安神定志灵对SHR大鼠突触体ATP、LDH及AC/cAMP/PKA信号通路的影响

目的研究安神定志灵对ADHD模型大鼠突触体ATP、LDH酶活性的影响及对AC/cAMP/PKA信号通路的调控作用。方法设WKY大鼠10只为正常对照组,SHR大鼠依据随机数字分为模型组,西药组,安神定志灵低、中、高剂量组,每组10只,分别灌胃给药4周。Percoll密度梯度离心法制备脑突触体,运用比色法检测突触体ATP酶、乳酸脱氢酶(LDH)活性,运用ELISA法检测突触体内腺苷酸环化酶(AC)、环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)含有量。结果电镜观察结果显示,此次实验所提取突触体能够满足实验要求。相比正常组,模型组大鼠脑突触体内ATP酶活性降低,LDH酶活性有所升高(P<0.05);经治疗4周后,与模型组相比,西药组及安神定志灵中剂量组ATP酶活性显著升高,LDH酶活性显著降低(P<0.01),安神定志灵低剂量组ATP酶活性有所增高、LDH酶活性降低(P<0.05)。相比正常组,模型组大鼠脑突触体内AC、cAMP、PKA含有量均低于正常组(P<0.05);经治疗4周后,与模型组相比,西药组及安神定志灵中剂量大鼠脑突触体内AC、cAMP、PKA含有量均有所升高(P<0.05),安神定志灵高剂量组大鼠脑突触体内AC、cAMP含有量升高(P<0.05)。结论安神定志灵可调节模型大鼠突触体ATP酶、LDH酶活性,提高突触体内AC、cAMP、PKA含有量,提示安神定志灵可能通过降低D2RS(多巴胺D2受体短型)受体对AC/cAMP/PKA信号通路的抑制功能而发挥治疗作用。

可卡因对小鼠脾细胞内ATP酶、LDH和SDH活性的影响

目的考察盐酸可卡因对体外培养小鼠脾细胞内ATP酶、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性的影响。方法采用小鼠脾细胞体外培养的方法,在脾细胞培养液中加入终质量浓度分别为10、20和100μg/mL的盐酸可卡因,按试剂盒所述条件在7d时检测脾细胞中ATP酶、LDH和SDH活性。结果在离体脾细胞培养液中加入不同剂量的可卡因,培养7d,脾细胞内ATP酶、LDH与SDH活性均明显降低。结论可卡因对脾细胞内ATP酶、LDH和SDH活性有抑制作用。

耐力跑训练对CCO、LDH活性组织化学特性影响

实验采用肌肉活检技术,运用现代组织化学方法,结合扫描显微分光光度计的方法,对6名普通受试者进行8周耐力训练前后右腿股外肌中有关代谢酶的活性的变化进行了对比观察.结果发现,经过8周的耐力跑训练后,股外肌中的细胞色素氧化酶(CCO),经训练活性提高44.2%(P<0.15);而乳酸脱氢酶(LDH)及三磷酸腺苷酶(ATP)的活性,练习前后无显著变化.

X射线辐射对小鼠肾组织中乳酸脱氢酶、Na^+-K^+ATP酶活性及Caspase-3蛋白、Bax蛋白表达的影响

为了探究X射线辐射对小鼠肾组织乳酸脱氢酶(LDH)、Na+-K+ATP酶活性及Caspase-3蛋白、Bax蛋白表达的影响,对96只成体小鼠用不同剂量的X射线(0、1、3、5Gy)进行全身辐射,分别于辐射后5、10、15d和20d,用比色法测量小鼠肾组织结构中乳酸脱氢酶、Na+-K+ATP酶的活性变化,用免疫组化法测量小鼠肾组织结构中Caspase-3蛋白、Bax蛋白表达的变化.结果发现:经X射线辐射后小鼠肾组织乳酸脱氢酶活性有不同程度增加,Na+-K+ATP酶活性有不同程度的降低,Caspase-3蛋白和Bax蛋白的表达增强.据此认为,X射线辐射剂对小鼠肾脏组织细胞有明显的损伤效应.

红花黄色素改善大鼠缺氧心肌能量代谢的研究

目的 探讨红花黄色素 (SY)缓解大鼠心肌缺氧性损伤作用及其对能量代谢的影响。方法 建立大鼠离体心脏的冠状动脉灌流模型 ,以 2 ,4 二硝基苯肼比色法测心室肌组织乳酸脱氢酶 (LDH)漏出量 ,以荧光素酶法测心室肌组织ATP含量 ,透射电镜观察心尖部组织超微结构 ;制备大鼠心室肌组织线粒体混悬液 ,分别以比浊法与荧光偏振法观察线粒体肿胀与膜流动性的变化。结果 SY可减少大鼠低灌流离体心脏LDH漏出 ,缓解心室肌组织ATP含量下降及其超微结构的损伤 ;SY可缓解大鼠心肌线粒体混悬液中线粒体的肿胀及其膜流动性下降。结论 SY可改善大鼠心肌能量代谢 ,进而缓解心肌缺氧性损伤。

补骨脂和肉豆蔻炮制对脾肾阳虚泄泻大鼠能量代谢的影响

目的从能量代谢角度比较二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠的调控效应。方法采用腺嘌呤灌胃,饮食失节,服冰番泻叶水浸剂方法复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型,给药二神丸进行治疗性实验,酶标仪法检测大鼠肝组织中Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase以及乳酸脱氢酶(LDH)活性变化;比色法检测肝组织中琥珀酸脱氢酶(SDH)活性变化。结果与正常对照组比较,模型组肝组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性显著降低(P<0.01);LDH活性显著升高(P<0.01)。与模型组相比较,二神丸Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性明显升高,LDH活性明显降低,均具有极显著性差异(P<0.01);与二神丸Ⅰ组(补骨脂生品+肉豆蔻生品)相比较,二神丸Ⅳ组Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase及SDH活性均高于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05);LDH低于二神丸Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经盐炙补骨脂和麸煨肉豆蔻组方的二神丸改善脾肾阳虚泄泻模型大鼠能量代谢效果更加明显,提示其增效可能与促进能量代谢相关酶活性有关。

弱激光血疗对红细胞影响的实验研究

本实验利用低强度半导体绿色激光血管内照射仪照射健康犬 ,观察其对红细胞计数、乳酸脱氢酶、钠 -钾ATP酶影响的影响。结果表明 :功率 >8mW组的观察指标无明显变化 ,个体呈不良反应 (但无统计学意义 )。当功率≤ 8mW组 ,指标不仅无不良变化 。

埃他卡林对心肌细胞损伤保护作用的药理学特征

目的研究KATP通道开放剂埃他卡林(iptakalim,Ipt)对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用,并探究其作用机制。方法采用200μmol.L-1的过氧化氢(H2O2)损伤体外培养的乳鼠心肌细胞2 h,建立氧化应激心肌细胞损伤模型;以二氮嗪(diazoxide,Dia)作为阳性对照药物,采用生物化学法检测各处理组细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogen-ase,LDH)活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及MTT法检测心肌细胞损伤程度,反映埃他卡林对该模型的影响。结果过氧化氢损伤后,细胞存活率降低,LDH释放量明显升高,SOD活力下降;埃他卡林预处理后,细胞培养液中LDH活性较过氧化氢处理组降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),细胞存活率浓度依赖性升高(P<0.01)。该保护作用可被线粒体KATP通道阻断剂5-羟基癸酸酯(5-HD)拮抗,也可被KATP通道阻断剂格列本脲(glibenclamide,Gli)阻断。结论埃他卡林对H2O2造成氧化应激损伤的心肌细胞具有明显的保护作用,其保护作用与线粒体膜和细胞膜的KATP通道激活有关。

二至丸对自然衰老小鼠血液流变学及心肌能量代谢酶的影响

目的:研究长期给予二至丸对自然衰老小鼠血液流变学及心肌能量代谢的影响。方法:小鼠分为正常对照组和二至丸组,二至丸按1.8g.kg-1的剂量给予昆明种小鼠,并制备成含药饲料,自6月龄开始给药,至18月龄结束,测定其对血液流变学以及心肌组织Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、SDH、LDH活性的影响。结果:二至丸组会使红细胞聚集指数降低,但是与空白对照组比较没有统计学意义;二至丸组能提高SDH酶、LDH酶、Na+K+ATP酶、Ca2+Mg2+ATP酶的活性,与空白组比较具有显著的有统计学意义(P<0.05)。结论:二至丸能够提高心肌有氧代谢能力,从而延缓机体衰老的进程。

半胱氨酸预防FCCP所致体外大鼠肝细胞损伤研究

ＦＣＣＰ作为质子传递型氧化磷酸化解偶联剂，是一种强力的ＡＴＰ合成抑制剂。８０μｍｏｌ／Ｌ的ＦＣＣＰ可在数分钟内使细胞内的ＡＴＰ耗竭。半胱氨酸可使ＦＣＣＰ引起的ＡＴＰ，氧消耗量和乳酸脱氢酶逸出率等改变恢复正常。半胱氨酸对ＦＣＣＰ的解毒作用是特异的和与剂量有关，而其他含巯基剂如：还原型谷胱甘肽和二硫苏糖醇（ＤＴＴ）则不能干扰ＦＣＣＰ对细胞线粒体功能的影响。

大黄素对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨大黄素(emodin)对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用及其机制。方法健康成年♂SD大鼠24只,随机分为4组:对照组(control)、大黄素组(emodin)、大黄素+格列本脲组(glibenclamide,Gli)和大黄素+5-HD组(5-hydroxydecanoate,5-HD)。通过Langendorff离体心脏灌流技术建立心肌缺血/再灌注模型和描记左室功能;紫外分光光度法测定冠脉流出液中LDH含量及心肌组织中SOD活性和MDA含量;TTC法测定心肌梗死面积。结果 (1)大黄素可明显改善缺血/再灌注后大鼠离体心脏左心室发展压(left ventricular develop pressure,LVDP)、左心室压力最大变化速率(maximal positive and negative velocity of left ventricular pressure,±LVdp/dt max)、左心室舒张末压(left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP)和冠脉流量(coronary flow,CF)的恢复;降低冠脉流出液中LDH含量;减少心肌梗死面积;升高心肌组织中SOD活性,减少MDA含量;(2)大黄素对离体心脏缺血/再灌注损伤的保护作用可被非特异性ATP敏感钾通道拮抗剂Gli和线粒体膜ATP敏感钾通道拮抗剂5-HD所取消。结论大黄素可改善离体大鼠心脏缺血/再灌注损伤,此作用可能通过增强心肌的抗氧化能力、激活开放细胞膜与线粒体膜ATP敏感钾通道所实现。

高原鼠兔组织中精子特异性乳酸脱氢酶的作用机理

高原鼠兔Ochotona curzoniae具有很强的高原低氧适应能力。前期研究发现,精子特异性乳酸脱氢酶(LDH-C4)在高原鼠兔体细胞中表达。为阐明LDH-C4在高原鼠兔组织中的作用机理,应用RNA干扰技术沉默高原鼠兔心肌、肝脏和脑组织中的Ldh-c基因;应用荧光定量PCR和Western Blot方法,测定Ldh-c基因在心肌、肝脏和脑组织中的表达水平;应用生物化学方法测定沉默Ldh-c基因后,心肌、肝脏和脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP的含量。结果表明,腹腔注射腺病毒p MultiRNAi-Ldhc能极显著降低高原鼠兔组织中Ldh-c基因的表达水平,在mRNA和蛋白水平,心肌中Ldh-c基因的表达分别下降48.11%和19.27%;肝脏中Ldh-c基因的表达分别下降70.16%和25.82%;脑中Ldh-c基因的表达分别下降49.08%和25.36%。沉默Ldh-c基因表达后,高原鼠兔心肌、肝脏和脑组织中LDH比活力、乳酸和ATP的含量也显著降低,分别下降25.58%、41.94%和21.23%,28.16%、15.90%和24.66%以及16.65%、12.78%和18.50%。这些结果说明,高原鼠兔在低氧环境中,其心肌、肝脏和脑组织通过LDH-C4催化无氧糖酵解获得部分ATP,增强对低氧环境的适应能力。

冷缺血时间对肝移植术后早期移植物功能及排斥反应的影响

目的探讨不同冷缺血时间(CIT)对肝移植术后早期移植物功能和急性排斥反应(AR)的影响。方法收集并分析218例肝移植供、受者的临床资料,按照供肝CIT分为A组(CIT≤6 h,60例)、B组(6 h<CIT≤10 h,89例)、C组(CIT>10 h,69例)3组。收集受者术后1、7、14 d的血液样本,检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、CD4+T细胞三磷酸腺苷(ATP)的变化情况。分析术后各组受者的AR发生率和C4d沉积阳性率。结果各组ALT、AST和LDH水平在术后1 d即达到峰值,随后逐渐下降,至14 d各组各指标相当,且术后时间与组别均存在交互效应。肝移植术后各组CD4+T细胞ATP水平逐渐上升,至术后7 d达到峰值,然后逐渐下降,且术后时间与组别均存在交互效应。A、B、C 3组AR发生率分别为10%、12%、28%;与C组比较,A、B组的AR发生率明显降低(均为P<0.05/3)。A、B、C组AR受者的C4d沉积阳性率分别为1/3、45%、89%;与C组比较,A组的C4d沉积阳性率明显降低(P=0.015)。结论CIT延长有可能导致肝移植术后早期肝功能损伤加重,更易诱发体液性AR。

人参皂甙Rb1对ATP诱导大鼠海马脑片毒性损伤的影响

目的:研究人参皂甙Rb1对ATP诱导大鼠海马脑片毒性损伤的影响及其作用机制。方法:采用SD大鼠离体海马脑片模型,随机分为正常对照组、人参皂甙Rb1对照组、ATP损伤组、人参皂甙Rb1(20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L)组、亮蓝G(BBG)组、亮蓝G+人参皂甙Rb1组、2'-3'-O-(4-苯甲酰-苯甲酰)腺苷三磷酸三乙烷胺盐(Bz ATP)组和Bz ATP+人参皂甙Rb1组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶(LDH)释放率,免疫组化测定海马CA1区和齿状回神经型一氧化氮合酶(n NOS)表达,Western blot测定海马磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK1/2)蛋白表达。结果:人参皂甙Rb1(40μmol/L、60μmol/L)组可明显降低ATP诱导的LDH释放,人参皂甙Rb1(60μmol/L)亦降低海马p-JNK1/2以及CA1区和齿状回n NOS的表达,人参皂甙Rb1(60μmol/L)对由P2X7受体激动剂Bz ATP诱导的LDH释放和n NOS、p-JNK1/2表达亦有明显抑制作用。P2X7受体抑制剂亮蓝G可明显减低ATP诱导的LDH释放,但BBG联合应用人参皂甙Rb1(60μmol/L)并未增强人参皂甙Rb1的保护作用。结论:人参皂甙Rb1可明显抑制ATP诱导的大鼠海马脑片毒性损伤,其作用机制与抑制P2X7受体,进而减少nNOS和p-JNK1/2的表达有关。

寒证和热证动物模型的建立方法及评价

目的:建立稳定、客观的中医寒证和热证的动物模型。方法:将72只Wistar大鼠(雌雄各半),随机分为正常对照组、寒证模型组和热证模型组。寒证模型组予冰水(0℃)灌胃和冷水(10℃)泡浴,热证模型组予乙醇溶液(0.1 mg/ml^0.3 mg/ml)和辣椒素(0.2 mg/ml^0.9 mg/ml)溶液灌胃,正常对照组予生理盐水灌胃。每组均予10 ml/kg灌胃,每日1次,连续5周。每日测定大鼠体征评分(R)、饮水量及摄食量,每周检测体重,取材前1 h测量大鼠肛温。造模结束后,测定大鼠大肠组织Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。HE染色,光镜下观察各组大鼠大肠组织学形态改变,并对病理组织学结果进行评分。结果:与正常对照组比较,寒证模型组6<R≤3时,评分显著高于正常对照组,饮水量和肛温明显降低,摄食量和体重增加。热证模型组R≥6时,评分显著高于正常对照组,饮水量和肛温上升,摄食量和体重下降。与正常对照组比较,热证模型组Ca^2+-Mg^2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性明显升高;寒证模型组Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性降低不明显。与热证模型组比较,寒证模型组Na^+-K^+-ATP酶、Ca^2+-Mg^2+-ATP酶、SDH酶和LDH酶活性显著降低(P<0.05或P<0.01)。病理组织学检查表明,寒证模型、热证模型组大肠粘膜杯状细胞排列紊乱,炎性细胞浸润。病理评分结果表明,寒证模型、热证模型组病理损伤明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:寒证模型通过冰水灌胃和冷水泡浴的方法建立,热证模型通过乙醇溶液和辣椒素溶液灌胃建立,模型成功模拟寒证、热证的临床症状及病理组织学变化。本实验结果为寒证、热证模型的病理生理及药理研究提供了更为准确、客观、有效的动物模型评价方法。