用反相高效液相色谱法测定小鼠心肌、骨骼肌中ATP、ADP和AMP的含量

采用反相高效液相色谱法同时测定小鼠心肌、骨骼肌组织中ATP(三磷酸腺苷 )、ADP(二磷酸腺苷 )、AMP(一磷酸腺苷 )的含量。以150mmol/L磷酸二氢钾缓冲液 (pH=6.25)为流动相 ,采用BDShypersilC18 不锈钢色谱柱 ,紫外检测波长为254nm ,线性范围为1～200mg/L。ATP、ADP和AMP的平均加标回收率均在90 %以上 ,检出限分别为10ng、10ng、15ng。该法灵敏、准确 ,试剂费用低。

高效液相色谱法测定骨骼肌ATP、ADP、AMP、NAD^+、NADH含量

采用高效液相色谱法测定骨骼肌腺嘌呤核苷酸和辅酶Ⅰ含量。高压液相系 统包括：惠普公司ＺＯＢＡＸ－Ｃ１８反相柱５ｍｍ×１２ｃｍ，５９０ＵＶ检测器。流动相为２２０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液，内含１０％甲醇，用四丁基氢氧化胺ＴＢＡＨ调ｐＨ至６５。等比洗脱，流速为０８ｍｌ／ｍｉｎ。检测波长为２５４ｎｍ。所有样品和标准品在进样前均用０４５μｍ孔径的虑膜过滤后进样５μｌ作色谱分析。结果表明：ＨＰＬＣ可以同时测定ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ、ＮＡＤ＋、ＮＡＤＨ，分离效率高，操作简便，快速每个样品仅需１５分钟，而且，重现性好，定性可靠，定量准确。

开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及ATP/AMP的影响

目的:探讨开心散对多发梗死性痴呆大鼠学习记忆及ATP/AMP、GABA、iNOS含量的影响。方法:采用微血栓栓塞法制备多发梗死性痴呆大鼠模型,采用Morris水迷宫和开场实验评价学习记忆功能及运动行为;HE染色法评价海马CA1区病理形态学改变;HPLC法测定脑组织ATP和AMP的含量;ELISA试剂盒检测脑组织γ-氨基丁酸含量和外周血清iNOS含量。结果:与模型组比较,开心散可以显著缩短模型大鼠逃避潜伏期、增加穿越平台次数、增加开场实验大鼠站立次数、延长运动时间、缩短静止时间,改善海马CA1区神经细胞损伤,显著提高脑组织ATP/AMP、降低脑组织GABA含量和血清iNOS含量,具有显著的统计学意义(P <0.05)。结论:开心散具有改善多发梗死性痴呆大鼠学习记忆功能及运动行为异常的作用,其机制与降低脑组织GABA和血清iNOS含量,提高脑组织ATP/AMP,改善脑组织能量供应有关。

不同强度运动对大鼠骨骼肌AMP／ATP比值和AMPK活性的影响

目的:研究不同强度运动大鼠腓肠肌AMP、ATP含量及AMPK活性,旨在阐明不同强度运动时AMMP/ATP的比值和AMPK的变化特点及二者的关系。方法:将62只雄性SD大鼠分为4大组:安静对照组、小强度运动组、中强度运动组、大强度运动组,其中运动组又各分为3小组,分别在运动后即刻、1 h和6 h取材。小、中和大强度一次性跑台运动的速度分别为10 m/min、18 m/min、26 m/min,坡度10°,时间60 min。AMP、ATP含量测定采用高效液相色谱法(HPLC),AMPK活性测定采用放射性同位素法。结果:小强度运动后AMPK活性不变,中到大强度运动后即刻分别增加50%(P<0.01)和1.8倍(P<0.01)并持续至1 h,6 h回到安静水平;中到大强度即刻AMP分别增加16%(P<0.05)和62%(P<0.01),AMP/ATP分别升高33%(P<0.05)和89%(P<0.01),均在1 h回到安静水平;不同强度运动后即刻AMPK与AMP/ATP呈显著正相关(r=0.89)。结论:1)AMPK在小强度运动时未激活,中到大强度运动时呈强度依赖性升高;2)运动激活AMPK的机制主要受AMP/ATP比值升高调控,而比值的升高主要依赖于AMP的增加而不是ATP的减少;3)运动后AMPK活性的恢复滞后于AMP/ATP比值的恢复。

针刺对脑梗死鼠脑心组织及血液ATP、ADP、AMP及能荷的影响

犤目的犦从能量代谢角度探讨脑梗死对心脏的影响及针刺的干预效应。犤方法犦以一侧大脑中动脉阻断大鼠(MCAo)为脑梗死实验模型,采用放免分析法检测、4个时相大鼠脑心组织及血液中三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量并计算能荷水平。犤结果犦针刺组与模型组比较,大鼠心脑组织及血液中ATP、ADP、能荷显著上升,AMP显著下降(P<0.05或P<0.01),接近正常组。犤结论犦脑梗死发生后不仅脑组织能量代谢障碍,而且心肌组织能量代谢也明显障碍,针刺对脑梗死导致的脑心组织及血液能量代谢障碍具有明显的改善作用。

IGF-I对ISP损伤大鼠心肌ATP、ADP、AMP变化影响的实验研究

目的 研究胰岛素样生长因子 - I(IGF- I)对异丙基肾上腺素 (ISP)损伤大鼠心肌 ATP、ADP、AMP的影响。方法 采用大鼠 ISP心肌损伤动物模型 ,以 IGF- 1作保护因素 ,用高效液相色谱法测定大鼠心肌组织中高能磷酸化合物含量。结果 与正常对照组相比 ,ISP损伤组 ATP水平明显下降 ,而 IGF- I保护组与 ISP损伤组相比 ATP水平明显升高。结论 IGF- I可抑制 ISP所致心肌能量代谢障碍 。

反相离子对色谱法快速测定猪肉中ATP和ADP及AMP的含量

采用反相离子对色谱法建立了一种快速测定猪肉中三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、单磷酸腺苷（AMP）含量的检测方法。采用Waters BEH C18柱作为色谱柱,以20 mmol/L磷酸钾缓冲溶液（含5 mmol/L四丁基溴化铵,pH=6.5）和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,采用光二极管阵列检测器进行检测,检测波长为259 nm。结果表明：HPLC可以实现猪肉样品中ATP、ADP、AMP 3种物质的同步检测,平均回收率在80.89%～97.82%,相对标准偏差小于2.81%。

IP-RPHPLC法检测电针后肥胖大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量

目的建立一种离子对反相高效液相色谱（IP-RPHPLC）法并将其用于检测电针对肥胖大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量的影响。方法应用岛津SIL-20AT高效液相色谱系统,Megres-C18（5μm,250mm×4.6mm）耐水性色谱柱,对大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP进行分离,流动相为0.18mol/L的磷酸二氢钾缓冲液（含5%甲醇且pH=6.25）,检测波长为254nm,流速为0.8mL/min,进样体积为20μL,柱温为25℃。结果 ATP在1.1~212.2μg/mL（r=0.999 9）,ADP在0.9~180.0μg/mL（r=0.999 9）及AMP在0.9~181.8μg/mL（r=0.999 7）范围内线性关系良好。ATP、ADP和AMP平均回收率分别为96.4%、98.3%、100.8%;RSD分别为2.50%、2.88%、4.14%;日内和日间精密度RSD分别为0.06%~0.40%和0.06%~0.69%;准确度均在99.0%~108.6%之间;ATP、ADP和AMP检测限为0.11、0.09、0.045μg/mL。结论建立的高效液相色谱法用于检测大鼠肝脏组织中ATP、ADP和AMP含量简便、快速并且准确可靠,为针刺干预治疗后组织中小分子生物活性物质浓度的检测等研究工作奠定了基础。

不同死亡方式大鼠心肌组织中ATP、ADP和AMP含量比较

目的比较不同死亡方式对大鼠心肌组织能量物质变化的影响,为判断不同死亡方式及死亡时间提供依据。方法180只大鼠随机分为三组,以不同方式(失血、窒息、断颈)处死,高效液相色谱法检测死后0、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、18和24h大鼠心肌组织中的ATP、ADP、AMP含量。结果三组不同死亡方式大鼠心肌组织的ATP、ADP、AMP的含量在大部分时间点做组间比较有明显差异(P<0.05);每组不同死亡方式的大鼠心肌组织中ATP、AMP的含量随时间的变化有明显的差异(P<0.01),而各组中的ADP在死亡一定时间后无明显差异。结论不同死亡方式的大鼠心肌组织中能量物质死后变化可以用作对死亡方式及某种方式不同死亡时间做出判断的依据。

反相高效液相色谱法测定小鼠心肌中ATP、ADP和AMP含量及分析

建立同时测定小鼠心肌组织中ATP(三磷酸腺苷)、ADP(二磷酸腺苷)和AMP(一磷酸腺苷)含量的高效液相色谱方法。采用反相高效液相色谱模式,使用Sepax Bio-C18(250 mm×4.6 mm ID,5μm,200 )色谱柱,以60 mmoL.L-1磷酸二氢钾、60 mmoL.L-1磷酸氢二钾组成的缓冲液(pH=6.68)为流动相等比洗脱,流速:0.6 mL.min-1;紫外检测波长为259 nm,带宽为30 nm。三种目标组分在10 min内实现基线分离,平均加标回收率均在99%以上,线性范围为1～200 mg.L-1,检出限分别为20、20、25 ng。该法简便、准确,易于移植。

HPLC法测定心衰大鼠心肌中ATP、ADP与AMP的含量

目的：建立大鼠心肌组织ATP、ADP、AMP 的含量测定方法,考察心衰大鼠的ATP、ADP、AMP定量变化。方法：色谱柱为Thermo Hypersil C18柱（250 mm ×4.6 mm,5μm）；流动相为6.8 g·L-1磷酸二氢钾和1.164 g·L-1氢氧化钠溶液；检测波长为254 nm。 SD大鼠随机分为对照组和试验组,分别腹腔注射生理盐水和多柔比星,给药6周后取心脏组织制备匀浆,用HPLC法测定大鼠心脏组织中ATP、ADP和AMP的含量。结果：ATP、ADP和AMP在0.625~40μg·ml-1呈良好的线性（ r〉0.99）,最低检测限和最低定量限为0.625μg·ml-1,精密度RSD均〈9.50%,回收率为93.20%~108.0%,稳定性RSD 为3.0%~14.0%。多柔比星组ATP的含量均明显低于生理盐水组,而AMP和ADP含量则明显高于生理盐水组（P〈0.01）。结论：HPLC法测定心肌组织中ATP、ADP和AMP含量满足生物样本的测定要求,可用于考察蒽环类抗肿瘤药物对心衰大鼠的影响。

高效液相色谱法在测定心肌组织中ATP、ADP、AMP方面的应用

目的 :用高效液相色谱法来测定心肌组织中的ATP、ADP、AMP的含量 ,比较含氧血心脏停搏液持续灌注和冷晶体心脏停搏液间断灌主保护心肌的作用。方法 :心脏瓣膜直视术患者 45例 ,随机分为两组冷晶体心脏停搏液组 (CCC组 )和含氧血 (T >35℃ )心脏停搏液组 (OBC组 ) ,分别测定两组心肌组织中ATP、ADP、AMP的含量。结果 :组间比较 ,主动脉开放后CCC组能量储备值 (EC值 )明显降低 (P <0 0 5 ) ;组内比较 ,CCC组的EC值主动脉开放后较阻断前明显减少 (P <0 0 1)。结论 :含氧血心脏停搏液持续灌注在能量储备方面较冷晶体心脏停搏液间断灌注好。

高效液相色谱法测定棉籽中的ATP,ADP,AMP

测定生物组织中腺苷三磷酸(ATP)、腺苷二磷酸(ADP)和腺苷一磷酸(AMP)的含量,在研究生物的一些生理生化现象中有重要意义。利用不同方法定量分析这三种腺苷酸的报道已有很多。本文所述是用反相高效液相色谱法,对棉籽中的ATP、ADP和AMP进行测定。

胞浆游离钙和组织ATP、ADP、AMP在脑复苏中变化及药物的保护作用

目的：为了探讨胞浆游离钙、ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ在脑缺血和再灌流损伤中的作用及相互关系以及药物的影响。方法：应用沙鼠建立脑缺血模型。缺血前１５分钟腹腔注射药物，分别阻断双侧颈动脉５０分钟，阻断颈动脉５０分钟再灌流１０分钟，再灌流６０分钟及１２０分钟。检测脑组织中ＡＴＰ、ＡＤＰ和ＡＭＰ的变化以及应用尼莫地平及东莨菪碱后的影响。结果：（１）胞浆游离钙在脑缺血５０分钟后大幅度升高，再灌流时再度升高，然后缓慢下降。（２）在缺血期ＡＴＰ迅速下降，再灌流期先上升，此后再度下降，而ＡＤＰ及ＡＭＰ在缺血及再灌流期积聚。（３）尼莫地平及东莨菪碱对减缓胞浆游离钙升高，减缓ＡＴＰ的耗竭均有作用。结论：对脑缺血和再灌流损伤有治疗意义。

高效液相色谱法测定龙眼果实中ATP、ADP、AMP的含量

摸索了一种基于高效液相色谱仪快速测定龙眼果实腺苷三磷酸（ATP）、腺苷二磷酸（ADP）、腺苷一磷酸（AMP）含量的方法。该方法利用磷酸盐缓冲液（pH7.0）作为单一流动相,流速设定为1 mL/min,停止时间13 min,检测波长254 nm,无参比波长。ATP、ADP和AMP浓度在5~50 mg/L范围内与相应的色谱峰面积呈完美的直线关系（决定系数R2均为1.000）,回收率95.2%~97.5%,保留时间分别为8.651、9.844和11.457 min。该方法测定结果表明,果实腺苷含量水平分别为30.0、6.5和2.0μg/g,能荷值为0.86。

递增负荷对大鼠心肌ATP、AMP及AMP/ATP的影响

为了探讨逐级递增跑台运动训练方式对大鼠心肌ATP、AMP及AMP/ATP的影响,建立了逐级递增跑台运动训练动物模型,采用高效液相色谱检测AMP、ATP的含量.研究结果表明:随着运动负荷的增加,大鼠心肌AMP含量呈现上升趋势,与对照组相比较,存在显著性差异(P<0.05);ATP含量呈现先下降趋势,存在显著性差异(P<0.05),后期出现的轻微上升趋势没有显著性差异(P>0.05);ATP/AMP呈现上升趋势,存在显著性差异(P<0.05).大鼠心肌对于逐级递增运动呈现适应性强度,运动过程中AMP/ATP比值的改变是ATP与AMP综合变化的效应,ATP变化幅度还是非常的有限,主要是通过增加AMP含量来提升能量供应.

侧脑室注射cAMP和ATP对大鼠睡眠的影响

运用多导睡眠描记(PSG)观察了Wistar大鼠侧脑室注射环磷酸腺苷(cAMP)和三磷酸腺苷(ATP)对睡眠的影响。cAMP可使觉醒(W)减少,深慢波睡眠(SWS_2)、慢波睡眠(SWS)和总睡眠时间(TST)增加,SWS_2潜伏期缩短而发作频率增加,SWS发作频率降低而发作持续时间延长,但cAMP的作用仅持续1h。ATP引起的睡眠变化出现较迟,直到第4h才引起W减少和TST增加。结果表明中枢运用外源性cAMP不仅减少觉醒和增加慢波睡眠,还使睡眠加深、睡眠质量改善;ATP也有明显的促睡眠效应。提示中枢cAMP和ATP参与睡眠—觉醒周期的调节。

不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株cAMP水平及Na^+-K^+-ATP酶活性的影响

目的:观察不同浓度尿酸和胰岛素对猪近端肾小管上皮细胞株(LLCPK1)细胞内环腺苷酸(cAMP)水平和Na+K+ATP酶活性的改变,探讨代谢相关因素在细胞水平对近端肾小管上皮细胞的离子转运和细胞凋亡影响.方法:以LLCPK1为研究对象,观察尿酸浓度为0,0.1,0.2和0.4mmol/L和胰岛素浓度为0,10-9,10-8,10-7mol/L培养24h条件下,LLCPK1细胞内cAMP水平、Na+K+ATP酶活性的改变以及离子转运情况.结果:0.1,0.2和0.4mmol/L尿酸刺激24h,LLCPK1的cAMP水平、细胞Ca2+,Na+浓度升高,而Na+K+ATP酶的活性、K+浓度下降;胰岛素在高浓度时引起细胞内游离Ca2+,Na+浓度增高,而cAMP水平,Na+K+ATP酶活性及K+浓度下降.结论:尿酸和胰岛素均对LLCPK1细胞具有明显的影响,可能与代谢综合征时肾脏功能改变的发生或保护机制有关.

高山红景天苷改善外周性疲劳大鼠骨骼肌细胞内ATP、AMP以及Pi含量的研究

目的：测定运动性疲劳大鼠体内ATP、AMP和Pi的含量变化，从而进一步验证红景天苷的抗疲劳作用。方法：SD大鼠，体重（170±10．0）g，雌雄各半，随机分成5组，每组10只。设高山红景天苷高中低3个剂量组，即：200、100、50mg／（kg．d），另设阴性对照组（生理盐水）和阳性对照组（人参皂苷Rg1）。经口灌胃给药，每只大鼠1ml／次．d，连续给药12d。

高效液相色谱法测定大鼠比目鱼肌和内侧腓肠肌内ATP·ADP及AMP含量的研究

[目的]比较成年大鼠比目鱼肌和内侧腓肠肌内ATP、ADP及AMP的含量。[方法]采用大体解剖法取出大鼠的比目鱼肌和内侧腓肠肌,置于液氮内研磨成粉末,再分别加入EDTA和HClO4、NaHCO3,经高速冷冻离心取出上清液,用高效液相色谱仪测定。[结果]慢肌(比目鱼肌)ADP的含量多于快肌(内侧腓肠肌),慢肌(比目鱼肌)ATP、AMP的含量少于快肌(内侧腓肠肌)。[结论]使用高效液相色谱仪可以检测出快慢肌的差异。