免疫鼠抗AT_1受体自身抗体的类型分布研究

目的:明确免疫鼠血中抗AT1受体自身抗体的类型分布,为该抗体的作用机制研究提供一定的实验依据。方法:以AT1R-ECII为抗原主动免疫雌性Wistar大鼠,待大鼠血清中含有高滴度的抗AT1受体自身抗体后,用ELISA法检测血清中抗AT1受体抗体的水平、类型及亚类。结果:雌性Wistar大鼠免疫4周后,抗AT1受体抗体滴度时明显升高,8周时处于稳定高峰值(免疫组OD值2.99±0.11 vs.同期对照组0.44±0.06,P<0.05);该抗体属于免疫球蛋白的Ig G类;在大鼠Ig G的4个亚型(Ig G1,Ig G2a,Ig G2b,Ig G2c)中,该抗体大部分属于Ig G2b亚类(OD值为0.33±0.04 vs.同期对照组OD值0.08±0.01,P<0.05),极少部分属于Ig G2a亚型(OD值为0.10±0.01 vs.同期对照组OD值0.07±0.05,P<0.05)。结论:通过主动免疫大鼠体内产生的抗AT1受体抗体主要属于Ig G类,Ig G2b亚类。

昆明汉族ACE、AT_1R基因多态性与2型糖尿病肾病的关系

运用聚合酶链反应(PCR)和PCR/Ddel酶切技术,检测110例DN患者[DN(+)组]与74例2型糖尿病无肾病患者[DN(-)组]及56例正常对照人群ACE基因及AT1R基因多态性。结果(1)DN(-)组ACE-DD基因型和D等位基因频率与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05);(2)DN组ACE基因DD基因型频率(56.4%),D型等位基因频率(70.5%)较DN(-)组(21.6%,46.6%)均升高(P<0.01);(3)三组间AT1R基因的A1166C多态基因型频率和等位基因频率分布均无差异(P>0.05);(4)联合作用分析同时携带ACE纯合子缺失基因型(DD)和AT1R突变基因型(AC+CC)者发生DN的危险较大,OR值为5.421。结论昆明地区汉族人ACE基因I/D多态性与2型DN发生有关,携带DD基因型和D型等位基因者是2型DN的易感人群。AT1R基因A1166C多态性与2型DN无关,但携带AC+CC与DD基因型的个体有更高的患DN风险。

血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型基因AT1R在髓系白血病患者骨髓样本中的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ受体1型基因AT1RR在髓系白血病患者样品中的altmRNA表达,为临床诊疗提供依据和参考。方法选择2017年5月~2019年6月髓系白血病患者61例作为对象,设为观察组;选择同期治疗的缺铁性贫血者52例,设为对照组。实时定量RT-PCR法检测骨髓中单个核细胞中AT1R mRNA的含量。结果观察组急性髓系白血病患者altmRNA表达水平显著高于对照组缺铁性贫血者(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ受体1型基因AT1R在髓系白血病患者中呈高表达,有望成为髓系白血病治疗新的靶点。

抑制CYP4A11基因表达的siRNAs优选及对血管收缩相关因子的影响

为了考察人细胞中细胞色素P450 4A11(CYP4A11)表达受抑制之后是否会影响血管相关收缩因子的表达,在线设计多个抑制细胞中代谢酶编码基因CYP4A11表达的siRNAs并通过BLAST验证;选择效果好的3对siRNAs合成并转染至EA.hy926细胞株,通过荧光染色和定量多聚酶链反应(quantitative polumerase chain reaction,qPCR)初步检测后,再采用表达量相对更高的MG63细胞系进行验证,发现25 nmol/L的siRNA2抑制效果最好;随后使用25 nmol/L siRNA2抑制CYP4A11在EA.hy926细胞株中的表达,并通过qPCR与Western-blot检测血管收缩相关因子的表达情况,发现促血管收缩相关因子内皮素1受体(endothelin 1 receptor,ET1R)、血管紧张素1型受体(angiotensin type 1 receptor,AT1R)表达下调(P<0.05),而内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达显著上调(P<0.001)。因此,siRNA2能通过显著抑制EA.hy926细胞中CYP4A11的表达,调节血管紧张的相关指标,有促血管松弛作用的趋势。

强心胶囊对心力衰竭模型大鼠AngⅡAT1R的影响

目的 观察强心胶囊对心力衰竭模型大鼠血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平及心肌组织血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠90只,随机分为对照组(10只)和模型组(80只).模型组大鼠尾静脉注射阿霉素复制心力衰竭动物模型,模型复制成功后,随机分为模型组,西药组和强心胶囊低、中、高剂量组.对各组大鼠灌胃治疗,强心胶囊低、中、高剂量组分别给予0.66、1.32、2.64 g/kg强心胶囊溶液灌胃,西药组给予1.8 mg/kg依那普利溶液灌胃,模型组和空白组给予等容积0.9%生理盐水灌胃,每日1次,连续给药4周.实验结束后,ELISA检测大鼠血清AngⅡ,免疫组织化学法检测大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠血清AngⅡ水平明显升高(pg/mL:301.90 ±43.51 vs.809.22±99.98,P<0.05);与模型组比较,西药组和强心胶囊中、高剂量组血清AngⅡ水平明显降低(pg/mL:809.22±99.98 vs.415.64±80.28,497.60±76.99,417.36±87.73,P<0.05);与西药组比较,强心胶囊中、高剂量组AngⅡ水平差异无统计学意义(P>0.05);与强心胶囊低剂量组比较,强心胶囊中、高剂量组血清AngⅡ水平明显降低(pg/mL:607.80±103.24 vs.497.60 ±76.99,417.36±87.73,P<0.05).与空白组比较,模型组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,西药组和强心胶囊中、高剂量组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显降低(P<0.01);与西药组比较,强心胶囊中、高剂量组差异无统计学意义(P>0.05);与强心胶囊低剂量组比较,强心胶囊中、高剂量组大鼠心肌组织中AT1R蛋白表达明显减低(P<0.05).结论 心力衰竭模型大鼠血清AngⅡ水平升高,AT1R蛋白表达上调.强心胶囊能明显降低心力衰竭大鼠血清AngⅡ水平,减轻心肌中AT1R蛋白表达.强心胶囊可抑制心力衰竭大鼠血清AngⅡ水平和AT1R蛋白表达,中、高剂量作用优于低剂量,疗效存在浓度依赖性.

AT1R基因A1166C的多态性与急性心肌梗死患者冠脉病变程度的关系

目的:研究血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因A1166C的多态性与急性心肌梗死(AMI)患者冠脉病变程度的关系。方法:采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测105例初发AMI患者的AT1R基因A1166C的多态性。对所有患者进行冠脉造影,根据结果判定冠脉病变的支数(狭窄程度≥50%)和冠脉病变的Gensini积分。结果:AMI患者中,AC+CC基因型携带者冠脉病变的支数和Gensini积分均显著高于AA基因型携带者(P<0.05)。结论:AT1R基因A1166C的多态性与AMI患者冠脉病变程度有关。

肝纤维化大鼠肝脏血管紧张素Ⅱ受体1型的表达及其与α-平滑肌肌动蛋白表达相关性研究

目的了解血管紧张素Ⅱ受体1型(angiotensinⅡtype 1receptor,AT1R)在肝纤维化大鼠肝脏的表达及其与胶原纤维含量和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的关系。方法将30只SD大鼠随机分成正常组(n=10)和肝纤维化组(n=20)。正常组正常饲养,肝纤维化组给予40%四氯化碳(CCL4)橄榄油0.4mL/100g体质量背部皮下注射,每3d注射1次,第5w末处死两组大鼠,肝组织制备成石蜡切片后进行Masson三色染色、AT1R和α-SMA免疫组织化学染色,采集图片后用image pro plus 6.0软件对阳性表达进行累计光密度测定。对所得数据进行相关和回归分析。结果 AT1R在正常组大鼠肝脏不表达或血管周围弱表达,在肝纤维化组肝脏汇管区周围和纤维间隔周围大量表达,其主要在肝细胞浆和(或)膜表达,肝星状细胞未见表达;半定量测定及相关分析结果显示,α-SMA与胶原纤维、AT1R与胶原纤维、AT1R与α-SMA的相关系数分别为0.958、0.971、0.990(P<0.01)。结论 AT1R在肝纤维化大鼠肝细胞大量表达,在肝星状细胞不表达,AT1R的含量与胶原纤维含量、α-SMA表达量存在正相关性。

AT1R基因A1166C多态性与急性心肌梗死的相关性研究

目的研究AT1R基因A1166C多态性与急性心肌梗死(AMI)的相关性。方法采用PCR-RFLP方法,对105例初发AMI患者和111例健康对照个体进行AT1R基因A1166C多态性分析。结果 AT1R基因A1166C多态性中AA和AC+CC基因型在AMI患者组的频率分别为88.6%和11.4%,等位基因A和C的频率分别为93.3%和6.7%;AA和AC+CC基因型在对照组中的频率分别为92.8%和7.2%,等位基因A和C的频率分别为95.9%和4.1%。AMI组与对照组比较,AA和AC+CC基因型频率及A和C两等位基因频率均无统计学显著性差异(P>0.05)。Logistic回归分析显示高血压、冠状动脉疾病家族史、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇是AMI发生的独立危险因素(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇是保护性因素(OR<1,95%CI 0.155～0.931),其余三项为危险因素(OR>1)。结论 AT1R基因A1166C多态性与AMI的发生可能无关联。

TMAO与RAS在心血管疾病中的相互作用研究进展

心血管疾病是我国亟待防治和解决的重大公共卫生问题,明确心血管疾病诊治过程中的关键标志物及治疗靶点对于临床工作意义重大。氧化三甲胺(TMAO)是一种肠道细菌的代谢产物,其与心血管疾病的发生和发展密切相关。肾素-血管紧张素系统(RAS)是人体内最重要的体液稳态调节系统,在心血管疾病的过程中同样扮演重要角色。近来一些研究将氧化三甲胺和肾素-血管紧张素系统联系起来,研究两者之间存在的相互作用,探究两者参与心血管疾病的病理过程。在本篇综述中,主要概述氧化三甲胺和肾素-血管紧张素系统之间的相互作用在心血管疾病中的研究进展。

栀子豉汤对自发性高血压大鼠AT1受体mRNA表达的影响

目的:观察栀子豉汤对自发性高血压大鼠(SHR)的血压和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)mRNA表达的影响,初步探讨其防治糖尿病心血管病变的可能机制。方法:选取SHR 50只,按血压随机分为模型对照组,栀子豉汤4 g生药/kg、8 g生药/kg、16 g生药/kg组及卡托普利组(2 mg/kg),采用鼠尾动脉间接测压法测定大鼠血压,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测主动脉及心肌组织AT1R mRNA的表达。结果:栀子豉汤8 g生药/kg及16 g生药/kg组治疗4周后,SHR血压明显降低,主动脉及心肌AT1R mRNA表达下调。结论:栀子豉汤可降低血压,下调主动脉及心肌组织AT1R mRNA表达,可能对糖尿病心血管病变的防治具有一定价值。

AT1R和eNOS在盐敏感性高血压发生中作用

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在盐敏感性高血压发生发展中的作用。方法用乳鼠皮下注射辣椒辣素法建立模型。哺乳期后,大鼠随机分成4组:对照组、高盐组、辣椒辣素组、辣椒辣素+高盐组,喂养4周后处死大鼠,免疫组化检测大鼠腹主动脉AT1R和eNOS蛋白表达,反转录-聚合酶链式反应检测大鼠腹主动脉AT1R和eNOS mRNA表达。结果与对照组比较,辣椒辣素组大鼠动脉AT1R蛋白表达量增加0.70倍(P<0.01),而动脉eNOS蛋白表达量降低20.5%(P<0.05),eNOS mRNA的表达降低0.80倍(P<0.05);与对照组比较,辣椒辣素+高盐组大鼠动脉AT1R蛋白表达量增加1.69倍(P<0.01),AT1R mRNA表达量提高1.70倍(P<0.01),而动脉eNOS蛋白表达量降低60.2%(P<0.01),eNOS mRNA表达降低2.52倍(P<0.01)。结论感觉神经损伤性盐敏感性高血压大鼠动脉AT1R表达升高,同时eNOS表达降低,AT1R和eNOS表达水平的差异可能与盐敏感性高血压的形成有关。

厄贝沙坦联合缺血后适应对糖尿病大鼠缺血再灌注损伤早期心肌纤维化及心室重构的影响

目的探讨厄贝沙坦联合缺血后适应对2型糖尿病大鼠缺血再灌注损伤早期心肌纤维化及心室重构的影响及机制。方法选取SD大鼠40只,建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为4组(n=10):1假手术组;2缺血再灌注对照组(对照组);3缺血后适应组(Post组);4厄贝沙坦后处理+缺血后适应组(Eba+Post组)。检测各组大鼠血清肌钙蛋白c Tn T以及心肌酶CK-MB、血清AT1受体自身抗体及心肌AT1R m RNA的表达;HE染色和电镜测定大鼠心肌间质纤维化及心肌炎性水平,以及各组大鼠心重指数和心肌胶原蛋白含量。结果 Post组CK-MB和c Tn T水平均低于对照组(均P<0.05),Eba+Post组CK-MB和c Tn T水平低于Post组,P<0.05;Post组及Eba+Post组抗AT1R受体阳性率分别为30%(3/10)和20%(2/10),明显低于对照组50%(5/10),P<0.05;Post组、Eba+Post组大鼠治疗后AT1R m RNA的表达明显减少,均明显低于对照组,P<0.05,与Post组相比,Eba+Post组AT1R m RNA的表达显著减少,P<0.05;HE染色切片及电镜检查显示,Post组、Eba+Post组心肌超微结构的改善明显,Eba+Post组心肌炎症及心肌纤维化的改善效果更为明显;对照组、Post组及Eba+Post组心重指数及心肌胶原蛋白含量较假手术组升高,治疗组上述指标均显著下降,Eba+Post组心重指数及心肌胶原蛋白含量较Post组降低,P<0.05。结论在高血糖大鼠心肌缺血再灌注条件下,ARB药物后处理对心肌缺血后适应有协同保护作用,其机制可能与调节AngⅡ、AT1R的水平有关,可改善早期心肌纤维化,减轻早期心室重构。

氯沙坦抑制大鼠主动脉血管钙化的机制

目的观察血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)阻断剂氯沙坦对大鼠主动脉血管钙化的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 SD大鼠分对照组、模型组和治疗组,给予华法林和维生素K1皮下注射连续2周建立大鼠主动脉血管钙化模型,治疗组于第1周末给予氯沙坦(10 mg/kg)皮下注射,连续1周。HE染色观察血管壁形态学变化、茜素红染色观察钙盐沉积情况;反转录PCR检测骨形成蛋白2(BMP2)和Runt相关转录因子2(RUNX2)mRNA水平,Western blot法检测BMP2、RUNX2蛋白水平,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测平滑肌细胞(SMC)凋亡,免疫荧光组织化学染色观察AT1R的定位。结果华法林和维生素K1可诱导主动脉血管钙化;与模型组相比,氯沙坦治疗组BMP2、RUNX2 mRNA和蛋白质表达显著下调,血管壁SMC凋亡和AT1R表达显著性减少。结论 AT1R阻断剂氯沙坦抑制SMC凋亡、降低AT1R表达,下调RUNX2、BMP2表达抑制血管钙化。

苁归益肾胶囊对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用

目的观察苁归益肾胶囊(肉苁蓉、当归、山茱萸、桂枝、泽泻、丹皮)对糖尿病肾病模型大鼠的治疗作用。方法 120只SD大鼠随机分为6组,苁归益肾胶囊高、中、低剂量组,厄贝沙坦阳性对照组,模型组和正常组,每组20只。采用STZ腹腔注射建立糖尿病肾病大鼠模型。分组造模后灌胃给药4周,检测空腹血糖、24 h尿微蛋白量、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、肾组织血管紧张素Ⅱ受体1(AT1R)、血管紧张素Ⅱ受体结合蛋白(AGTRAP)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达等指标。结果经苁归益肾胶囊治疗4周后,大鼠24 h尿蛋白、空腹血糖及AngⅡ的水平均明显低于模型组(P<0.05)。结论苁归益肾胶囊对糖尿病肾病模型大鼠有一定的治疗作用,其可能机制是抑制了大鼠的炎症反应,与抑制大鼠肾组织中AT1R、AGTRAP、CTGF的表达,降低AngⅡ的水平有关。

川芎嗪对大鼠左室乳头肌收缩力的影响及其机制探讨

目的用心肌受体阻断剂或激动剂,初步探讨川芎嗪(Lig)对左室乳头肌收缩能力影响及其可能机制。方法用生理多导记录仪记录Lig(200 mg.L-1)对心肌受体阻断剂(heparin,valsartan,atenolol)或激动剂(phenylephrine)引起左室乳头肌收缩力(FC)和收缩速度(V)的变化。结果Lig(200 mg.L-1)具有负性肌力作用,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体(AT1R)阻断剂(valsartan)和IP3受体阻断剂(heparin)不影响Lig的作用,而β1-受体特异阻断剂(atenolol)不同程度阻断Lig的上述作用。Lig也可部分阻断α1-受体特异激动剂(phenylephrine)的作用。结论Lig(200 mg.L-1)具有显著的负性肌力作用,其作用机制可能与β1-肾上腺素受体和α1-肾上腺素受体介导途径有关。

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠ACE-AngⅡ-AT1R及ACE2-Ang(1-7)-MASR轴“调控-拮抗”作用的影响

目的:研究复肾功方对腺嘌呤诱导的慢性肾衰竭(CRF)大鼠血管紧张素转化酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)轴与血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)-Mas受体[ACE2-Ang(1-7)-MASR]轴的"调控-拮抗"作用,探讨其延缓CRF进展的作用机制。方法:将65只雄性SD大鼠随机分为正常组10只、造模组55只,正常组常规饲养,造模组进行为期28 d的0.25 g·kg^(-1)d-1腺嘌呤混悬液灌胃。模型建立后,将存活造模大鼠随机分为模型组,贝那普利组(0.01 g·kg^(-1)·d^(-1)),复肾功方低、中、高剂量(4,8,16 g·kg^(-1)·d^(-1))组,正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃,持续28 d。实验结束后,测量各组大鼠尾静脉舒张压(SBP),收缩压(DBP),并收集24 h尿液以测定24 h尿蛋白(24 h U-pro);测定血清中肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织形态;马松(Masson)染色观察肾间质纤维化程度;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾组织匀浆中AngⅡ,Ang(1-7)及血清中胱抑素C(CysC)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织中ACE,ACE2,AT1R,MASR蛋白表达水平;免疫组化标记肾组织中ACE,ACE2蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清SCr,BUN,CysC明显上升(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量明显增加,Ang(1-7)含量明显减少(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量明显升高(P<0.05),ACE2,MASR蛋白表达量明显降低(P<0.05);与模型组、贝那普利组比较,经复肾功方干预治疗后,大鼠血清SCr,BUN,CysC含量明显下降(P<0.05),血清与肾组织中的AngⅡ含量显著减少,Ang(1-7)含量明显增加(P<0.05),肾组织中ACE,AT1R蛋白表达量显著降低,ACE2,MASR蛋白表达量明显升高(P<0.05),其中复肾功方高剂量效果最佳,复肾功方高、中、低剂量的效果呈剂量相关性。结论:复肾功方可改善腺嘌呤所致CRF大鼠肾功能和肾脏的病理学改变,其机制可能与通过抑制ACE-AngⅡ-AT1R轴,同时促进ACE2-Ang(1-7)-MASR轴来延缓CRF的进展有关。