开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及ATP/AMP的影响

目的:探讨开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆及ATP/AMP、GABA、iNOS含量的影响。方法:采用微血栓栓塞法制备多发梗死性痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫和开场实验评价学习记忆功能及运动行为;HE染色法评价海马CA1区病理形态学改变;HPLC法测定脑组织ATP和AMP的含量;ELISA试剂盒检测脑组织γ-氨基丁酸含量和外周血清iNOS含量。结果:与模型组比较,开心散可以显著缩短模型大鼠逃避潜伏期、增加穿越平台次数、增加开场实验大鼠站立次数、延长运动时间、缩短静止时间,改善海马CA1区神经细胞损伤,显著提高脑组织ATP/AMP、降低脑组织GABA含量和血清iNOS含量,具有显著的统计学意义(P <0.05)。结论:开心散具有改善多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及运动行为异常的作用,其机制与降低脑组织GABA和血清iNOS含量,提高脑组织ATP/AMP,改善脑组织能量供应有关。

EI注射液对鹅膏蕈氨酸基底核微量注射痴呆模型大鼠ATP/AMP及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:考查EI注射液对双侧Meynert基底注射鹅膏蕈氨酸(Ibotenic acid,IBO)拟痴呆模型大鼠学习记忆功能及脑能量影响及机制。方法:采用双侧Meynert基底注射IBO建立拟痴呆模型大鼠,EI注射液干预8周,Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力,刚果红染色观察大鼠海马CA1区及皮质区Aβ斑块沉积的变化;HPLC测定各组动物脑组织ATP、ADP、AMP含量;ELISA试剂盒检测脑组织胰岛素含量;Western bolt法检测脑组织PI3K/AKT信号通路关键蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长、进入平台次数、穿越平台象限时间及百分比明显减少(P <0.05);海马和皮层均出现明显红染的Aβ斑块沉积;脑组织ATP/AMP比率和胰岛素含量明显降低(P <0.05);脑组织PI3K和AKT蛋白呈低表达(P> 0.05)。经EI注射液干预后,该模型大鼠逃避潜伏期明显缩短、进入平台次数、穿越平台象限时间明显增加(P <0.05);海马和皮层红染减轻;脑组织ATP/AMP比率和胰岛素含量明显增加(P <0.05)。结论:EI注射液能够改善IBO拟痴呆模型大鼠学习记忆功能,该作用与改善脑能量有关。

高效液相色谱法测定骨骼肌ATP、ADP、AMP、NAD^+、NADH含量

采用高效液相色谱法测定骨骼肌腺嘌呤核苷酸和辅酶Ⅰ含量。高压液相系 统包括：惠普公司ＺＯＢＡＸ－Ｃ１８反相柱５ｍｍ×１２ｃｍ，５９０ＵＶ检测器。流动相为２２０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液，内含１０％甲醇，用四丁基氢氧化胺ＴＢＡＨ调ｐＨ至６５。等比洗脱，流速为０８ｍｌ／ｍｉｎ。检测波长为２５４ｎｍ。所有样品和标准品在进样前均用０４５μｍ孔径的虑膜过滤后进样５μｌ作色谱分析。结果表明：ＨＰＬＣ可以同时测定ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＨ，分离效率高，操作简便，快速每个样品仅需１５分钟，而且，重现性好，定性可靠，定量准确。

用反相高效液相色谱法测定小鼠心肌、骨骼肌中ATP、ADP和AMP的含量

采用反相高效液相色谱法同时测定小鼠心肌、骨骼肌组织中ATP(三磷酸腺苷 )、ADP(二磷酸腺苷 )、AMP(一磷酸腺苷 )的含量。以150mmol/L磷酸二氢钾缓冲液 (pH=6.25)为流动相 ,采用BDShypersilC18 不锈钢色谱柱 ,紫外检测波长为254nm ,线性范围为1～200mg/L。ATP、ADP和AMP的平均加标回收率均在90 %以上 ,检出限分别为10ng、10ng、15ng。该法灵敏、准确 ,试剂费用低。

不同死亡方式大鼠心肌组织中ATP、ADP和AMP含量比较

目的比较不同死亡方式对大鼠心肌组织能量物质变化的影响,为判断不同死亡方式及死亡时间提供依据。方法180只大鼠随机分为三组,以不同方式(失血、窒息、断颈)处死,高效液相色谱法检测死后0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、18和24h大鼠心肌组织中的ATP、ADP、AMP含量。结果三组不同死亡方式大鼠心肌组织的ATP、ADP、AMP的含量在大部分时间点做组间比较有明显差异(P<0.05);每组不同死亡方式的大鼠心肌组织中ATP、AMP的含量随时间的变化有明显的差异(P<0.01),而各组中的ADP在死亡一定时间后无明显差异。结论不同死亡方式的大鼠心肌组织中能量物质死后变化可以用作对死亡方式及某种方式不同死亡时间做出判断的依据。

HPLC法测定心衰大鼠心肌中ATP、ADP与AMP的含量

目的：建立大鼠心肌组织ATP、ADP、AMP 的含量测定方法,考察心衰大鼠的ATP、ADP、AMP定量变化。方法：色谱柱为Thermo Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm,5μm）；流动相为6.8 g·L-1磷酸二氢钾和1.164 g·L-1氢氧化钠溶液；检测波长为254 nm。 SD大鼠随机分为对照组和试验组,分别腹腔注射生理盐水和多柔比星,给药6周后取心脏组织制备匀浆,用HPLC法测定大鼠心脏组织中ATP、ADP和AMP的含量。结果：ATP、ADP和AMP在0.625~40μg·ml-1呈良好的线性（ r〉0.99）,最低检测限和最低定量限为0.625μg·ml-1,精密度RSD均〈9.50%,回收率为93.20%~108.0%,稳定性RSD 为3.0%~14.0%。多柔比星组ATP的含量均明显低于生理盐水组,而AMP和ADP含量则明显高于生理盐水组（P〈0.01）。结论：HPLC法测定心肌组织中ATP、ADP和AMP含量满足生物样本的测定要求,可用于考察蒽环类抗肿瘤药物对心衰大鼠的影响。

反相离子对色谱法快速测定猪肉中ATP和ADP及AMP的含量

采用反相离子对色谱法建立了一种快速测定猪肉中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、单磷酸腺苷（AMP）含量的检测方法。采用Waters BEH C18柱作为色谱柱,以20 mmol/L磷酸钾缓冲溶液（含5 mmol/L四丁基溴化铵,pH=6.5）和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用光二极管阵列检测器进行检测,检测波长为259 nm。结果表明：HPLC可以实现猪肉样品中ATP、ADP、AMP 3种物质的同步检测,平均回收率在80.89%～97.82%,相对标准偏差小于2.81%。

针刺对脑梗死鼠脑心组织及血液ATP、ADP、AMP及能荷的影响

犤目的犦从能量代谢角度探讨脑梗死对心脏的影响及针刺的干预效应。犤方法犦以一侧大脑中动脉阻断大鼠(MCAo)为脑梗死实验模型,采用放免分析法检测、4个时相大鼠脑心组织及血液中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量并计算能荷水平。犤结果犦针刺组与模型组比较,大鼠心脑组织及血液中ATP、ADP、能荷显著上升,AMP显著下降(P<0.05或P<0.01),接近正常组。犤结论犦脑梗死发生后不仅脑组织能量代谢障碍,而且心肌组织能量代谢也明显障碍,针刺对脑梗死导致的脑心组织及血液能量代谢障碍具有明显的改善作用。

高效液相色谱法测定龙眼果实中ATP、ADP、AMP的含量

摸索了一种基于高效液相色谱仪快速测定龙眼果实腺苷三磷酸（ATP）、腺苷二磷酸（ADP）、腺苷一磷酸（AMP）含量的方法。该方法利用磷酸盐缓冲液（pH7.0）作为单一流动相,流速设定为1 mL/min,停止时间13 min,检测波长254 nm,无参比波长。ATP、ADP和AMP浓度在5~50 mg/L范围内与相应的色谱峰面积呈完美的直线关系（决定系数R2均为1.000）,回收率95.2%~97.5%,保留时间分别为8.651、9.844和11.457 min。该方法测定结果表明,果实腺苷含量水平分别为30.0、6.5和2.0μg/g,能荷值为0.86。

IP-RPHPLC法检测电针后肥胖大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量

目的建立一种离子对反相高效液相色谱（IP-RPHPLC）法并将其用于检测电针对肥胖大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量的影响。方法应用岛津SIL-20AT高效液相色谱系统,Megres-C18（5μm,250mm×4.6mm）耐水性色谱柱,对大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP进行分离,流动相为0.18mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（含5%甲醇且pH=6.25）,检测波长为254nm,流速为0.8mL/min,进样体积为20μL,柱温为25℃。结果 ATP在1.1~212.2μg/mL（r=0.999 9）,ADP在0.9~180.0μg/mL（r=0.999 9）及AMP在0.9~181.8μg/mL（r=0.999 7）范围内线性关系良好。ATP、ADP和AMP平均回收率分别为96.4%、98.3%、100.8%;RSD分别为2.50%、2.88%、4.14%;日内和日间精密度RSD分别为0.06%~0.40%和0.06%~0.69%;准确度均在99.0%~108.6%之间;ATP、ADP和AMP检测限为0.11、0.09、0.045μg/mL。结论建立的高效液相色谱法用于检测大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量简便、快速并且准确可靠,为针刺干预治疗后组织中小分子生物活性物质浓度的检测等研究工作奠定了基础。

反相高效液相色谱法测定小鼠心肌中ATP、ADP和AMP含量及分析

建立同时测定小鼠心肌组织中ATP(三磷酸腺苷)、ADP(二磷酸腺苷)和AMP(一磷酸腺苷)含量的高效液相色谱方法。采用反相高效液相色谱模式,使用Sepax Bio-C18(250 mm×4.6 mm ID,5μm,200 )色谱柱,以60 mmoL.L-1磷酸二氢钾、60 mmoL.L-1磷酸氢二钾组成的缓冲液(pH=6.68)为流动相等比洗脱,流速:0.6 mL.min-1;紫外检测波长为259 nm,带宽为30 nm。三种目标组分在10 min内实现基线分离,平均加标回收率均在99%以上,线性范围为1～200 mg.L-1,检出限分别为20、20、25 ng。该法简便、准确,易于移植。

侧脑室注射cAMP和ATP对大鼠睡眠的影响

运用多导睡眠描记(PSG)观察了Wistar大鼠侧脑室注射环磷酸腺苷(cAMP)和三磷酸腺苷(ATP)对睡眠的影响。cAMP可使觉醒(W)减少,深慢波睡眠(SWS_2)、慢波睡眠(SWS)和总睡眠时间(TST)增加,SWS_2潜伏期缩短而发作频率增加,SWS发作频率降低而发作持续时间延长,但cAMP的作用仅持续1h。ATP引起的睡眠变化出现较迟,直到第4h才引起W减少和TST增加。结果表明中枢运用外源性cAMP不仅减少觉醒和增加慢波睡眠,还使睡眠加深、睡眠质量改善;ATP也有明显的促睡眠效应。提示中枢cAMP和ATP参与睡眠—觉醒周期的调节。

递增负荷对大鼠心肌ATP、AMP及AMP/ATP的影响

为了探讨逐级递增跑台运动训练方式对大鼠心肌ATP、AMP及AMP/ATP的影响,建立了逐级递增跑台运动训练动物模型,采用高效液相色谱检测AMP、ATP的含量.研究结果表明:随着运动负荷的增加,大鼠心肌AMP含量呈现上升趋势,与对照组相比较,存在显著性差异(P<0.05);ATP含量呈现先下降趋势,存在显著性差异(P<0.05),后期出现的轻微上升趋势没有显著性差异(P>0.05);ATP/AMP呈现上升趋势,存在显著性差异(P<0.05).大鼠心肌对于逐级递增运动呈现适应性强度,运动过程中AMP/ATP比值的改变是ATP与AMP综合变化的效应,ATP变化幅度还是非常的有限,主要是通过增加AMP含量来提升能量供应.

离子对反相高效液相色谱法检测小鼠海马组织中ATP、ADP和AMP含量

目的 建立离子对反相高效液相色谱（RP-HPLC）同时检测小鼠海马组织中ATP、ADP和AMP含量的方法。方法 高氯酸沉淀蛋白后,碳酸钾-甲醇溶液中和,-20℃冷冻保存样本;流动相：50 mmol/L磷酸盐缓冲液（缓冲液为K2HPO4-KH2PO4,pH=6.60,含22%甲醇和4 mmol/L四丁基硫酸氢铵）。C_（18）色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）及相同填充材料的预柱,测定小鼠海马组织中ATP、ADP和AMP的含量;检测波长254 nm,流速0.6 ml/min;柱温为室温;进样量20μl。结果 本法的日内和日间精密度分别为1.27%~3.42%和0.88%~3.52%,回收率为95.67%~104.05%。结论 本研究建立的RP-HPLC法可同时测定小鼠海马ATP、ADP和AMP的含量,方法稳定、准确、可靠。

高效液相色谱法测定大鼠比目鱼肌和内侧腓肠肌内ATP·ADP及AMP含量的研究

[目的]比较成年大鼠比目鱼肌和内侧腓肠肌内ATP、ADP及AMP的含量。[方法]采用大体解剖法取出大鼠的比目鱼肌和内侧腓肠肌,置于液氮内研磨成粉末,再分别加入EDTA和HClO4、NaHCO3,经高速冷冻离心取出上清液,用高效液相色谱仪测定。[结果]慢肌(比目鱼肌)ADP的含量多于快肌(内侧腓肠肌),慢肌(比目鱼肌)ATP、AMP的含量少于快肌(内侧腓肠肌)。[结论]使用高效液相色谱仪可以检测出快慢肌的差异。

补中益气丸对脾虚大鼠能量物质及AMPK的影响

目的:从ATP、AMP、AMPK的变化探讨脾虚证与能量代谢的关系。方法:采用高效液相色谱法检测大黄脾虚大鼠ATP、AMP的变化,荧光定量PCR方法检测AMPK-α基因的表达。结果:脾虚模型血浆、肝组织AMP/ATP均增高;肌肉中AMPK-α基因表达显著降低,肝组织中AMPK-α基因表达显著升高;补中益气丸对上述模型中异常的能量物质有调节作用。结论:脾虚静息状态下ATP、AMP及AMPK在不同组织中表达不同,肝组织能量需求大于肌肉组织,补中益气丸可以调整脾虚状态下紊乱的能量物质。

运动适应中AMPK分子调控机制的研究进展

运动应激导致机体骨骼肌细胞内的相对能量平衡状态遭到破坏,机体恢复相对能量平衡状态对机体运动能力的保持具有重要意义。AMPK在运动适应过程中对调节细胞能量代谢和物质代谢,维持细胞自稳态具有重要作用。在一次性运动中AMPK的激活具有运动强度依赖性和运动时间依赖性。AMP/ATP比值改变是运动适应过程中AMPK激活的主要机制,Cr/PCr比值、葡萄糖等细胞内其他能量物质状态、H+浓度变化和LKB1等骨骼肌AMPK上位激酶的变化对AMPK激活也有影响。阐明了在运动适应过程中AMPK分子调控机制方面的研究进展。

力竭运动对大鼠心肌AMPK活性的影响

为了探讨力竭运动对大鼠心肌AMP、ATP含量及AMPK表达的影响,阐明力竭运动后AMP/ATP的比值和AMPK的变化特点及二者的相互关系,建立了力竭运动动物模型,应用高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠心肌组织中AMP、ATP含量,用Western blot检测心肌组织中AMPK的表达.结果显示:与静息组比较,力竭运动后0h心肌AMPK活性显著增加(P<0.01),运动后1h心肌AMPK活性增加(P<0.05),运动后6h恢复到安静水平;与静息组比较,力竭运动后AMP增加60%(P<0.01),AMP/ATP升至400%(P<0.01),两项指标均在1h回到安静水平.通过以上结果分析,可以得到:力竭运动使大鼠心肌组织AMPK表达增加且主要受AMP/ATP比值升高调控;运动后心肌组织AMPK活性的恢复滞后于AMP/ATP比值的恢复.

血管紧张素-(1-7)通过AC-cAMP途径增加THP-1源性泡沫细胞ABCA1的表达并减少细胞胆固醇含量

目的:构建THP-1源性泡沫细胞模型,探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]和腺苷酸环化酶抑制剂MDL对THP-1源性泡沫细胞胆固醇逆转运相关蛋白——ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达和胆固醇含量的影响。方法:将THP-1源性单核细胞诱导为巨噬细胞,加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)建立泡沫细胞模型。实验分为4组:正常泡沫细胞组、MDL组、Ang-(1-7)组和MDL+Ang-(1-7)组。处理24 h后,分别通过ELISA法、荧光定量PCR法和Western blotting检测各组细胞cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量,闪烁计数法检测各组细胞胆固醇流出率,高效液相色谱法检测各组细胞胆固醇含量。结果:(1)Ang-(1-7)组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显升高(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显增高(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组显著降低(P<0.05)。(2)MDL组cAMP表达水平、ABCA1 mRNA相对表达量和蛋白含量较泡沫细胞组有明显降低(P<0.05),胆固醇流出率较泡沫细胞组明显降低(P<0.05),胆固醇含量较泡沫细胞组增高(P<0.05)。(3)MDL+Ang-(1-7)组数值介于Ang-(1-7)组与泡沫细胞组之间。结论:(1)Ang-(1-7)能促进泡沫细胞ABCA1的表达增加,促进胆固醇外流,减少泡沫细胞胆固醇含量,逆转泡沫细胞的形成。(2)MDL可以抑制腺苷酸环化酶的活性,减少cAMP的生成,从而部分拮抗Ang-(1-7)的上述作用,但不能完全阻断Ang-(1-7)的作用。

参苓白术散调节AMPK、ABCG2改善高尿酸血症模型小鼠尿酸的实验研究

目的明确参苓白术散调节AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/ATP结合盒转运体G2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)通路降低高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)模型小鼠尿酸(uric acid,UA)的作用机制。方法将36只雄性昆明小鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组4组。空白组除外,其余各组腹腔注射氧嗪酸钾悬液(0.6 g/kg)连续7 d,建立HUA小鼠模型,参苓白术散干预14 d;采用生化法检测血清UA、谷草转氨酶(aspartate aminotransaminase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)含量,ELISA法检测血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C,CysC)含量,HE染色法观察肝、肾、回肠组织病理变化,Western blot检测回肠组织ABCG2、磷酸化的AMPK(phosphorylated AMPK,p-AMPK)表达,RT-qPCR检测ABCG2 mRNA表达。结果与空白组比较,模型组UA、CysC含量均显著升高(P<0.01),p-AMPK、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA含量均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,西药组和中药组UA含量均显著降低(P<0.01),p-AMPK、ABCG2蛋白及ABCG2 mRNA含量均明显升高(P<0.01);中药组CysC含量显著降低(P<0.01)。空白组肾小球大小均匀,结构清晰;模型组肾间质有炎性细胞浸润,上皮细胞轻微脱落;中药组及西药组上皮细胞脱落症状有所改善。空白组回肠组织黏膜皱襞规则,肠绒毛完整、整齐、密集;模型组肠绒毛短小,隐窝深度变浅,肠黏膜上皮细胞损伤;西药组和中药组肠黏膜上皮细胞损伤有所改善。参苓白术散对肝功能及肝组织形态均无明显损伤。结论参苓白术散通过调节HUA小鼠肠组织AMPK磷酸化,升高ABCG2表达,降低血清UA含量以治疗HUA,且无肝功能损伤。