miR-101-5p通过靶向ATAD2抑制肺鳞癌细胞的侵袭

目的 探讨微小RNA-101-5p(miR-101-5p)影响肺鳞癌(lung squamous cell carcinoma,LUSC)细胞增殖、侵袭的分子机制。方法 从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载肺鳞癌TCGA-LUSC的miRNA成熟体表达数据和总RNA的测序数据,鉴定差异表达基因;分析富集于ATAD2的信号通路。培养LUSC细胞,qRT-PCR检测细胞中miR-101-5p和ATAD2的mRNA表达,MTT实验、克隆形成实验和侵袭实验检测miR-101-5p对LUSC细胞增殖和侵袭的影响,流式细胞术检测ATAD2对LUSC细胞周期的影响,Western blotting检测ATAD2蛋白的表达。双荧光素酶实验验证miR-101-5p能否与ATAD2靶向结合,最后通过LUSC细胞共转染oe-ATAD2和miR-101-5p模拟物(mimic),检测细胞增殖、克隆、侵袭能力的变化,进一步探究miR-101-5p能否通过ATAD2调节LUSC细胞的生物学功能。结果 miR-101-5p在LUSC组织及培养LUSC细胞中显著下调。过表达miR-101-5p的LUSC增殖和侵袭能力显著抑制。其下游调控靶基因ATAD2在LUSC中显著上调,且miR-101-5p和ATAD2表达呈负相关,单基因富集分析(GSEA)结果显示ATAD2显著富集于细胞周期信号通路。双荧光素酶实验结果显示,miR-101-5p靶向结合ATAD2,并通过MTT和侵袭实验发现miR-101-5p通过靶向结合ATAD2调控LUSC细胞的增殖和侵袭。结论 miR-101-5p在LUSC中低表达,miR-101-5p通过靶向抑制ATAD2降低LUSC细胞的增殖、侵袭。

Harel-Yoon综合征一家系临床表型及ATAD3A基因变异分析

一例11 d女性新生儿因咳嗽伴口吐白沫、喂养困难就诊。实验室检查结果提示高乳酸血症,心肌损伤标志物升高,炎症指标升高,血串联质谱酰基肉碱检测辛酰基肉碱、癸酰基肉碱偏高。心脏超声及磁共振提示心功能不全、肥厚型心肌病。进一步完善家系全外显子测序,结果显示先证者及其姐姐均为ATAD3A基因c.1492dup(p.T498Nfs*13)和c.1376T>C(p.F459S)复合杂合变异,分别遗传自其父亲和母亲,诊断为Harel-Yoon综合征。先证者及其姐姐出生后均出现代谢性酸中毒、高乳酸血症、喂养困难、心肌损伤标志物升高、心功能不全等临床表现,均在婴儿早期死亡。

溶液中ATAD2溴结构域聚集行为的研究

三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)是一种染色质调节因子.它的异常表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关,因此还被称为致癌转录辅助因子.ATAD2由ATP酶结构域和溴结构域组成.其中,溴结构域可以特异性识别并结合组蛋白末端的乙酰化赖氨酸位点,调控染色体重构和转录,但其功能相关的很多结构特征并未可知.我们首先发现ATAD2溴结构域在溶液中易发生聚集.然后以核磁共振(NMR)和圆二色谱(CD)为主要研究手段,从环境因素和结构因素两方面对ATAD2溴结构域的聚集机理进行了初步探讨,发现该聚集行为伴有结构变化,并可能与功能相关.本研究可能为ATAD2溴结构域抑制剂的研发提供新的思路.

乳腺浸润性导管癌中ATAD2的表达及其临床意义

目的探讨乳腺浸润性导管癌组织中ATAD2、c-MYC和ER的表达及其相互之间的关系。方法釆用免疫组化EnVision两步法检测110例乳腺浸润性导管癌中ATAD2、c-MYC、ER、PR、HER-2、CK5/6、EGFR的表达,以及77例癌旁正常组织中ATAD2的表达。结果 ATAD2在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性率明显高于癌旁组织,二者差异有统计学意义(P<0.05);乳腺浸润性导管癌中ATAD2表达与乳腺癌的组织学分级、基因分型(尤其basal-like亚型)、淋巴结转移有相关性(P<0.05);与c-MYC有明显正相关性;ATAD2表达与ER、患者年龄、肿块大小无明显相关性(P>0.05)。结论 ATAD2在乳腺浸润性导管癌的发生、发展中起重要作用,是预测乳腺浸润性导管癌生物学行为的指标之一,并有望成为乳腺浸润性导管癌尤其basallike亚型治疗的新靶点。

木犀草素通过调控ATAD2蛋白表达抑制结肠癌生长作用的研究

采用MTS法研究木犀草素(LUT)对人结肠癌细胞LS174T增殖的影响,构建人结肠癌LS174T细胞裸小鼠移植瘤模型,观察LUT对结肠癌生长及移植瘤中三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)表达的影响;构建ATAD2siRNA质粒并转染LS174T细胞,检测LUT对肿瘤细胞侵袭的影响,并测定细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)及总NF-κB(t-NF-κB)蛋白的表达。结果表明:LUT对肿瘤细胞增殖及体内生长具有明显的抑制作用,并能降低移植瘤组织中ATAD2蛋白的表达。干扰ATAD2后,LUT抑制肿瘤细胞侵袭的作用明显减弱,同时LUT降低MMP-2、MMP-9和p-NF-κB蛋白表达的作用亦明显减弱或消失。这一研究提示木犀草素通过抑制肿瘤细胞增殖和侵袭,从而抑制结肠癌生长,且其作用依赖于ATAD2蛋白。

TVS／TFS去除率在ATAD污泥稳定评价的应用

在ATAD(Autothermal Thermophilic Aerobic Digestion,自升温高温好氧消化)工艺污泥稳定评价中引入TFS．提出“TVS/ TFS去除率”的概念,得出“TVS/TFS去除率”可以代替“VS(g)去除率”而成为一种新的污泥稳定指标的结论;采用数学微分的方法分析了“TVS/TFS去除率”和“VS(g)去除率”的数据误差问题,进泥TS为60g/L,TVS/TS为56％的运行条件下,前者的最大数据误差仅为3．16％,远小于后者的误差最大值15．45％,即引入TFS解决了“VS(g)去除率”数据波动大的问题;TFS的引入还节约了污泥稳定研究所需的时间和工作量。

ATAD污泥减量稳定化技术研究

自热高温好氧消化(auto-heated thermophilic aerobic digestion,ATAD)技术是近年来备受关注的污泥稳定和减量技术,在好氧环境条件下,微生物通过自身的放热反应,将部分热量用以补充系统的能量消耗,其余热量用于提高反应系统的温度,可以达到高温好氧消化污泥的目的。实验采用自行设计的自热高温好氧消化(ATAD)反应器,以西安北石桥污水净化中心的脱水污泥为源泥,采用间歇式反应模式运行,通过改变运行参数,在不同工况下连续检测污泥的VSS、总磷、总氮、氨氮、泥温、COD等指标,确定了系统最佳运行条件为:进泥质量分数5%～8%、曝气量0.4～0.8 L/min、机械搅拌强度120 r/min。按此条件运行,污泥温度可自动升至48℃、VSS的去除率达到40.2%、DHA下降率为94.33%,达到高效灭菌、污泥趋于稳定的目的,但处理后污泥脱水性能变差。

曝气量对自热式高温好氧消化(ATAD)中试工艺运行的影响

设计了由两个圆罐串联的自热式高温好氧消化中试系统,处理城市污水污泥。采用批式试验,测试氧化还原电位(ORP),探讨曝气量对污泥稳定化处理效果的影响。试验发现,曝气量不能过高或过低,过高起到散热作用,使反应器自升温的温度下降,过低则影响微生物的活性,反应器的温度也低,两种情况都会造成挥发性悬浮固体(VSS)去除率降低。对于VSS浓度为46.6g/L的污泥,曝气量取0.6～1.0m3/h较好,VSS的去除率可达到39.2%,趋于稳定化。通过测试ORP发现微氧环境有利于VSS的降解,提高VSS的去除率。在消化过程中反应器内ORP最低为-360mV,反应器中不仅有好氧菌,还存在厌氧菌和兼性菌。

反应温度对自热式高温好氧消化(ATAD)中试系统运行的影响

城市污水污泥是城市污水处理厂的副产物,需要稳定化处理。本试验设计了由2个圆罐串联的自热式高温好氧消化中试系统处理城市污水污泥。通过批式试验探讨反应器温度对污泥稳定化处理效果的影响,以及影响反应器自升温的因素。试验发现①反应温度对挥发性的有机物的去除有显著影响,反应温度越高,VSS去除率越高。②影响反应温度的主要因素有进泥浓度、消化时间和曝气量。当进泥的VSS浓度为37.2g/L时,ATAD反应器最高温度可到49℃,只需14～17d的消化时间VSS的去除率可达到41.7%,污泥能达到稳定化。

ATAD3基因簇缺失通过调节线粒体DNA和胆固醇代谢对小鼠小脑功能障碍的影响

目的探究ATAD 3基因簇通过线粒体DNA(mtDNA)和胆固醇代谢对小鼠小脑功能障碍的影响。方法选取雄性C57BL/6小鼠为对照组(n=24),Atad 3-/-纯合缺失C57BL/6小鼠为Atad3缺失组(n=24);通过RT-qPCR和蛋白印迹分析2组小鼠ATAD3 mRNA和蛋白质表达水平,免疫荧光染色和共聚焦显微镜检查成纤维细胞的线粒体形态和溶酶体结构,PureLink Genomic DNA Mini Kit分析mtDNA拷贝数;取2组2月龄及5月龄小鼠肌肉组织,采用高效液相色谱方法(HPLC)分析肌肉组织的脂质组成及胆固醇代谢,通过rotarod实验检测小脑功能障碍情况。结果与对照组比较,Atad3缺失组ATAD3 mRNA和蛋白质表达水平降低(P<0.05);与对照组比较,Atad3缺失组纤维细胞中线粒体断裂和部分断裂比例增加,中间和融合比例降低(P<0.05);与对照组比较,Atad3缺失组溶酶体液泡增大,正常溶酶体比例降低,增大溶酶体比例增加(P<0.05);与对照组比较,Atad3缺失组mtDNA拷贝数和每个细胞的mtDNA核苷数降低(P<0.05);与对照组比较,Atad3缺失组的5月龄动物肌肉中总胆固醇酯/游离胆固醇的定量水平降低(P<0.05);不同的旋转速度(8、16、24、32和40 r/min)下,Atad3缺失组较对照组旋转脚架下落的潜伏时间降低(P<0.05)。结论ATAD 3基因缺失可通过遏制胆固醇向线粒体运输和mtDNA复制,导致小鼠小脑功能障碍。

miR-200b-5p靶向ATAD2调控P13K/AKT信号通路参与宫颈癌血管生成的作用机制

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导P13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-PCR检测组织miR-200b-5p、ATAD2表达,Western blot检测组织中ATAD2蛋白表达。细胞转染并分组,qRT-PCR检测各组细胞中miR-200b-5p、ATAD2、PI3K、AKT mRNA表达水平;Western blot检测ATAD2、PI3K、AKT、VEGF蛋白表达水平。体外管腔形成实验比较各组管腔数目。结果宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA低表达,ATAD2 mRNA表达水平及蛋白表达均呈高表达,差异均具有统计学意义(均P<0.05);并伴随高VEGF阳性表达率和MVD。细胞转染实验提示与Blank组和NC组相比,miR-200b-5p mimic组miR-200b-5p表达量显著升高,ATAD2、PI3K、AKT表达显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);miR-200b-5p mimic组和ATAD2siRNA组VEGF、ATAD2、PI3K、AKT蛋白表达水平均显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05);且miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组表达趋势相比miR-200b-5p mimic组更显著,差异均具有统计学意义(均P<0.05);而miR-200b-5p inhibitor组差异与之相反,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。体外管腔形成实验提示管腔数目变化miR-200b-5p inhibitor组显著上升,miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组显著下降,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论促进miR-200b-5p表达,抑制ATAD2基因,抑制PI3K、AKT表达,从而抑制P13K/AKT信号通路,最终实现对人宫颈癌细胞血管生成的抑制。

预热ATAD工艺处理市政污泥工程

在中试的基础上,建立一套有效容积为700 m3的污泥预热高温好氧消化工艺,在进泥含固率为6%,VSS浓度为42.1 g/L,搅拌速率为150～160 r/min,曝气量为2.0～2.2 m3/h的工艺参数条件下,45℃下预热24 h,污泥在消化进行到第10 d时已达到稳定化和无害化的标准,出泥达到A级生物固体的标准,并发现VSS和DHA的降解率与污泥停留时间和反应温度的乘积密切相关,当乘积为500(℃.d)以上时,污泥才能达到稳定化的标准。

研究发现ATAD5-RLC可有效关闭DNA复制循环

复制因子-C(RFC)和RFC样复合物(RLC)介导增殖细胞核抗原(PCNA)的染色质结合,但RFC和RLC如何合作调节PCNA的装载和卸载仍然存在争议。近日,一项跨国研究从分子水平揭示ATAD5-RLC具有有效的PCNA卸载活性。研究的相关结果于2019年6月3日发表在《Nature Communications》期刊上。

ATAD工艺对养猪废液的无害化研究

[目的]研究ATAD工艺对养猪废液的无害化处理。[方法]利用ATAD系统处理养猪场废水中的病原菌,研究进泥浓度、搅拌速度和曝气量对ATAD系统灭菌效果的影响,同时考察了各菌群数随时间、温度的变化情况。[结果]采用ATAD工艺处理养猪废水的最佳工况：进泥浓度VSS为35 g/L,最佳曝气量为25-32 L/h,最佳搅拌量为180-190 r/min。[结论]应用ATAD工艺对养猪废水进行无害化处理,蛔虫卵的去除率可达100%,总菌群数、粪大肠菌群数、粪链球菌群数的去除率可达99.9%以上,无害化效果良好。

Atad双球囊联合缩宫素用于延期妊娠引产51例观察

目的:探讨Atad双球囊联合缩宫素用于延期妊娠引产的效果及安全性。方法:对具有引产指征而无使用双球囊及缩宫素禁忌证的正常单胎头位延期妊娠孕妇51例采用Atad双球囊及催产素引产,观察使用球囊到分娩所需时间、新生儿情况、分娩方式及剖宫产指征、不良反应。结果:用球囊前宫颈Bishop评分4.47分,使用球囊后评分7.33分,平均改善度为2.86分。用球囊联合缩宫素引产成功率66.62%,48 h成功率达94.12%。自放置球囊到胎儿娩出平均时间23.05 h,从取出球囊后到分娩的间隔时间为9.06 h,母婴安全,不良反应少。结论:Atad双球囊联合缩宫素使用简单,安全有效,可控性强,增加自然分娩率,可降低社会因素的剖宫产。

MSC-AS1对宫颈癌细胞生物学行为的影响及其机制

目的探索长链非编码RNA(lncRNA)MSC-AS1在宫颈癌细胞生物行为中的作用和机制。方法qRT-PCR和Western blotting检测MSC-AS1、miR-520d-3p和三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)在宫颈癌组织和SiHa细胞中的表达。SiHa细胞分为si-NC组、si-MSC-AS1组、vector组、pc3.1-MSC-AS1组、miR-NC组、miR-520d-3p组、si-NC+anti-miR-NC组、si-MSC-AS1+anti-miR-NC组、si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3p组。流式细胞术、Transwell实验分别检测细胞凋亡、迁移和侵袭水平的变化。软件预测结合双荧光素酶活性实验分析MSC-AS1、miR-520d-3p、ATAD2之间的靶向调控关系。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织MSC-AS1、ATAD2表达上调,miR-520d-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、miR-520d-3p表达水平在沉默MSC-AS1后si-MSC-AS1组高于si-NC组,过表达MSC-AS1后pc3.1-MSC-AS1组低于vector组;沉默MSC-AS1同时抑制miR-520d-3p后si-NC+anti-miR-NC组<si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3组<si-MSC-AS1+anti-miR-NC组(P<0.05)。MSC-AS1靶向miR-520d-3p,且miR-520d-3p靶向ATAD2,miR-520d-3p组SiHa细胞凋亡率高于miR-NC组(P<0.05)。SiHa细胞ATAD2蛋白的表达、迁移和侵袭细胞数si-MSC-AS1组低于si-NC组,pc3.1-MSC-AS1组高于vector组,miR-520d-3p组低于miR-NC组,si-NC+anti-miR-NC组>si-MSC-AS1+anti-miR-520d-3p组>si-MSC-AS1+anti-miR-NC组(P<0.05)。结论沉默MSC-AS1可能通过miR-520d-3p靶向ATAD2,抑制宫颈癌细胞的生长和转移,并促进凋亡。

ATAD2在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

目的探讨ATAD2在乳腺浸润性导管癌中的表达及检测的临床意义。方法选择2011年12月—2013年12月收治的乳腺浸润性导管癌患者112例作为研究对象。对所有乳腺浸润性导管癌中的ATAD2、PR、ER、CK5/6、EGFR、c-MYC表达情况采用En-Vision免疫检测法进行检测,并检查其中100例患者癌旁正常组织中的ATAD2的表达。比较癌变组织与癌旁正常组织ATAD2等表达的差异性。计数资料采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 ATAD2在病变组织与正常组织中的阳性表达率分别为45.54%、25.00%,两者比较差异有统计学意义(χ2=9.688,P<0.05)。浸润性导管癌中ATAD2的表达与癌变组织学分级、基因分型及淋巴结转移情况均有相关性(χ2=6.779、11.326、6.105,均P<0.05)。结论通过检查乳腺浸润性导管癌患者的ATAD2表达情况,可评价患者的癌症病情,确定病变组织范围,可评估乳腺浸润性导管癌的生物学行为,有利于乳腺浸润性导管癌的早期诊断和定位。

ATAD2在卵巢癌中表达及意义的现状分析

目的研究ATAD2在卵巢癌中的表达及预后评判价值。方法首先,通过Oncomine数据库探索ATAD2在卵巢癌中的表达变化;其次,应用在线数据库及分析工具"the KaplanM eier plotter"(KM plotter)数据库探索ATAD2在卵巢癌中的预后评判价值。结果 Oncomine数据库中共有391个涉及不同种类类型肿瘤的研究结果。其中有75个研究结果关于ATAD2表达差异有统计学意义(P<0.05),70个研究结果显示ATAD2的表达增高,5个研究结果显示ATAD2的表达降低。共有两个研究涉及ATAD2在卵巢癌和正常组织中的表达,共647个样本,显示ATAD2在卵巢癌中的表达较正常组织明显增高。另外,KM plotter数据库的分析显示ATAD2mRNA水平与卵巢癌患者的总生存期以及无进展生存期成负相关。结论 ATAD2 mRNA水平在卵巢癌组织中明显增高,并且是卵巢癌的危险因素,其水平越高预后越差。

ATAD3A在结直肠癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

目的:探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白3A(ATAD3A)在结直肠癌组织中的表达情况,并验证其对结直肠癌细胞RKO和HCT116生长的影响。方法:收集结直肠癌患者配对癌与癌旁组织115例,通过免疫组化方式验证ATAD3A在结直肠癌组织与癌旁的表达差异。采用慢病毒转染和si-RNA干涉的方式构建ATAD3A过表达和敲低肠癌细胞系,并采用MTS,流式检测细胞周期和细胞凋亡等方法验证ATAD3A对结直肠癌细胞系RKO和HCT116的影响。结果:ATAD3A在结直肠癌组织中表达较癌旁组织显著升高(P<0.001)。在结直肠癌细胞系RKO和HCT116中过表达ATAD3A后,细胞增殖能力明显增强,处于S期的细胞比例明显增加,而且细胞凋亡数量明显减少。反之,在上述肠癌细胞中干涉ATAD3A后,细胞增殖能力减弱,细胞大部分停滞于G1期,而且凋亡细胞数量明显增多。结论:ATAD3A在结直肠癌组织中表达升高,且ATAD3A通过促进细胞增殖、细胞周期进程和抑制细胞凋亡等方式促进肠癌细胞的生长。

厨余垃圾的自升温好氧消化处理效果及其影响因素研究

以快速稳定厨余垃圾中有机物为目的,采用自升温好氧消化工艺对厨余垃圾的稳定化效果及其影响因素进行了研究。结果表明:自升温好氧消化体系中,最适厨余垃圾含固率为6%、曝气强度为200 mL air/(h·L)(以含固率为6%计)、搅拌强度为100 r/min。在最适工艺参数条件下,厨余垃圾有机物能在14 d内实现快速稳定,20 d时挥发性有机物(VS)去除率高达66.2%。在稳定化处理过程中有机物代谢规律为:消化前期,高温溶胞作用使得细胞裂解后大量有机物进入上清液;消化中期,嗜热菌以溶解性化学需氧量(SCOD)为底物进行代谢,有机物被迅速分解;消化后期,体系中可利用有机物被基本分解完全,SCOD浓度趋于稳定。