ASMq-TF对增生性瘢痕成纤维细胞迁移能力的影响

目的探讨维药异常胆质成熟剂提取物总黄酮(Abnormal Savda Munziq-Total Flavonoids,ASMqTF)在体外对增生性瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic scar,Fibrofblasts,HSFbs)迁移能力的影响。方法培养人来源增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞,将实验设计分为6组:正常皮肤组、空白对照组、实验组(ASMq-TF 0.2、0.35、0.5mg/mL)和5-氟尿嘧啶(0.25mg/mL)阳性组;通过细胞划痕实验方法,分别在24、48h后,观察ASMq-TF对增生性瘢痕成纤维细胞的迁移率的影响。结果在同一时间,与正常皮肤组比较,空白对照组增生性瘢痕成纤维细胞的迁移率明显增加(P<0.05);与空白对照组比较,随着实验组ASMq-TF浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞迁移率逐渐减少(P<0.05);与ASMq-TF 0.2mg/mL实验组比较,5-氟尿嘧啶阳性组对增生性瘢痕成纤维细胞的迁移率减少(P<0.05)。结论增生性瘢痕成纤维细胞迁移率明显高于正常皮肤成纤维细胞;随着ASMqTF浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞迁移率逐渐被抑制,同时也影响成纤维细胞过度增殖,进一步减少增生性瘢痕形成。

基于NMR代谢组学方法研究异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠血浆代谢的影响

目的从代谢组学角度探讨异常黑胆质成熟剂（ASMq）对抑郁症大鼠血浆代谢物的影响。方法选取60只雄性SD大鼠,进行21d慢性不可预见性温和应激（CUMS）诱导建立抑郁症大鼠模型（接受应激组）,并通过体质量测量、糖水消耗实验、矿场实验进行宏观评价。造模成功后,将接受应激组大鼠随机分为5组：ASMq高、中、低剂量组（给药剂量分别为6.0、3.0、1.5 g/kg）及阳性对照组（氟西汀3.5 g/kg）、模型对照组（生理盐水1.5 mL/100g）,每组12只。另设正常对照组（12只,不接受任何应激,正常饲养）。末次给药1h后颈椎脱臼处死大鼠,采用核磁共振技术检测6组大鼠血浆代谢物的变化。结果与抑郁模型对照组比较,ASMq低、中、高剂量组大鼠血浆中肉毒碱、乳酸、β-羟丁酸、肌酸、丙酮酸、丙氨酸、极低密度脂蛋白（VLDL）、络氨酸、糖蛋白、苯丙氨酸、丙酮、甲酸、不饱和脂类含量下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。β-葡萄糖、组氨酸、苯丙氨酸、α-葡萄糖含量显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ASMq可能通过对抑郁症大鼠的糖代谢、脂代谢、氨基酸代谢起到一定的调控和改善作用而提高机体兴奋性,治疗抑郁症。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮杀伤K562/ADR细胞株作用研究

目的探讨维药异常黑胆质成熟剂总黄酮（ASMq）对人慢性骨髓性白血病细胞（K562）及人白血病阿霉素耐药株（K562/ADR）的细胞毒性作用。方法对K562细胞株及K562/ADR细胞株细胞进行培养,在培养过程中注意K562/ADR细胞株对阿霉素的耐药性。取对数生长期K562、K562/ADR细胞株,96板孔中加入RPMI-1640培养液配制5×104个/m L细胞悬液100μL/每孔,37℃、5%CO2培养24 h贴壁,然后加入不同浓度（0、50、100、200、400、800和1600μg/m L）的ASMq,在37℃共培养48 h,每组5个重复,按照CCK-8说明书检测细胞活性。结果 K562细胞株对不同浓度的ASMq的细胞毒性的敏感性不同,差异有统计学意义（P〈0.05）;K562/ADR细胞株对0~1 600μg/m L浓度的ASMq的细胞毒性的敏感性差异无统计学意义（P〉0.05）;结论 ASMq对K562细胞具有细胞毒性作用,为临床治疗血液肿瘤提供了新的线索。

异常黑胆质成熟剂对慢性应激抑郁模型大鼠海马G蛋白α亚型Gαi、Gαo和Gαq表达的影响

目的探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对慢性应激抑郁模型大鼠海马G蛋白α亚型Gai、Gao和Gaq表达的影响。方法选取60只雄性SD大鼠,进行21d慢性不可预见性温和应激(CUMS)诱导建立抑郁症大鼠模型(接受应激组),并通过体质量测量、糖水消耗实验、矿场实验进行宏观评价。造模成功后,将接受应激组大鼠随机分为5组,ASMq高、中、低剂量组(给药剂量分别为6.0、3.0、1.5 g/kg体质量)及阳性对照组(氟西汀3.5 g/kg体质量),模型对照组(生理盐水1.5 mL/100g体质量),每组12只。另设正常对照组(12只,不接受任何应激,正常饲养)。末次给药1h后颈椎脱臼处死大鼠,迅速分离海马并冻存备用。采用免疫印迹法(western blotting)检测各组大鼠海马Gαi、Gαo和Gαq表达量。结果与正常对照组相比,接受应激组大鼠给予应激后的体质量、糖水摄入量、跨越格数及抬腿次数明显降低,处于抑郁状态;ASMq高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠给药后的体质量明显高于抑郁模型对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与正常对照组相比,抑郁模型对照组大鼠海马Gao、Gai表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而Gαq表达量差异无统计学意义(P>0.05)。与抑郁模型对照组相比,ASMq高、中、低剂量组及阳性对照组Gao和Gai表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论ASMq可能通过调节G蛋白α亚型Gao、Gai表达来发挥抗抑郁作用。

异常黑胆质成熟剂提取物对正常大鼠凝血时间及TXB_2和6-keto-PGF1 α水平的影响

目的观察异常黑胆质成熟剂提取物对大鼠凝血时间及TXB2和6-keto-PGF1α水平的影响。方法(1)采用玻片法测定体外凝血时间;(2)放射免疫法测定血浆TXB2和6-keto-PGF1α的含量。结果异常黑胆质成熟剂提取物5.94g(生药)/kg的凝血时间明显延长;可明显升高6-keto-PGF1α的含量,却不能抑制TXB2的释放,但可明显降低TXB2/6-keto-PGF1α的比值。结论异常黑胆质成熟剂提取物能够有效抑制血小板聚集,其机制可能与升高6-keto-PGF1α的含量相关。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对K562/ADR细胞的耐药逆转作用及mRNA表达的影响

目的异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对白血病K562/ADR多药耐药逆转作用机制研究及其对耐药株m RNA表达的影响。方法不同浓度的ASMq联合不同浓度的ADR作用于K562/ADR细胞株,用MTT法检测ASMq对K562/ADR的细胞毒活性及对耐药细胞株的抑制率,用RT-PCR方法分析对K562/ADR细胞ABCB-1及ABCC-1和BCL-2表达的影响。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对K562/ADR细胞株增值表现为抑制作用,对K562/ADR细胞耐药基因ABCC-1、ABCB-1及BCL-2同样表达抑制作用。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮通过抑制ABCB-1、ABCC-1、BC-L2基因表达,发挥对K562/ADR细胞株耐药逆转的作用。

异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠模型支配器官(脑、心、肝)组织细胞超微结构的影响

目的探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对抑郁症大鼠模型支配器官(脑、心、肝)组织细胞超微结构的影响。方法将雄性抑郁症模型大鼠60只随机分为ASMq高、中、低剂量组(ASMq给药剂量分别为6.0、3.0、1.5 g/kg体质量)及阳性对照组(氟西汀,3.5g/kg体质量)、抑郁模型对照组(模型对照组)5组,每组12只,另设正常对照组(12只)。ASMq各剂量组和阳性对照组连续灌胃给药21 d,1次/d,末次给药1h后颈椎脱臼处死动物,取出支配器官并固定,铅铀染色,制作常规电镜标本,扫描电镜观察支配器官超微结构改变。结果模型对照组支配器官超微结构中除了脑组织神经元细胞外,其余组织细胞均有不同程度的细胞水肿、基质密度明显降低和细胞变质等超微结构的损伤。ASMq干预后,脑神经胶质细胞水肿明显降低,细胞基质密度、细胞器稀疏明显恢复,神经细胞突触部脑水肿明显降低并可见轻微空泡样变;心肌细胞水肿明显消退,基质密度明显恢复,未见肌原纤维局灶性肌丝溶解,而心肌细胞内线粒体水肿明显消退,未见局部有异常收缩带;肝细胞水肿明显消退,基质密度明显恢复,细胞内可见轻微空泡,肝细胞内脂滴减小,肝细胞间隙增宽恢复明显,毛细胆管未扩张,肝细胞间未见胶原纤维增生。结论 ASMq能够改善抑郁症大鼠模型动物支配器官超微结构的改变。

异常黑胆质成熟剂对慢性应激性抑郁大鼠海马FGF2和VEGF表达的影响

目的探讨异常黑胆质成熟剂(ASMq)对慢性应激抑郁大鼠海马中的成纤维细胞生长因子-2(FGF2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法选取60只清洁级SD雄性大鼠,体质量180~200g,对其给予21d的不可预知慢性应激(CUMS)建立抑郁模型,通过敞箱实验、糖水消耗实验以及体质量的变化检测CUMS抑郁模型是否成功建立。随后将CUMS抑郁模型大鼠随机分为5组(每组12只):模型对照组(生理盐水,1.5 mL/100g体质量)、阳性对照组(盐酸氟西汀,3.5mg/kg体质量)、ASMq高剂量组(1.5g/kg体质量)、ASMq中剂量组(3.0g/kg体质量)、ASMq低剂量组(6.0g/kg体质量),每日灌胃给药1次,连续给药21d,另设清洁级SD雄性大鼠12只作为正常对照组,不给予任何处理。第21天灌胃1h后苯巴比妥麻醉处死,冰上分离海马,采用蛋白印迹法(Westren blot)和实时荧光定量PCR反应(RT-PCR)分别检测CUMS抑郁模型大鼠海马中的成纤维细胞生长因子-2(FGF2)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达量与FGF2、VEGFmRNA的表达量。结果与正常对照组比较,CUMS抑郁模型大鼠体质量减轻,糖水消耗量减少,水平运动和垂直运动得分降低,差异均有统计学意义(P<0.05),CUMS抑郁大鼠模型建立成功。ASMq高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠给药后的体质量增长明显高于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与正常对照组比较,模型对照组大鼠海马FGF2、VEGF蛋白表达量与FGF2、VEGFmRNA的表达量均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,ASMq高、中、低剂量组及阳性对照组大鼠海马FGF2、VEGF蛋白表达量与FGF2、VEGFmRNA的表达量均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ASMq可能是通过提高CUMS抑郁模型大鼠海马中的FGF2和VEGF的表达量,发挥抗抑郁作用。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮逆转K562/ADR细胞株作用机制初步研究

目的探讨维药异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)是否对人白血病阿霉素耐药株K562/ADR有逆转作用。方法首先对K562及K562/ADR细胞进行培养,选择对K562细胞抑制率<10%的药物浓度为ASMq的非细胞毒性剂量,耐药倍数=IC50(K562/ADR)/IC50(K562)=3.075/0.069=44.565 22,再确定两个剂量用于逆转倍数的测定(X1,X2)。计算ADR对K562、K562/ADR细胞和K562/ADR+ASMq细胞的IC50。结果 IC50(K562)=0.069,IC50(K562/ADR)=3.075,IC50(K562/ADR+X1)=3.146,IC50(K562/ADR+X2)=3.274。逆转倍数=IC50(K562/ADR)/IC50(K562/ADR+ASMq)。X1逆转倍数=IC50(K562/ADR)/IC50(K562/ADR+X1)=3.075/3.146=0.977432,X2逆转倍数=0.939 218。由K562、K562/ADR、K562/ADR+X1、K562/ADR+X2的IC50和计算出的逆转倍数得出,ASMq在各组之间的作用不明显。结论低剂量的ASMq对K562/ADR耐药逆转无作用,剂量增加是否对K562/ADR具有耐药逆转作用需进一步研究。

异常黑胆质成熟剂对抑郁症模型大鼠海马ERK信号通路的影响

目的:观察异常黑胆质成熟剂(ASMq)对抑郁症模型大鼠海马ERK信号通路的影响,探讨异常黑胆质成熟剂抗抑郁作用机制。方法:84只雄性SD大鼠,随机分为6组:正常对照组、抑郁症模型组、阳性对照组(氟西汀,3.5mg/kg)及异常黑胆质成熟剂低、中、高剂量组(浓度分别为1.5、3.0、6.0g/kg),每组14只。除正常对照组外,其它组采用慢性不可预见性温和应激(CUMS)诱导建立大鼠抑郁症模型,阳性对照组和异常黑胆质成熟剂各剂量组连续灌胃给药24天,1次/天。通过Open-field实验和糖水消耗实验来评估大鼠抑郁活动状态。末次给药24h后断头处死大鼠、迅速分离海马组织、冻存备用,蛋白印迹法(Western blot)检测大鼠海马p-ERK1/2,ERK1/2表达。结果:应激结束后与正常对照组相比,抑郁症模型组大鼠体重增加量降低、糖水消耗量减少,水平穿越格数、竖立次数均明显降低,处于抑郁状态;各组之间ERK1/2的表达没有显著性差异。与正常对照组相比,抑郁症模型组大鼠海马p-ERK1/2表达明显下降,差异有显著性。与抑郁症模型组相比,阳性对照组和异常黑胆质成熟剂中、高剂(浓度为3.0、6.0g/kg)量组大鼠体重增加量上升、糖水消耗量升高,水平穿越格数、竖立次数均明显增加;与抑郁症模型组相比,阳性对照组、异常黑胆质成熟剂中剂(浓度为3.0 g/kg)量组海马组织p-ERK1/2表达量明显升高,差异有显著性。结论:异常黑胆质成熟剂可能是通过调节ERK信号通路来发挥抗抑郁作用。

维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮对K562/ADR细胞多药耐药性及耐药相关蛋白表达的影响

目的研究异常黑胆质成熟剂总黄酮(ASMq)对K562/ADR(耐阿霉素的慢性粒细胞株)多药耐药(MDR)及耐药相关蛋白表达的影响。方法不同浓度的总黄酮联合不同浓度的ADR作用于体外培养的K562/ADR细胞株,用CCK-8法检测K562/ADR的存活及不同浓度ASMq的耐药逆转倍数,用Western blot方法分析总黄酮对K562/ADR细胞耐药相关蛋白ABCC-1、ABCB-1、BCL-2表达的影响。不同浓度ASMq对K562/ADR的毒活性及三种蛋白质表达的差异采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 (1)当ASMq达到800μg/ml以上时,随着总黄酮浓度的升高,K562/ADR细胞的OD下降,与ASMq为0μg/ml相比,差异具有统计学意义(P<0.001),且随着ASMq浓度的升高,K562/ADR细胞株的增殖抑制率升高,与低浓度组(200μg/ml)相比,差异亦具有统计学意义(P<0.001)。(2)随着ASMq浓度的升高,其耐药逆转倍数增大。(3)随着ASMq浓度的升高,ABCC-1、ABCB-1表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05),而BCL-2表达无明显下降趋势。结论 (1)ASMq可以抑制K562/ADR细胞的增殖。(2)ASMq可实现耐药逆转,且随着ASMq浓度的升高,其逆转倍数增大。(3)ASMq通过下调K562/ADR细胞耐药蛋白ABCC-1、ABCB-1表达的机制,逆转K562/ADR细胞的多药耐药。