环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞周期的影响

分析环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞周期的影响。方法 选择本院2019年1月至2022年10月间自愿参与研究的40例宫颈癌患者,将每位患者宫颈癌Hela细胞周期进行观察。观察研究方法为对比分析。将每位患者的宫颈癌Hela细胞作为对照组,同时使用MEM培养基培养进行培养。培养过程中,观察宫颈癌Hela细胞周期的方法为像差倒置显微镜。培养的时候,分为四组:正常对照组、正义寡核苷酸转染组(SODNS组)、反义寡核苷酸转染组(ASODNS组)、脂质处理组。每份培养基经过48 h的处理,观察细胞周期的变化。结果 细胞形态和数目情况:宫颈癌Hela细胞贴壁生长;形态为不规格的三角形或者为梭形,细胞内部的细胞核形态为圆形或椭圆形,具有核仁;细胞透明性强;经过反义寡核苷酸的转染影响后,宫颈癌Hela细胞的生长状态较差;反义寡核苷酸能够对宫颈癌Hela细胞破坏;反义寡核苷酸浓度逐渐增加后,细胞碎片增多,24 h后细胞数目明显减少,折光性降低;48 h后,细胞形态发生明显变化,细胞质中出现颗粒物质,细胞核固缩,发生破裂和溶解,细胞间隙增大;反义寡核苷酸影响的宫颈癌Hela细胞都出现大量死亡漂浮情况;与对照组、脂质处理组、SODNS组的细胞周期对比分析,能够发现ASODNS组细胞的DNA在S期合成的时候,细胞占比量明显减少,在G2/M期的占比量增多,与其他三组均有明显的数据差异。与此同时,在G0/G1期的时候,细胞分布数据无明显的差异。结论 环氧合酶-2反义寡核苷酸对宫颈癌Hela细胞周期的G2/M、S期均均有影响,可抑制细胞S期,因此对该细胞有抑制繁殖作用。同时均有引发细胞再分布作用。临床治疗宫颈癌患者的时候,可选择COX-2抑制剂辅助治疗。

c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响

目的 观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法 用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果 ①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论 c

Survivin mRNA反义寡核苷酸诱导胰腺癌细胞凋亡

目的:用反义寡核苷酸(ASODN)封闭胰腺癌细胞中Survivin 基因的表达,研究其诱导细胞凋亡的作用及其机制. 方法:用脂质体介导SurvivinASODN转染人胰腺癌细胞株SW1990细胞,用Annexin Ⅴ-FITC/PI复染、流式细胞术检测及电镜术观察凋亡,激酶活性检测法测定细胞内caspase-3活性变化,免疫沉淀法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)活性的变化早期细胞变化情况. 结果:脂质体介导SurvivinASODN转染胰腺癌细胞后细胞内p38MAPK及caspase-3活性较对照组明显升高(55.3% vs 2.9%,3.2%,4.5%,4.8%respectively,P<0.05).细胞出现典型的凋亡形态学特征,细胞凋亡率较对照组明显增加(8.81±1.33 vs 47.87±2.91,and 14.73±1.36 vs 23.47±3.61.P<0.05). 结论:脂质体介导转染Survivin ASODN可以诱导细胞激活,诱导活化进而诱导细胞发生凋亡.

ASODN逆转耐药肝癌细胞多药耐药基因mdr1的体内实验研究

目的 在体外实验研究的基础上进一步观察反义硫代磷酸酯寡核苷酸 (ASODN)在裸鼠体内逆转耐药肝癌细胞SMMC 772 1/ADM多药耐药基因mdr1的作用。方法 取体外培养的耐药肝癌细胞 (1× 10 7个 /0 .2ml)注射于裸小鼠腋部皮下 ,建立耐药肝癌模型 ,而后将成模裸鼠分成 4组 ,每组各 5只。ASODN组在裸鼠肿瘤局部注射浓度为 3μmol/L的ASODN 5 0 μl和脂质体Lipofectamine 5 0 μl,并在腹腔内注射阿霉素 (ADM ,每天 10mg/m2 ) ;正义链组 (SODN组 )与ASODN组的方法、剂量相同 ;对照 1组、对照 2组分别在裸鼠局部注射Lipofectamine 5 0 μl和生理盐水 2 0 0 μl,同时腹腔注射ADM (每天 10mg/m2 )。寡核苷酸于观察的两周内每周前 3d注射 ;ADM于每周的第 2～ 4天使用。Lipofectamine和生理盐水使用时间与寡核苷酸相同。结果 随着时间的推移 ,4组裸鼠的肿瘤体积逐渐增大 ,且于第 5天开始变化明显 ,此后各时相之肿瘤体积与前一时相比较 ,差异均有显著性意义 (P<0 .0 5 ) ;ASODN组的肿瘤体积在第 5天后明显小于其他 3组 (P<0 .0 5 ) ;而对照 1组、对照 2组及SODN组各时相的肿瘤体积差异无显著性意义 (P>0 .0 5 )。该实验结果提示 ,SODN及脂质体对裸鼠肿瘤的生长无明显影响 。

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制。方法用脂质体(LipofectamineTM2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变。结果同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48hIC50在600nmol/l左右。用600nmol/L ASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P<0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P<0.01)。Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P<0.05,t=7.8146,P<0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P<0.05,t=11.3917,P<0.01)。结论ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一。

hTERT基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性的影响

目的：探讨人类端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase,hTERT）基因的反义寡核苷酸（antisenseoligodeoxynucleotide，ASODN）对K562细胞端粒酶活性的影响。方法：采用多聚酶链反应-酶联免疫测定（PCR－ELISA）方法检测人工合成的反义脱氧寡核苷酸处理K562细胞前后端粒酶活性的改变，以逆转录PCR（RT－PCR）分析hTERT基因mRNA表达水平。结果：hTERT基因的ASODN作用于K562细胞后，hTERTmRNA表达水平显著下调，其端粒酶活性明显受到抑制。结论：hTERT基因的ASODN可以在翻译水平显著抑制K562细胞的端粒酶活性，hTERT基因与端粒酶的活性密切相关。

半乳糖基修饰的反义硫代寡核苷酸对肝癌多药耐药细胞株MDR_1基因过度表达的抑制作用

设计合成三种互补ＭＤＲ１ｍＲＮＡ的反义硫代寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ），分别互补ＭＤＲ１ｍＲＮＡ序列起始区、含ＡＵＧ起始密码子区及针对Ｌｏｏｐ形成位点区的序列，作用于阿霉素（ＤＯＸ）诱导的肝癌多药耐药细胞株ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ。经流式细胞分析及ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测，发现三种ＡＳＯＤＮ均能不同程度地降低ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ细胞膜表面Ｐ－ＧＰ含量；同时ＭＤＲ１ｍＲＮＡ的表达也有轻度降低，其中尤以互补ＭＤＲ１ｍＲ－ＮＡＬｏｏｐ形成位点的ＡＳＯＤＮ抑制作用最强。以导向配体Ｇａｌ１０－ＰＬＬ修饰此ＡＳＯＤＮ后，作用于ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ细胞，发现与相同剂量未修饰ＡＳＯＤＮ比较，Ｐ－ＧＰ含量由７６．８％降至１９．８％；对ＡＤＭ的ＩＣ５０由１．２８μｇ／ｍｌ降至０．４２μｇ／ｍｌ。实验说明，半乳糖基修饰的互补ＭＤＲ１ｍＲＮＡＬｏｏｐ形成位点的ＡＳＯＤＮ能够明显降低肝癌多药耐药细胞膜表面Ｐ－ＧＰ的含量，并较大程度地逆转多药耐药细胞ＢＥＬ－７４０２／ＤＯＸ对化疗药物的耐受性。

原癌基因c-erbB_2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨原癌基因c-erbB2、c-myb对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法:建立小鼠卵 母细胞体外培养模型,用不同浓度反义c-erbB2寡脱氧核苷酸(c-erbB2ASODN)和反义c-myb寡脱氧 核苷酸(c-myb ASODN)分别与未成熟卵母细胞共孵育,观察c-erbB2ASODN和c-myb ASODN对 卵母细胞体外成熟的影响。结果:c-erbB2ASODN和c-myb ASODN均能呈剂量依赖方式抑制24h 卵母细胞的GVBD率和PB1排出率,并显著延迟其成熟的时间,而无义tat寡脱氧核苷酸则无此 作用。结论:原癌基因c-erbB2和c-myb均在卵母细胞成熟过程中起着重要的作用。

Survivin反义寡核苷酸对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究

目的探讨survivin反义寡核苷酸(ASODN)对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法3 0只裸鼠建立人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机分3组,每组1 0只。分别于瘤周及瘤体注射阳离子脂质体(lipofectin,Lip),ASODN/Lip及NODN/Lip,每5天1次,共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和裸鼠体重的变化。用TUNEL法,透射电镜观察体内瘤体的细胞调亡情况;用W estern-blot检测各组肿瘤的survivin蛋白表达情况。结果成功建立了裸鼠皮下移植瘤模型。ASODN/Lip治疗组的肿瘤体积在治疗期内减少,抑瘤率达7 0.1 0%;而NODN/Lip治疗组和Lip对照组肿瘤体积增加。各组裸鼠体重无明显变化。ASODN/Lip组细胞凋亡率为3 8.6%明显高于其他两组,差异有显著性(P<0.0 5)。ASODN/Lip组肿瘤的survivin蛋白表达明显降低。结论survivin反义寡核苷酸可有效地抑制人乳腺癌裸鼠皮下肿瘤的生长速度,并促进诱导肿瘤细胞的凋亡。

TGFα、EGFR反义寡聚核苷酸对大肠癌生长的抑制作用

研究转化生长因子α(TGFα)、表皮生长因子受体 (EGFR)反义寡聚核苷酸 (ASODN)对人大肠癌生长增殖的作用。反义TGFα、反义EGFR及无关对照ODN经阳离子脂质体包裹后转染人大肠癌HR8348细胞。采用噻唑蓝比色法 (MTT法 ) ,细胞周期分析 ,裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。与对照组HR8348细胞相比 ,经TGFα反义ODN处理的HR8348细胞体外增殖速度减慢 (抑制率达 80 % )、DNA合成受抑、裸鼠体内成瘤率下降 (2 5 %∶ 10 0 % )。经EGFR反义ODN处理的HR8348细胞也得到了类似的结果。TGFα反义ODN、EGFR反义ODN均能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖。

反义c-myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞生长的抑制作用

目的 探讨反义c myc寡核苷酸 (ASODN)对半乳糖诱导的兔晶体上皮细胞 (LEC)生长的影响。方法 人工合成与c myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,用半乳糖和反义寡核苷酸处理培养的晶体上皮细胞 ,应用细胞计数法和MTT法观察反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的晶体上皮细胞增殖的影响。结果 2 5～ 10 0 μmol/L反义c myc寡核苷酸能抑制半乳糖诱导的晶体上皮细胞的增殖 ,10 0 μmol/L时作用较显著。 结论 反义c myc寡核苷酸对半乳糖诱导的白内障晶体上皮细胞的生长增殖有抑制作用。

C-fos对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

通过C-fos ASODNs诱导C-fos基因发生转录后沉默,用人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导体外培养的3周龄荣昌仔猪睾丸间质细胞(Leydig cells,LC)睾酮分泌,用酶联免疫分析方法检测基础状态下和HCG诱导下体外培养的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的水平。结果显示,C-fos ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和HCG诱导下的睾酮分泌(P<0.01),这表明C-fos在基础状态下还是HCG诱导下均可促进仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌。

端粒酶活性的抑制对顺铂诱导HL-60细胞凋亡的影响

采用端粒酶聚合酶链反应 酶联免疫吸附测定 (PCRELISA)的方法 ,检测人类端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因反义寡脱氧核苷酸 (ASODN)处理HL 60细胞前后端粒酶活性的改变 ,并进一步通过姬姆萨染色及流式细胞术方法 ,分析HL 60细胞的端粒酶活性受到抑制后顺铂对HL 60细胞凋亡的影响。结果显示 :hTERT基因ASODN作用于HL 60细胞后 ,端粒酶活性表现逐渐下降 ;hTERTASODN与顺铂联合可诱导HL 60细胞出现一系列特征性的凋亡细胞的形态学变化 ;hTERT基因ASODN作用于HL 60细胞 2 4小时再加入顺铂 ,用流式细胞术测定凋亡细胞的百分率明显高于正义寡核苷酸 (SODN)联合顺铂作用组和单用顺铂作用组 (P <0 .0 1)。然而 ,hTERT基因的ASODN下调HL 60细胞的端粒酶活性以后 ,再用DNR和Ara c处理不能加速HL 60细胞的凋亡。以上的结果表明了端粒酶活性的下调可选择性促进顺铂诱导HL

ILK反义寡核苷酸对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的探讨整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)反义寡核苷酸(antisense oligonucleoti-de,ASODN)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法将人卵巢癌HO-8910细胞株接种于裸鼠皮下,建立人卵巢癌裸鼠模型,并将裸鼠随机分为对照组和治疗组,每次腹腔注射治疗后称量裸鼠体重、肿瘤体积及重量,并计算抑瘤率。同时,分别用脂质体和脂质体-ILK-ASODN转染HO-8910细胞,用WST-1法检测转染后两组细胞体外的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果治疗组裸鼠肿瘤体积及重量增长速度受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染了ILK-ASODN的治疗组细胞增殖受到显著抑制,凋亡率明显增高,与对照组比较差异均具有极显著意义(P<0.01)。结论 ILK-ASODN在体外能抑制细胞生长、促进细胞凋亡;在体内能明显地抑制肿瘤生长,对人卵巢癌裸鼠移植瘤具有一定的治疗作用。

以jetPEI-RGD为载体的^(125)I-(α_v)ASODN投递对人肝癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨以jetPEI-RGD为转染载体的125I-(αV)ASODN投递在体外对HepG2细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物jetPEI-RGD为载体,通过受体介导的转染方式进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型评估复合物对HepG2细胞侵袭力的影响,并计算实验组和各对照组的抑制率。结果:jetPEI-RGD/125I-(αV)ASODN组、jetPEI-RGD/(αV)ASODN组、jetPEI-RGD组、125I-(αV)ASODN组、(αV)ASODN组和Na125I组的抑制率分别为(52.60±4.11)%、(39.73±3.40)%、(30.05±5.19)%、(14.14±2.94)%、(12.79±2.68)%和(0.91±2.91)%,相对于其他各实验对照组,jetPEI-RGD/125I-(αV)ASODN组减低了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:以jetPEI-RGD为载体投递125I-(αv)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力。

hTR反义寡核苷酸对急性白血病原代细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的 探讨端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸 (ASODN)对急性白血病 (AL)原代细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法 应用与人hTR起始密码子互补的硫代ASODN处理AL原代细胞 ,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞 ,用端粒酶重复扩增分析 (TRAP) -PCR -ELISA检测法观察端粒酶活性的变化 ,用Giemsa染色、Hoechst332 5 8+PI双染荧光显微镜检查及流式细胞仪检测凋亡细胞的发生。结果 经hTR -ASODN作用后 ,AL原代细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间相关 ,10 μmol/LASODN在作用 72h时端粒酶活性为( 0 0 95± 0 0 6 ) ,较细胞对照组 ( 1 15 4± 0 15 )下调明显 (P <0 0 1) ;在作用第 5天经荧光显微镜可观察到ASODN组细胞凋亡形态学变化。流式细胞仪检测到其凋亡率为 ( 31 72± 8 6 4 ) ,与细胞对照组的凋亡率 ( 6 33± 0 91)比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 hTR -ASODN可明显抑制AL原代细胞端粒酶活性并诱导其凋亡 。

Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的 研究阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｐ）介导的ＤＮＡ 聚合酶α（ＤＮＡ－ ｐｏｌα） 反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人ｐｏｌ α催化亚基ｍＲＮＡ 翻译起始区１８ 个碱基互补的寡核苷酸（ＯＤＮ） ，与Ｌｉｐ 混合制备Ｌｉｐ＋ ＯＤＮ复合物，作用于ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１ 人胃癌细胞２４ ｈ 后，细胞换液，继续培养２４ ｈ，用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测细胞存活状态，流式细胞术（ＦＣＭ）分析癌细胞ＤＮＡ含量。结果 １０ μｇ／ｍｌｐｏｌα特异的ＡＳＯＤＮ在Ｌｉｐ 介导下可显著抑制人胃癌细胞的ＤＮＡ复制和细胞增殖，正义ＯＤＮ（ＳＯＤＮ） 无此作用。结论 ＤＮＡ－ ｐｏｌα特异ＡＳＯＤＮ可用于胃癌的基因治疗， 阳离子脂质体可促进ＡＳＯＤＮ大量进入癌细胞， 增强其生物效应。

PDGFR-αASODN玻璃体内注射对视网膜的毒性作用

目的:探讨PDGFR-αASODN对视网膜的毒性作用。方法:选择健康成年有色家兔24只,随机分为4组,每组6只;4组兔子3组右眼玻璃体分别注射0.1 m L不同浓度的PDGFR-αASODN/lipofectamine TM 2000溶液,另外1组注射0.1 m L平衡盐溶液作为对照组;4组兔子的左眼不注药。于注药后第1、7、14及28天,对4组兔子的右眼行裂隙灯、间接检眼镜、视网膜电图(ERG)检查;第28天,取4组兔子的眼球,对视网膜组织进行光镜HE、免疫组化及透射电镜的观察。结果:裂隙灯、间接检眼镜检查,各组在各个检查时间点均未发现异常。ERG b波振幅,实验组与对照组比较差异无显著性。注药后第28天,光镜下HE和免疫组化检查,各组视网膜组织均未发现任何病理变化。注药后第28天电镜检查,D组视网膜感光细胞:部分膜盘间隙扩张,部分膜盘融合,少数细胞核周围间隙略增大,其细胞核形态略不规则。结论:玻璃体内注射0.1 m L PDGFR-αASODN/lip2000时,PDGFR-αASODN的浓度≤1.5μmol/L是较为安全的。

反义血管内皮生长因子(VEGF)转染体内抑制胆囊癌VEGF及其受体表达的研究

目的:探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠移植瘤的生长及VEGF、Flt-1和KDR表达的影响。方法:通过裸鼠皮下接种体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞建立人胆囊癌裸鼠移植瘤模型,并将裸鼠分为对照组(A组)、VEGF SODN+Oligifectamine组(B组)和VEGF ASODN+Oligifectamine组(C组),各组裸鼠在接种后24h内,在接种部位皮下分别缓慢注射200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGF SODN100μg+Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl)及VEGF ASODN100μg+Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl),每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,并运用免疫组化技术检测胆囊癌裸鼠移植瘤中VEGF、Flt-1和KDR的表达变化。结果:A、B、C组裸鼠2周时的成瘤率分别为87.5%、87.5%和37.5%,C组显著低于A、B组(P<0.05),5周时各组的成瘤率均为100%。各组裸鼠移植瘤5周时的体积和瘤重分别为:A组(253.49±27.11)mm3和(1.96±0.17)g,B组(255.84±26.51)mm3和(1.86±0.21)g,C组(125.45±17.49)mm3和(0.97±0.13)g,C组显著低于A、B组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达均无统计学差异(P>0.05),而C组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达较A、B组明显减弱(P<0.05)。结论:VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF、Flt-1和KDR在蛋白水平的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长及血管的形成。