应用FISH技术检测慢性淋巴细胞白血病ATM和RB1基因缺失

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)中11q22.3(ATM基因)和13q14(RB1基因)的缺失情况以及荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization,FISH)技术检测慢性淋巴细胞白血病(CLL)染色体异常的价值,了解CLL的分子遗传学特性。方法:分别用ATM和RB1探针,运用荧光原位杂交(FISH)技术对10例CLL确诊患者的11q22.3和13q14染色体进行检测,并和常规细胞遗传学(Conventional cytogenetics,CC)检测方法,即G显带法进行比较。结果:10例CLL患者常规细胞遗传学检出2例,其中t(5,9),t(10,12)和+12各1例;而FISH方法检出7例至少有一种分子遗传学异常,del(11q22.3)4例,纯合缺失2例,del(13q14)7例,纯合缺失2例。10例患者中4例同时有del(11q22.3)和del(13q14)这2种染色体异常。结论:FISH是一种在分析CLL染色体异常方面较为快速、准确和敏感的有效技术,可提高染色体异常检出率,为CLL提供较为准确的分子细胞遗传学信息,指导临床与预后分析。

ATM缺失介导的U937细胞凋亡敏感性与异常细胞周期蛋白依赖性激酶活性的关系

目的 探讨共济失调性毛细血管扩张症突变基因 (ATM)定向灭活增强细胞凋亡敏感性的关键蛋白分子。方法 以U937的变异细胞系U937 ASPI3K(ATM阴性 )和U937 pEOSV2 (+) (野生型ATM阳性 )作为细胞模型。用核小体免疫酶联检测试剂盒定量分析细胞凋亡。用Westernblotting分析总p34cdc2、16 1位苏氨酸 (Thr16 1)磷酸化的p34cdc2和 14位苏氨酸 (Thr14 )、15位酪氨酸 (Tyr15 )磷酸化的p34cdc2 ,并检测细胞核内cdc2 5A、cdc2 5B、cdc2 5C的蛋白丰度。用RT PCR方法分析cdc2 5A、cdc2 5B、cdc2 5C转录水平的表达。结果 蛋白合成抑制剂不能阻断U937 ASPI3K因ATM缺失诱导的细胞凋亡敏感性增强效应。而蛋白丝氨酸 苏氨酸磷酸酯酶抑制剂以及细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK)抑制剂可阻断该凋亡敏感性增强效应。U937 pZEOSV2 (+)细胞经放射线照射后 ,p34cdc2Thr14和Tyr15被磷酸化而处于灭活状态 ,该磷酸化修饰与U937 pZEOSV2 (+)胞核内三种酸酯酶cdc2 5A、cdc2 5B、cdc2 5C蛋白水平于受照后呈现显著的反应性降低有关。在U937 ASPI3K细胞 ,ATM缺失抑制受照后细胞cdc2 5A、cdc2 5B、cdc2 5C蛋白反应性降低 ,p34cdc2激酶Thr14和Tyr15低磷酸化而处于激活状态。这种抑制效应发生在转录后水平上。

间期荧光原位杂交技术检测慢性淋巴细胞白血病ATM基因缺失

目的探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)中ATM基因缺失及其与其他染色体异常及临床分期的相关性。方法运用间期荧光原位杂交技术(I-FISH)和Spectrum OrangeTM标记的位于11q22.3的序列特异性DNA探针ATM对50例初诊CLL患者的染色体标本进行了ATM缺失的检测,同时检测del(13q14)、del(17p13.1)和免疫球蛋白重链基因重排。临床分期按照Binet分期方法。结果50例患者中有6例(12%)ATM缺失;其中4例伴有其它染色体异常。20例Binet A期患者中,3例(15%)存在异常;10例Binet B期患者中,2例(20%)存在异常;13例Binet C期患者中,1例(7.7%)存在异常。ATM缺失在Binet A、B及C期中无统计学差异(P>0.05)。结论I-FISH与常规染色体分析技术相比是一种快速、准确及敏感的方法,对我国CLL患者的预后预测价值有待进一步的深入研究。