运动改善ASMT基因敲除小鼠抑郁行为的海马蛋白质组学机制

目的利用定量蛋白质组学技术探究N-乙酰基-5-羟色胺-甲基转移酶(N-acetyl-5-hydroxytryptamine-methyltransferase,ASMT)基因敲除及运动干预对小鼠抑郁行为及海马蛋白质组的影响。方法将雄性ASMT基因敲除小鼠及野生型小鼠随机分为安静组和运动组。5周的游泳运动干预结束后全部进行抑郁行为学检测。行为学结束后进行麻醉处死取海马组织。采用TMT标记定量蛋白质组学技术检测海马组织中的蛋白表达情况,并运用生物信息学方法分析。结果ASMT基因敲除后小鼠具有显著的抑郁行为表型,游泳运动干预后可以显著改善。筛选出的差异蛋白功能集中在突触信号通路、突触化学传递的调控、突触囊泡循环、神经发生、神经系统发育的调控、长时程突触增强、SNARE复合体聚集等。结论ASMT基因敲除可能会通过海马突触前膜的SNARE家族蛋白过度表达诱导谷氨酸的过度释放并产生神经毒性,进而产生抑郁行为;游泳运动可能通过调节突触转运相关蛋白SNAP25维持神经递质稳态,促进神经发生水平和突触可塑性,进而使ASMT基因敲除小鼠抑郁行为得到改善。

褪黑素合成酶AANAT/ASMT基因过表达绵羊生物安全评价研究

旨在研究乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT(HIOMT)绵羊的生物安全性,基于本实验室前期建立的乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT(HIOMT)绵羊模型,追踪阳性转基因绵羊的生长性状数据,分析血液及尿液生理生化指标,对肠道微生物、乳中褪黑素水平及乳成分进行检测。结果表明:1)阳性转基因绵羊0、6和12月龄的体重、体长、身高和胸围4项生长指标与普通绵羊均无显著差异(P>0.05);2)阳性绵羊血液总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇含量和各类型细胞数量以及尿液中亚硝酸盐、蛋白质和葡萄糖含量等指标均属正常,且与普通绵羊均无显著差异(P>0.05);3)菌群测序结果表明,阳性绵羊及普通绵羊肠道微生物群落组成及优势菌群均无显著差异(P>0.05);4)转基因绵羊血液褪黑素表达水平与普通绵羊无显著差异(P>0.05),夜间褪黑素水平显著高于白天(P<0.05);乳中褪黑素水平极显著高于普通绵羊(P<0.01),乳糖含量显著高于对照羊(P<0.05),体细胞数极显著低于普通绵羊(P<0.01)。综上所述,乳腺过表达AANAT和ASMT(HIOMT)转基因绵羊的生长发育、诸多生理生化指标、肠道微生物菌群等与对照组绵羊相比均无显著差异。此外,转基因绵羊乳中褪黑素和乳糖含量较高,体细胞数含量较低,可能是乳腺中褪黑素发挥抗炎作用,降低了乳中体细胞数。

褪黑素合成酶ASMT基因启动子和第一外显区单核苷酸多态性与儿童孤独症的关联研究

目的探讨参与褪黑素合成的乙酰血清素甲基转移酶(acetylserotonin methyltransferase,ASMT)基因启动子和第1外显子区遗传多态性位点与儿童孤独症是否关联。方法对390例儿童孤独症患者和420例正常对照者的ASMT基因启动子和第1外显子区域进行测序。比较该区域5个单核苷酸多态性(single nucl-eotide polymorphisms,SNPs)位点的等位基因频率、基因型频率和单体型频率在患者组与对照组之间的差异。结果患者组和对照组之间,5个SNPs(rs4446909、rs5989681、rs56690322、rs6644635、rs17149149)等位基因和基因型频率的差异均无统计学意义(P>0.05)。3个SNPs位点rs4446909、rs5989681和rs6644635之间存在连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)(D’值为0.85-0.98)。但此3个SNPs构成的单体型频率在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究未发现ASMT基因启动子和第1外显子区域的遗传多态性位点与儿童孤独症关联,提示这些位点可能未参与中国汉族人群孤独症的致病。

褪黑素合成酶ASMT基因过表达奶山羊生物安全评价研究

为了研究乳腺过表达褪黑素合成限速酶乙酰血清素甲基转移酶(ASMT,HIOMT)基因奶山羊的生物安全性,试验针对乳腺过表达褪黑素合成酶ASMT基因奶山羊模型,记录了转基因山羊的生长发育数据、检测了血液及尿液中生理生化指标,并对肠道微生物、乳成分及褪黑素含量进行分析。结果表明:1)转基因阳性羊0,3,6,12月龄体重、体长、身高和胸围四项生长指标和对照羊均无显著差异(P>0.05);2)转基因阳性羊体温、胆固醇、血糖、总蛋白和各类型细胞含量及尿液中蛋白质、葡萄糖含量等指标与对照羊无显著差异(P>0.05);3)16S r DNA菌群测序结果表明,转基因阳性羊与对照羊肠道微生物群落组成及优势菌群均无显著差异(P>0.05);4)转基因阳性羊褪黑素含量显著高于对照羊(P<0.05),且乳中褪黑素含量显著高于血液(P<0.05),转基因阳性羊乳中乳蛋白和干物质含量显著高于对照羊(P<0.05),转基因阳性羊体细胞数显著低于对照羊(P<0.05)。说明乳腺过表达褪黑素合成限速酶ASMT基因不影响转基因奶山羊健康,而且会提高奶山羊乳品质。

山羊卵巢褪黑素信号特异性载体pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT与pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A/B的构建

本研究旨在构建褪黑素(melatonin,MLT)合成酶乙酰血清素甲基转移酶(acetylserotonin methytransferase,ASMT)的卵母细胞特异表达载体GDF9-ASMT和MLT受体(MTNR1A与MTNR1B)的颗粒(黄体)细胞特异表达载体Cyp17-MTNR1A、MTNR1B,以期为进一步生产高繁殖力转基因山羊提供载体材料。首先,分别扩增出山羊生长分化因子9(GDF9)与细胞色素P450家族17亚家族A成员1(Cyp17a1)启动子序列备用;然后,扩增ASMT、MTNR1A及MTNR1B基因CDS全长序列,并通过酶切将ASMT连接至GDF9启动子下游,将MTNR1A和MTNR1B连接至Cyp17a1启动子下游,制备出Pro/GDF9-ASMT、Pro/Cyp17-MTNR1A与Pro/Cyp17-MTNR1B表达元件;最后通过酶切连接将上述表达元件整合至pcDNA3.1(+)载体中,从而构建出pcDNA3.1-Pro/GDF9-ASMT、pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1A和pcDNA3.1-Pro/Cyp17-MTNR1B真核表达载体。经测序验证,本研究扩增出的GDF9和Cyp17a1启动子长度分别为2496和2497 bp,与GenBank数据库中山羊GDF9和Cyp17a1基因起始密码子上游2500 bp区域的同源性均为98%;扩增出的ASMT、MTNR1A与MTNR1B的CDS序列长度分别为1037、1100和1130 bp,与GenBank所递交的标准序列同源性分别为98%、98%和99%,氨基酸序列同源性分别为97%、98%和99%。上述载体的成功构建可为进一步生产褪黑素高繁殖力转基因山羊提供参考。

ASMT浸渍炭的研究

本文以ASC浸渍炭为基础,用钼酸铵与酒石酸作为浸渍液,制得了ASMT浸渍炭。制备ASMT炭的活化温度为300℃;钼的添加量为6.5g/100g活性炭;酒石酸的添加量为6.9～8.5g/100g活性炭。加速陈化结果表明,本ASMT浸渍炭的抗陈化性能优于ASC浸渍炭,而且其比活性在2.0～2.2min/h之间,优于ASC浸渍炭的1.35min/h。

ASMT基因多态性与卒中后睡眠障碍的相关性研究

目的研究乙酰血清素甲基转移酶(ASMT)基因多态性与卒中睡眠障碍的相关性。方法选取我院收治的200例首发脑卒中患者,运用匹兹堡睡眠质量指数量表评定患者的睡眠质量,并将其分为PSSD组和非PSSD组。两组患者禁食10小时后取外周静脉抽血提取DNA,并运用多重碱基延伸SNP分型检测患者的ASMT基因。结果 ASMT基因多态位点rs4446909和rs5989681的基因型及等位基因在PSSD组和非PSSD组分布无显著性差异(P>0.05),高血压患者rs4446909位点GA基因型和A等位基因,糖尿病患者rs5989681位点GC基因型,PSSD组都显著高于非PSSD组。结论糖尿病患者卒中后rs5989681位点GC基因型,高血压患者卒中后rs4446909位点GA基因型和A等位基因会加速PSSD的发生。

龙眼褪黑素合成途径SNAT、ASMT和COMT家族基因鉴定及表达分析

基于第3代龙眼(Dimocarpus longan)基因组及转录组数据库,对褪黑素合成路径上可能的限速基因SNAT(serotonin N-acetyltransferase)、ASMT(N-acetylserotonin methyltransferase)和COMT(caffeic acid O-methyltransferase)进行基因家族成员鉴定,利用实时荧光定量PCR技术研究其在龙眼体胚早期的表达谱,并研究外源IAA、GA3、MeJA、SA和ABA对龙眼胚性愈伤组织中褪黑素含量的影响,以及褪黑素合成途径相关基因的表达模式。结果显示:龙眼SNAT(DlSNAT)、ASMT(DlASMT)和COMT(DlCOMT)基因家族分别含有2、18和7个成员,蛋白质结构域保守,相同家族的成员之间保守基序相差极小,DlASMT和DlCOMT家族成员高度相似。基于氨基酸序列进行系统进化树分析,龙眼、拟南芥、水稻、小麦、番茄、辣椒和卷柏的SNAT家族可分为3个亚组;ASMT和COMT家族具有高度同源性,共同建树并分为3个亚组。DlSNAT、DlASMT和DlCOMT家族成员的启动子中含有大量响应生长素、赤霉素、茉莉酸甲酯、水杨酸和脱落酸的顺式作用元件。表达谱分析显示,DlASMT和DlCOMT家族成员主要在龙眼不完全胚性紧实结构和球形胚阶段高表达,DlSNAT1和DlSNAT2在龙眼体胚发生早期始终处于高水平表达。用0.1 mmol·L^(-1)IAA处理龙眼胚性愈伤组织,内源褪黑素含量在24 h内显著降低,GA;、MeJA、SA和ABA处理则显著提高了褪黑素含量;同时分析DlSNAT、DlASMT、DlCOMT成员表达情况,内源褪黑素含量变化趋势和DlSNAT表达基本一致。综上,DlSNAT、DlASMT和DlCOMT可能通过影响内源褪黑素的合成参与调控龙眼早期体胚发生。

输电线路铁塔高强钢的应用于焊接技术

进入21世纪以来,随着我国经济的迅速发展,电力需求也不断增长,电力事业进入了黄金发展时期,然而2008年我国南方发生的特大冰灾为输电线路铁塔提出了更高的要求。为了提高输电铁塔尤其是特高压输电铁塔的强度、减轻塔重、增加其承载能力、节约耗材、延长塔的使用寿命、提高经济效益,需要在制造铁塔的过程中采用低合金高强度钢材,如Q420、Q460、ASMT A572 GR65等钢材。本文主要就Q420、Q460、ASMT A572 GR65等高强钢的焊接技术进行了分析。