黄芪皂苷及黄芪甲苷对慢性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜上皮细胞超微结构的影响

目的:探讨慢性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜上皮细胞超微结构的改变和AST与AST-Ⅳ可能发挥的作用。方法:采用大黄灌胃造成大鼠慢性胃粘膜损伤模型,用扫描电镜观察慢性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜表面上皮细胞超微结构的变化及AST与AST-Ⅳ预防给药和治疗给药对其的影响。结果:慢性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜上皮细胞广泛坏死、破碎、形态模糊不完整,排列紊乱,细胞肿胀、扁平,细胞间无界限,多个细胞挤压扭结成团;细胞表面微绒毛稀少、脱落,分泌颗粒稀少;胃小凹结构畸形的。AST高(200mg/kg)、低(100mg/kg)剂量及AST-Ⅳ高剂量(4.08mg/kg),预防给药和治疗给药,均能够扭转慢性胃粘膜损伤大鼠胃粘膜上皮的病变,且AST各剂量的作用均优于AST-Ⅳ各剂量,AST高剂量预防给药和治疗给药的作用均明显优于其余各剂量,与正常组的水平相当;AST低剂量预防给药和治疗给药的作用均优于AST-Ⅳ高剂量。结论:慢性胃粘膜损伤大鼠的胃粘膜屏障受到破坏,AST及AST-Ⅳ均具有保护胃粘膜屏障的作用。AST的作用明显优于AST-Ⅳ,且随剂量的增加,AST的优越性更加明显,大剂量的作用接近正常组的水平。AST在较低剂量的情况下可以达到甚至超过AST-Ⅳ大剂量的作用效应。

基于黄芪甲苷单克隆抗体的ELISA检测方法的建立

目的建立黄芪甲苷的酶联免疫分析(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法。方法以制备的黄芪甲苷单克隆抗体为基础,选择其最佳工作浓度,建立黄芪甲苷间接竞争ELISA法,并用该方法检测黄芪饮片中的黄芪甲苷含量。结果该方法线性范围为39～1 830 ng·mL^(-1),组内和组间差异均≤10%,平均加样回收率为102.7%(n=6)。采用该方法检测黄芪饮片中黄芪甲苷的含量,所得结果与HPLC法基本一致。结论建立了黄芪甲苷的ELISA检测方法,可为黄芪饮片及其制品的质量控制提供方法补充。

黄芪甲苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的防治作用

目的:探讨黄芪甲苷(AST-Ⅳ)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的防治作用及作用机制。方法:C57BL/6雌性小鼠18只,采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽35-55(MOG35-55)诱导建立EAE模型,随机分为EAE对照组,AST-Ⅳ高、低剂量组。造模的第3天起,进行注射用药,持续25d。EAE对照组腹腔注射PBS;AST-Ⅳ高、低剂量组分别腹腔注射AST-Ⅳ溶液30、15mg·kg^-1·d^-1;各组小鼠每次给药0.2mL/只,隔天记录体质量变化。HE染色检测脊髓炎细胞浸润。流式细胞术检测脾中CD_4^+T淋巴细胞表型的表达情况。Western Blot法检测脊髓TLR4、Myd88、NF-κB/p65的表达变化。结果:与EAE对照组比较,AST-Ⅳ高剂量组可显著降低平均最高临床评分(P<0.01),减轻EAE临床症状;抑制脊髓炎性细胞浸润;显著增加CD_(25)^+和TGF-β^+的CD_4^+T细胞亚群的比例(P<0.01),降低CD_4^+IL-17^+的比例(P<0.01),明显抑制TLR4、Myd88、NF-κB/p65在脊髓的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:AST-Ⅳ可能通过调节Th17细胞与Treg细胞两者之间的平衡和调节炎性通路减轻EAE的发病程度。