SUMO-1共价修饰ataxin-3

为了探讨ataxin-3的正常生理功能以及脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机理,采用酵母双杂交技术,选择polyQ扩展突变型ataxin-3全长构建诱饵质粒,筛选成人脑cDNA文库,寻找与之相互作用的蛋白质,筛选到互作蛋白smallubiquitin-likemodifier1(SUMO-1).进一步运用免疫共沉淀技术证实,SUMO-1在哺乳动物细胞中共价修饰野生型和polyQ扩展突变型ataxin-3.免疫荧光共定位实验发现,polyQ扩展突变型ataxin-3形成的核内蛋白聚合体与SUMO-1共定位.研究提示,ataxin-3的正常生理功能可能受SUMO-1的调节,SUMO-1可能参与了脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多-约瑟夫病的发病机制.

胃癌中Ataxin-3表达及与临床病理学的意义

目的观察Ataxin-3蛋白在人胃癌组织中的表达及分布,探讨其在胃癌发生、发展过程中的意义及与临床病理学特征的关系。方法采用免疫组化SuperVision两步法检测Ataxin-3在胃癌(265例)、正常胃黏膜(209例)、胃低级别上皮内瘤变(86例)及高级别上皮内瘤变(75例)组织中的表达,并对其表达与临床病理学特征的关系进行统计学分析。结果 Ataxin-3的表达,在胃癌组织中低于正常胃黏膜组织(P<0.001);胃癌组与低级别上皮内瘤变组中的表达有差异(P﹤0.001),而胃癌组与高级别上皮内瘤变组比较表达无差异(P>0.05);Ataxin-3表达与胃癌的Lauren组织学分型、肿瘤分化、远处转移及p53突变蛋白的表达存在相关性(P均<0.05)。结论 Ataxin-3蛋白很可能在胃癌的发生、发展过程中起重要意义。

酪蛋白激酶2结合并磷酸化ataxin-3(英文)

目的马查多-约瑟夫病/脊髓小脑共济失调3型,是由MJD1基因产物ataxin-3的C-末端的多聚谷氨酰胺发生重复扩展突变而引起的一种常染色体显性遗传的神经退行性疾病,目前它的发病机制还不清楚。很多研究表明磷酸化修饰作用在很多神经退行性疾病的发病过程中起到重要作用,然而已知可以磷酸化ataxin-3的激酶仍然很少。本研究的目的是探讨酪蛋白激酶2(Casein kinase 2,CK2)对于ataxin-3的磷酸化作用。方法通过GST pull-down和免疫共沉淀技术鉴定ataxin-3和CK2的相互作用。通过体外磷酸化技术检测CK2对ataxin-3的磷酸化。结果(1)正常和扩展突变型ataxin-3在体外与CK2α、β亚单位均发生相互作用;(2)在293细胞中正常和扩展突变型ataxin-3只和CK2β亚单位相互作用,而与α亚单位没有结合;(3)正常和扩展突变型ataxin-3都可以被CK2磷酸化。结论Ataxin-3是蛋白激酶CK2的底物。

老年眼睑基底细胞癌患者术后组织Survivin、Ataxin-3和PTEN表达及意义

目的检测老年眼睑基底细胞癌患者术后组织中Survivin、Ataxin-3和PTEN的表达,探讨三者在不同临床特征中的意义。方法110例老年眼睑基底细胞癌患者术后组织及临床资料作为观察组,老年基底细胞乳头状瘤患者术后组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测两组中Survivin、Ataxin-3和PTEN的表达。结果观察组Survivin表达阳性率明显高于对照组(P<0.05),观察组Ataxin-3和PTEN表达的阳性率明显低于对照组(P<0.05),观察组Survivin、Ataxin-3和PTEN的表达与肿瘤的最大直径、Ki67增殖指数和临床分期密切相关。观察组Survivin和Ataxin-3、Survivin和PTEN的表达具有负相关性,Ataxin-3和PTEN的表达具有正相关性。结论老年眼睑基底细胞癌患者术后组织Survivin、Ataxin-3和PTEN异常表达且具有协同作用,共同促进肿瘤的发生和进展。

Ataxin-3、nm23和Kiss-1在胃腺癌中的表达及意义

目的:检测胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,探讨三者的关系及临床意义。方法:选择我院收治的104例胃腺癌术后存档的蜡块及患者的临床资料作为观察组,选择切端为正常胃黏膜的组织70例作为对照组,应用免疫组化方法检测组织中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达,观察三者在不同临床特征中的表达差别。结果:观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1表达的阳性率明显低于对照组,观察组中Ataxin-3、nm23和Kiss-1的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、脉管浸润及是否有癌结节密切相关。线性相关分析显示观察组中Ataxin-3和nm23、Ataxin-3和Kiss-1的表达具有正相关性。结论:胃腺癌中Ataxin-3、nm23和Kiss-1低表达,Ataxin-3对抑制转移蛋白nm23和Kiss-1具有一定调节作用。

脊髓小脑型共济失调Ⅲ型ataxin-3相互作用蛋白的筛选

目的:利用酵母双杂交系统3筛选与ataxin-3相互作用的蛋白质,探讨ataxin-3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型(SCA3/M JD)的发病机制。方法:首先将正常和突变型ataxin-3的完整阅读框亚克隆至pGBKT7载体(ataxin-3-bait),然后以ataxin-3-bait为靶蛋白,筛选成人脑cDNA文库。结果:在6.5×106个转化子中共获得5个阳性克隆,测序表明,分离到Rho GDP解离抑制因子α、苏素1、阿米洛利敏感性神经元阳离子通道2和2个未知蛋白新序列与ataxin-3相互作用。结论:苏素1与ataxin-3可能存在相互作用,提示苏素化可能参与了ataxin-3蛋白的翻译后修饰和SCA3/M JD的发病过程。

Ataxin-3(MJDtr-Q84)对PINK1(CG4523)突变帕金森转基因果蝇的保护作用

目的探讨突变型ataxin-3(MJDtr-Q84)对PINK1(CG4523)突变帕金森转基因果蝇表型的影响及其机制。方法选用MHC-GAL4肌肉启动子,运用遗传学方法,构建正常组(W1118/y; MHCGAL4/+)、PD疾病模型组(PINK1^(B9)/y; MHC-GAL4/+)、ataxin-3干预组(PINK1^(B9)/y; MJDtr-Q84/MHCGAL4),记录各组果蝇表型特征。通过电镜观察线粒体形态结构,ATP试剂盒检测各组ATP含量,应用实时荧光定量PCR技术检测ND42转录水平,蛋白免疫印迹western blot检测NDUFS3蛋白表达量。结果与正常野生型果蝇比较,PD疾病模型组果蝇翅膀发育异常,飞行能力差,线粒体形态结构改变,ATP产量降低,ND42 mRNA和NDUFS3蛋白表达量均下调。利用ataxin-3(MJDtr-Q84)干预PD组果蝇后,明显保护其翅膀形态及飞行能力,并恢复线粒体线粒体形态及功能。结论 Ataxin-3(MJDtr-Q84)对PINK1(CG4523)突变PD转基因果蝇模型具有保护作用,该保护作用与线粒体功能有关,为帕金森病的治疗提供实验基础和新的研究方向。

多聚谷氨酰胺长度依赖性的突变型ataxin-3片段募集野生型ataxin-3(英文)

目的脊髓小脑共济失调III型(spinocerebellar ataxia type 3, SCA3)/马查多-约瑟夫病(Machado-Joseph disease,MJD)是MJD-1基因中编码谷氨酰胺的密码子CAG的数量非正常扩增引起的一种多聚谷氨酰胺疾病,也是神经退行性疾病的一种。该病的主要病理特征为突变的ataxin-3在患者易感脑区的神经元胞核内聚集形成核内包涵体,但其致病机制和突变蛋白在核内聚集的机制仍不清楚。本研究是为了探讨突变型ataxin-3的病理学特性以及其聚集特性。方法将野生型ataxin-3 及不同多聚谷氨酰胺长度的突变型ataxin-3片段共转染到人胚胎肾细胞(HEK293 cells)和鼠成神经母细胞(neuroblastoma cells)中,用荧光显微镜观察。共转染 48 小时后,收集在细胞中表达的蛋白,用免疫印迹、免疫共沉淀和GST-pull down实验检测蛋白的表达及结合。结果用荧光显微镜观察到突变型ataxin-3片段在细胞内形成聚集,其聚集体上募集有野生型全长ataxin-3;突变型和野生型ataxin-3在细胞内聚集体上有共定位现象。野生型ataxin-3片段并不形成聚集体,与野生型全长ataxin-3在细胞内无聚集现象发生。免疫共沉淀技术及GST-pulldown 实验显示,突变型 ataxin-3 片段与野生型全长 ataxin-3 存在相互作用,且该作用强度呈现出多聚谷氨酰胺长度依赖性。结论结果提示,野生型ataxin-3通过与突变型ataxin-3片段的相互作用沉积于突变片段形成的聚集体中,这可能影响野生型ataxin-3的正常功能,进而可能对脊髓小脑共济失调III型(SCA3)/马查多-约瑟夫病(MJD)的发病产生影响。

Ataxin-3和MMP-11在伴肝转移结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Ataxin-3和基质金属蛋白酶-11(MMP-11)在伴肝转移的结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集伴肝转移的结直肠癌组织35例和不伴肝转移45例为肝转移组和无肝转移组。采用免疫组化法和实时荧光定量PCR(QPCR)检测结直肠癌组织中Ataxin-3、MMP-11的蛋白和mRNA水平,并分析两者表达与结直肠癌临床病理特征(年龄、性别、肿瘤大小、浆膜浸润、分化程度、淋巴结转移、Dukes分期和肝转移)的关系。肝转移组结直肠癌组织中Ataxin-3、MMP-11 mRNA水平的关系采用Pearson相关分析。结果肝转移组和无肝转移组中Ataxin-3、MMP-11阳性表达率分别为31.4%(11/35)、62.2%(28/45)和82.9%(29/35)、53.3%(24/45),差异均有统计学意义(P<0.05)。肝转移组结直肠癌组织中Ataxin-3 mRNA水平为0.34±0.13,低于无肝转移组和癌旁组织(P<0.05);肝转移组结直肠癌组织中的MMP-11 mRNA水平为10.86±1.25,高于无肝转移组和癌旁组织(P<0.05)。Pearson相关分析显示,肝转移组结直肠癌组织中Ataxin-3 mRNA水平与MMP-11 mRNA水平呈负相关(r=-0.917,P<0.05)。Ataxin-3表达与年龄、性别、浆膜浸润、淋巴结转移无关(P>0.05),而与肿瘤大小、分化程度、Dukes分期和肝转移有关(P<0.05);MMP-11表达与年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移和分化程度无关(P>0.05),而与浆膜浸润、Dukes分期和肝转移有关(P<0.05)。结论 Ataxin-3下调和MMP-11上调与结直肠癌肝转移密切相关,其可能为评估结直肠癌发生、侵袭、转移和预后的指标。

Ataxin-3蛋白在胃癌组织中的表达及病理学特征研究

目的:研究Ataxin-3蛋白在胃癌的表达,探讨在胃癌组织病理学特征。方法:将患者标本固定、石蜡包埋、切片、免疫组化染色,通过半定量计分法判断结果,镜检采用双盲原则,由两位不同医师进行评分。结果:Ataxin-3在正常胃黏膜中主要呈中、高度表达,总阳性率为100%;在胃癌组织及上皮内瘤变主要呈低强度表达,少数呈中等强度表达,和正常胃黏膜组织相比总阳性率显著降低(P<0.01);Ataxin-3表达与患者年龄、性别、肿瘤部位及大小及临床分期无关,与Lauren组织学分型有关,与混合型及弥漫型癌患者相比,肠型胃癌患者低、中度表达显著提高(P<0.05)。结论:Ataxin-3蛋白可能与胃癌分化增殖有关,在胃癌的发生发展过程中起重要意义。

Ataxin-3与相关疾病的分子机制的研究进展

Ataxin-3(AT3,ATXN3)是一种重要的去泛素化酶,正常情况下,它参与基因转录、蛋白代谢、磷酸化以及自身泛素化水平的调节。然而突变的Ataxin-3的表达可致转录失调,导致细胞毒性和神经退行性变疾病,如脊髓小脑共济失调3(SCA3)。AT3的异常不仅能导致神经性病变,而且据最近世界各地的研究表明,AT3的失调可能涉及一些人类癌症或者癌症前期病变(如胃癌、乳腺癌、肺癌、睾丸癌、肝硬化等)的发病机制。虽然目前国内关于ATXN3的研究较少,但在国外已经有大量研究报道,该综述主要总结它的功能与疾病的关系。

ataxin-3相互作用蛋白的筛选及鉴定(英文)

目的筛选ataxin3的相互作用蛋白并进行互作结构域分析,探讨ataxin3的功能和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多约瑟夫病的发病机理。方法应用酵母双杂交系统3,从成人脑cDNA文库中筛选和鉴定突变型ataxin3的互作蛋白,构建ataxin3蛋白羧基端Bait质粒,进行互作结构域分析。应用激光共聚焦显微镜观察ataxin3与所筛到的互作蛋白在哺乳动物细胞中的共定位情况。结果分离获得5个新的ataxin3互作蛋白,视紫红质二磷酸鸟苷解离抑制因子α、苏素1、氨氯吡嗪脒敏感性神经元阳离子通道2和2个未知新序列。结构域分析显示除1个未知蛋白与ataxin3蛋白羧基端互作外,其余4个均与氨基端互作。在SHSY5Y细胞的细胞核内,野生型ataxin3与苏素1共定位,突变型ataxin3所形成的核内蛋白聚合体也与苏素1共定位。结论发现1个未知蛋白可能与ataxin3蛋白羧基端互作,苏素1可能与ataxin3蛋白氨基端互作,苏素化可能参与了ataxin3蛋白的翻译后修饰和脊髓小脑型共济失调Ⅲ型/马查多约瑟夫病的发病过程。

自吞噬途径参与降解多聚谷氨酰胺扩展突变型ataxin-3

目的探讨自吞噬途径（autophagy）在脊髓小脑型共济失调3型或称马查多-约瑟夫病（spinocerebellar ataxia3／Machado—Joseph disease，SCA3／MJD）发病机制中的作用。方法将CAG拷贝数68次的ataxin-3真核表达载体pcDNA3．1-Myc-His（B）-MJD68Q在HEK293细胞中表达，采用特异性自吞噬途径抑制剂及激活剂处理细胞后，检测细胞中ataxin-3-68Q的表达水平。结果抑制自吞噬途径水平，细胞内ataxin-3—68Q表达明显增加，细胞活性降低；反之亦然。结论自吞噬途径参与降解细胞内多聚谷氨酰胺扩展突变型ataxin-3，减少胞内聚合物的形成，从而减轻细胞毒性。因此，提高机体自吞噬途径水平有望作为治疗SCA3／MJD的新方法。

Ataxin-3融合蛋白表达、纯化及抗血清的制备

目的:表达GST-ataxin-3-N融合蛋白并制备GST-ataxin-3特异性抗体,为深入研究其功能及其在SCA3发病机制中的作用提供重要的技术和材料保障。方法:将人ataxin-3氨基端基因克隆入原核表达载体pGEX-4T-2,在大肠杆菌(E.coli)BL21中表达,用Glutathione sepharose 4B凝胶亲和柱纯化目的蛋白。利用纯化的GST-ataxin-3-N蛋白制备多克隆抗体。结果:成功构建了原核表达载体,得到高表达量的融合蛋白,经亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-ataxin-3-N融合蛋白。以融合蛋白免疫新西兰兔得到Ataxin-3-N多克隆抗体,Western Blotting及免疫荧光均证实该抗体能够识别Ataxin-3-myc蛋白,具有较高特异性。结论:利用原核表达人GST-ataxin-3-N融合蛋白制备的Ataxin-3多克隆抗体具有较好的特异性,可用于该蛋白的相关研究。

Ataxin-3相互作用蛋白A3IP的克隆与细胞及组织定位的初步研究

目的根据前期筛选到的与ataxin-3蛋白羧基端相互作用的A3IP部分序列，进行A3伊基因的克隆，并探讨其细胞及组织定位情况。方法应用生物信息学及Northern印迹方法克隆A3IP基因并检测其转录本在人体组织和人脑不同部位的表达情况；应用Western印迹及免疫荧光方法检测A3IP蛋白在细胞中的表达及定位情况；应用免疫组织化学染色方法检测A3IP蛋白在人体各组织和人脑不同部位的表达及定位情况。结果对A3IP基因序列全长阅读框进行了cDNA克隆及序列拼接；检测了A3IP的3个转录本（1kb、1．35kb、6kb）在人体不同组织和人脑不同部位的表达谱；获得了A3IP-pEGFP在COS-7细胞和人大脑皮质、小脑、肌肉、周围神经、肝脏、肾脏的表达及定位情况。结论所克隆的AMP基因编码ataxin-3的一种相互作用蛋白A3IP，其3个剪切本在人体多种组织和人脑不同部位广泛表达，是一种细胞胞浆蛋白。

结直肠癌组织ANP32A、Ataxin-3、FHL1的表达及其与肝转移的关系研究

目的:探讨结直肠癌组织中酸性核磷蛋白32A(ANP32A)、Ataxin-3及4个半LIM结构域蛋白1(FHL1)的表达及其与肝转移的关系。方法:对120例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中ANP32A、Ataxin-3及FHL1蛋白水平进行检测,分析其阳性表达率。其中44例发生肝转移作为肝转移组,76例无肝转移作为无肝转移组,比较两组癌组织中ANP32A、Ataxin-3及FHL1蛋白阳性表达率,分析结直肠癌肝转移的影响因素,分析ANP32A、Ataxin-3、FHL1蛋白之间的相关性。结果:结直肠癌患者癌组织中ANP32A蛋白阳性表达率高于癌旁组织,Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05)。经单因素分析显示肝转移组患者癌组织中ANP32A蛋白阳性表达率显著高于无肝转移组,Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达率显著低于无肝转移组(P<0.05),肝转移组患者原发癌中低分化、原发癌浸润深度T3~T4、原发癌有淋巴结转移者构成比显著高于无肝转移组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,ANP32A蛋白阳性表达、原发癌中低分化、原发癌浸润深度T3~T4、原发癌有淋巴结转移是结直肠癌肝转移的危险因素(P<0.05),Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达是结直肠癌肝转移的保护因素(P<0.05)。Spearman相关分析显示,结直肠癌患者癌组织中ANP32A阳性表达率与Ataxin-3、FHL1阳性表达率呈负相关(P<0.05),Ataxin-3蛋白阳性表达率与FHL1蛋白阳性表达率呈正相关(P<0.05)。结论:ANP32A蛋白高表达,Ataxin-3、FHL1蛋白低表达与结直肠癌发生及肝转移有密切关系,且以上指标间具有一定相关性。结直肠癌肝转移受多种因素影响,临床诊治中可根据相关因素为患者制定针对性治疗方案。

ataxin-3在卵巢浆液性肿瘤中的表达及其临床意义

目的检测ataxin-3在卵巢浆液性肿瘤中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测ataxin-3在各组卵巢浆液性肿瘤中表达情况。结果ataxin-3在卵巢低级别浆液性囊腺癌中表达水平明显高于卵巢浆液性囊腺瘤、交界性浆液性囊腺瘤、高级别浆液性囊腺癌中的表达水平,但后三者之间无明显差异(P>0.05),ataxin-3表达与卵巢浆液性囊腺癌的分化程度呈负相关,与其它临床病理因素均不存在相关性(P>0.05)。结论ataxin-3可能参与卵巢低级别浆液性囊腺癌的发生机制,可能成为其早期诊断指标和治疗靶点。

伊立替康(Irinotecan)对SCA3细胞模型的影响

伊立替康(Irinotecan,CPT-11)是一种治疗癌症的化疗药物,主要代谢产物为7-乙基-10羟基喜树碱(7-Ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN38).课题组实验筛选结果表明伊立替康对ataxin-3核质转运有潜在影响.通过免疫荧光、微孔过滤分析以及PretoBlue细胞活性检测等方法,探讨伊立替康对ataxin-3质核分离、突变ataxin-3形成的聚集体以及spinocerebellar ataxia type 3(SCA3)细胞活性的影响.结果表明伊立替康在10μM处理浓度时能够减少ataxin-3进入细胞核,但对蛋白聚集体没有影响;伊立替康在0.001μM或100μM处理浓度时,对SCA3细胞具有细胞毒性作用.本研究阐释了伊立替康对SCA3细胞模型的影响,揭示了旧药新靶点,为其他神经退行性疾病的致病机理和治疗药物研发提供新依据.

过量表达马铃薯ataxin-3可增加泛素积累并反向调控本氏烟生长

动物细胞中ataxin-3与泛素特异结合,通过去泛素化阻止蛋白质水解;基因组注释预测ataxin-3同源物存在于植物中,但到目前为止尚未见植物ataxin-3基因功能的研究报道;本研究克隆了马铃薯（Solanum tuberosum） ataxin-3编码基因StAX c DNA,转化StAX于本氏烟（Nicotiana benthamiana）基因组,筛选获得StAX过量表达株系stax-9;测定结果显示,stax-9叶片ataxin-3、UBI 3和CDC48 mRNA积累显著增加,stax-9叶片ataxin-3、寡聚泛素和总蛋白积累分别比WT株系增加了138%、81%和38%,而赤霉素含量仅是WT的1/6;研究结果表明,ataxin-3本氏烟体内过量表达,显著增强了泛素转录和翻译,增加了总蛋白积累,减少了赤霉素积累,导致半矮化表型;结论认为植物ataxin-3通过正向调控泛素和蛋白积累,反向调控生长;本研究为植物ataxin-3功能的进一步理解提供依据。

Hsp22对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用研究

为了探讨Hsp22在SCA3/MJD发病机制中的作用.选用GMR-GAL4和elav-GAL4驱动子,利用经典的GAL4-UAS系统,将含有78个CAG重复扩增的ataxin-3蛋白片段(MJDtr-Q78)分别在果蝇眼睛和神经系统选择性表达,构建GMR-GAL4/UAS和elav-GAL4/UAS系统SCA3/MJD转基因果蝇模型,然后利用遗传学方法和热休克反应使Hsp22在SCA3/MJD转基因果蝇眼睛和神经系统以不同水平过表达.结果表明,Hsp22过表达显著抑制了MJDtr-Q78蛋白的神经毒性,果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性明显缓解,果蝇存活能力也显著提高.Hsp22对SCA3/MJD具有保护作用,增强Hsp22表达对SCA3/MJD可能是一种潜在的治疗方法.