔组(Bisoprolol组)、比索洛尔+凋亡信号调节激酶1(ASK1)重组蛋白组(Bisoprolol+ASK1组)。除Control组外,其余各组H9C2心肌细胞均进行H/R损伤处理。采用细胞计数试剂盒(CCK8)法检测细胞活力;采用流失细胞术检测细胞凋亡;采用酶联免疫吸附试验检测细胞中心肌损伤标志物[乳酸脱氢酶(LDH)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)]和炎症因子[白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)]水平;采用激光共聚焦检测细胞中钙离子浓度;采用蛋白质印迹法检测细胞中ASK1-c-Jun氨基末端激酶(JNK)/p38丝分裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,Model组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Model组比较,Bisoprolol组和Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均升高,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均降低,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与Bisoprolol组比较,Bisoprolol+ASK1组H9C2细胞活力、LDH和cTnT水平均降低,细胞凋亡率、IL-6、IL-1β和TNF-α水平均升高,细胞内钙离子浓度、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK和p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:比索洛尔能够通过抑制炎症反应和钙超载,改善I/R诱导的H9C2心肌细胞损伤,其作用机制可能与抑制ASK1-JNK/p38 MAPK信号通路激活有关。

人参皂苷CompoundK治疗糖尿病的机制研究

目的探讨人参皂苷compoundK（CK）干预对糖尿病小鼠糖脂代谢的影响及其可能的作用机制。方法36只小鼠按完全随机法分为正常组，糖尿病组，人参皂苷CK100、200mg／kg体重治疗组（治疗1、2组），二甲双胍组，p38MAPK通路激动剂P79350干预组，每组6只。采用高脂饮食联合腹腔注射链脲菌素方法建立小鼠糖尿病模型。制模后各组给予相应药物灌胃，连续8周。8周后取血检测空腹血糖、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）、血清胰岛素水平，计算胰岛素敏感指数，行糖耐量试验。采用蛋白质印迹法检测胰岛组织凋亡信号调节激酶1（ASK1）、磷酸化ASK1（p-ASK1）、p38、p-p38蛋白表达，实时PCR法检测胰岛组织ASK1mRNA表达。结果糖尿病组小鼠空腹血糖、TG、TC、HDL—C、空腹血清胰岛素水平及胰岛素敏感指数分别为（28．31±3．40）、（1．90±0．28）、（5．00±0．72）、（0．50±0．08）、（9．01±1．70）mmol／L及-6．42±0．76；治疗2组小鼠分别为（12．02±1．81）、（0．97±0．09）、（2．90±0．49）、（0．91±0．08）、（15．12±1．93）mmol／L及-4．33±0．46；二甲双胍组分别为（12．87±2．61）、（1．09±0．11）、（3．08±0．27）、（0．87±0．08）、（14．97±1．27）mmol／L及-4．42±0．35。治疗组空腹血糖、TG、TC水平均较糖尿病组显著下降，而空腹血清胰岛素水平和胰岛素敏感指数均显著升高，差异均有统计学意义（P〈0．05或〈0．01），治疗2组与二甲双胍组的差异无统计学意义。对照组、糖尿病组、治疗2组小鼠胰岛组织ASKlmRNA相对表达量分别为1．00±0．07、2．52±0．14、1．25±0．08。糖尿病组、治疗2组均较对照组显著上调，差异有统计学意义（P值均〈0．01），而治疗2组与糖尿病组差异无统计学意义。对照组、糖尿病组、治疗2组小鼠胰岛组织ASK1、p38蛋白表达量的差异均无统计学意义，但糖尿病组p-ASKI、p-p38蛋白表达较对照组显著上调，而治疗2组较糖尿病组显著下调，差异均有统计学意义（P〈0．05或〈0．01），而治疗2组与对照组的差异无统计学意义。结论人参皂苷CK具有改善糖尿病小鼠脂代谢的作用，其机制可能与抑制ASK1-p38MAPK通路成员的磷酸化有关。