溶藻弧菌asp基因在大肠杆菌中表达活性研究及条件优化

为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,纯化的ASP相对分子质量约为42 000,具有蛋白活性;在诱导温度28℃、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度1 mmol/L及诱导时间16 h时,表达的活性ASP蛋白最多。

WASP基因第七内含子突变致Wiskott-Aldrich综合征1例

患儿，男，6个月，因“腹泻伴发热3d”于2016年4月4日收入院。该患儿新生儿时因“新生儿肺炎”人住我院新生儿科，查血小板52×10^9·L-1，白细胞及血红蛋白正常，伴有面部湿疹，考虑为感染所致血小板降低，当时未检测免疫功能及基因筛查，经积极抗炎、对症支持治疗后好转出院。后患儿仍反复出现呼吸系统感染，于当地社区卫生院治疗后好转，而面部及躯干部湿疹经治疗后仍反复发作，但全身皮肤黏膜及腔道均未见出血表现。

Toll样受体4基因Asp299Gly多态性与脑膜炎球菌病易感性的Meta分析

目的探讨Toll样受体4（TLR4）基因Asp299Gly多态性与脑膜炎球菌病易感性的关系。方法检索Pubmed,Cohrance,Embase,CNKI,维普,万方等数据平台从建库截止到2015年12月31日的文献,搜寻符合纳入和排除条件的随机对照研究,Rev Man5.0.0软件进行Meta分析。结果共纳入4篇文献,样本总量3 707例,其中研究组1 681例,对照组2 026例。Meta分析未见TLR4基因Asp299Gly多态性与脑膜炎球菌病易感性相关（等位基因A vs G∶OR=1.01,95%CI=0.84-1.23,P=0.89;基因型AA/AG vs GG∶OR=1.05,95%CI=0.55-2.02,P=0.87;基因型AA vs AG/GG∶OR=1.01,95%CI=0.82-1.24,P=0.95）。结论未见TLR4基因Asp299Gly多态性与脑膜炎球菌病易感性相关。

TLR4Asp299Gly基因多态性与炎症性肠病易感性的Meta分析

目的评价TLR4Asp299Gly基因多态性与炎症性肠病（IBD）的易感性。方法检索PubMed、CNKI、万方、CBM和维普等数据库，查找Toll样受体4（TLR4）Asp299Gly基因与IBD相关的病例对照研究。应用RevMan5．2和Stata12．0软件进行Meta分析。结果最初检索到318篇文献，根据纳入标准和排除标准后纳入19篇文献，其中克罗恩病（CD）相关研究17篇，溃疡性结肠炎（UC）相关研究12篇，共纳入5785例患者和3729例对照者。Meta分析结果显示：与基因型AA比较，基因型AG、GG、AG＋GG均增加CD的风险；与等位基因A比较，等位基因G增加CD的风险。与基因型AA比较，基因型AG、GG、AG＋GG均增加溃疡性结肠炎（UC）的风险；与基因型AG＋AA比较，基因型GG增加UC的风险；与等位基因A比较，等位基因G增加UC的风险。TLR4多态性与欧洲人群IBD及亚洲人群UC相关。结论TLR4Asp299Gly基因与IBD易感性相关，等位基因G可增加IBD的风险。

Toll样受体4基因Asp299Gly多态性与肺炎链球菌病易感性的Meta分析

目的系统评价Toll样受体4(TLR4)基因Asp299Gly基因多态性与肺炎链球菌病易感性的相关性。方法计算机检索Pubmed,Cohrance,Embase,CNKI,维普,万方等网站,检索时限均为各数据库建库到2016年7月31日,搜寻符合纳入和排除条件的随机对照研究,采用Rev Man5.3软件进行Meta分析及相关统计学分析。结果共纳入5篇文献,样本量总计为1456例,其中研究组501例,对照组955例。Meta分析未见TLR4基因Asp299Gly多态性与肺炎链球菌病易感性相关(等位基因A vs G:OR=1.01,95%CI=0.49~2.07,P=0.98;基因型AA/AG vs GG:OR=0.67,95%CI=0.18~2.48,P=0.55;基因型AA vs AG/GG:OR=1.01,95%CI=0.47~2.19,P=0.98)。结论未见TLR4基因Asp299Gly多态性与肺炎链球菌病易感性相关。

TLR4基因Asp299Gly、Thr399Ile错义突变与强直性脊柱炎的相关性研究

强直性脊柱炎是一种以中轴关节受累为主要病变的自身免疫性疾病.新近的研究显示,TLR4基因多态与强直性脊柱炎的发生和病情发展有关,但迄今尚未见对中国人群的研究报道.该研究以病例-对照研究策略,采用PCR-RFLP和直接测序的方法,在107名强直性脊柱炎病例和112名健康对照个体中,对TLR4基因位于第3外显子编码区的rs4986790和rs4986791位点,即Asp299Gly和Thr399Ile错义突变进行多态检测.结果显示,在病例和正常对照样本中,均未检测到这2个位点的多态性,提示这2个位点多态与强直性脊柱炎的发生无关.这是首次在中国云南汉族人群中进行的TLR4基因多态与强直性脊柱炎的关联研究.

促酰化蛋白301T〉C基因多态性与新疆维吾尔族及汉族人群2型糖尿病的相关性

近来的研究发现,脂肪组织不仅可以储存能量,而且还是一个重要的分泌器官,它分泌多种生物活性分子,通过内分泌、旁分泌和自分泌方式调节机体的能量代谢.其中,促酰基化蛋白（ASP）是一种由脂肪细胞和纤维母细胞分泌的76个氨基酸的小分子碱性血浆蛋白,等电点（PI）=9.0,分子量8932.它影响脂肪组织葡萄糖转运和游离脂肪酸存储,对能量平衡的维持有着重要作用[1].已有研究表明ASP与糖尿病有一定的相关性,但尚未见ASP基因多态性与2型糖尿病（T2DM）关系的报道.因此本研究目的在于探讨新疆地区维、汉族患者ASP基因rs7257062位点多态性与T2DM、血脂代谢的关系.

锡兰钩虫ASP4基因的表达与免疫保护效果分析

为克隆锡兰钩虫ASP4基因(Ace-ASP4),评估其重组蛋白在小鼠体内诱导的免疫保护效果,先扩增AceASP4基因序列,并对其编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,并原核表达ASP4蛋白。将重组蛋白免疫小鼠,然后利用CCK-8法和间接ELISA方法分别检测小鼠脾淋巴细胞增殖能力和血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平。同时检测首免后小鼠血清中IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10水平。最后,在三免后14 d经口感染500条L3幼虫,48h后检测肺、胃肠道和肌肉的虫体数量,计算减虫率,以评估其免疫保护效果。结果表明:1)Ace-ASP4基因的ORF全长为750 bp,编码249个氨基酸。生物信息学分析显示,Ace-ASP4编码蛋白为亲水性蛋白,具有信号肽序列且无跨膜结构,其三维结构模型质量良好(GMQE值为0.9)。2)Ace-ASP4蛋白分子大小为27 ku,在上清和沉淀中均有表达,但主要以包涵体形式富集于沉淀中,并具有良好的免疫反应性。3)Ace-ASP4重组蛋白可诱导免疫小鼠IgG、IgG1和IgG2a抗体显著上升,并极显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖(P<0.01)。与PBS对照组相比,在首免后第35天用Ace-ASP4重组蛋白免疫小鼠后其体内的IFN-γ、IL-2、IL-4和L-10显著升高(P<0.05)。4)攻虫后,与PBS对照组小鼠相比,50μg/mL重组蛋白免疫小鼠在肺中获得了52%的减虫率,在胃肠道中获得了46%的减虫率,在肌肉中获得了61%的减虫率。综上,本研究成功克隆表达了Ace-ASP4蛋白,Ace-ASP4蛋白能使免疫小鼠产生抗体,促进其脾淋巴细胞增殖等,为进一步研究ASP4基因的生物学功能奠定基础,也为研制锡兰钩虫疫苗提供参考数据。

两种新的凋亡诱发蛋白的聚合作用及其对细胞凋亡的调控

Asy(apoptosis/saibousi Yutsudo)是日本Yutsudo小组于1999年发现的一个新的人类细胞凋亡诱发基因。2000年齐兵等人通过酵母双杂交系统从人肺细胞系(W1-38)cDNA文库中克隆出一个能与ASY蛋白相互作用的蛋白的新基因haP(homologue ofasy protein)、已经证明ASY能在酵母细胞和哺乳动物细胞中形成同源二聚体,ASY与HAP能在酵母细胞中形成异源二聚体,ASY和HAP均能诱发肿瘤细胞Saos2和CGL4凋亡。通过酵母双杂交系统证明HAP能在酵母细胞中形成同源二聚体;通过交叉免疫沉淀证明HAP与ASY能在人类细胞中形成异源二聚体。通过AnnexinV,TUNEL,DNALadder和流式细胞计数等检测凋亡的技术,对asy,hap单独转染或共转染的人类正常细胞或肿瘤细胞的凋亡进行定性或定量检测,证明ASY和HAP不仅诱发人类肿瘤细胞凋亡,而且能诱发人类正常细胞凋亡,并且证明由ASY与HAP形成的异源二聚体可降低由ASY和HAP各自形成的同源二聚体诱发细胞凋亡的活性,揭示ASY与HAP形成同源或异源二聚体是调控人类细胞凋亡的重要机制。