大鼠咽黏膜内ATP受体P2X_3阳性感觉纤维的分布

目的研究大鼠咽黏膜内三磷酸腺苷(ATP)受体P2X3阳性感觉纤维的分布,为探究ATP在咽黏膜感觉信号传导中的作用提供形态学依据。方法成年Wistar大鼠12只,应用免疫荧光组织化学双标技术结合激光扫描共焦显微镜。结果1.在咽黏膜各部位均可观察到P2X3阳性感觉纤维,纤维分为两类:一类为串珠样游离神经纤维;另一类纤维在黏膜内发出分支并形成复杂的树枝状末梢,纤维分支在黏膜内形成神经丛。2.可见许多降钙素基因相关肽(CGRP)阳性纤维缠绕在P2X3阳性树枝状末梢周围,并有少量的串珠样P2X3阳性纤维与CGRP共存。3.在岩神经节内可观察到许多P2X3或CGRP免疫阳性神经元,其中有少量神经元同时呈P2X3/CGRP免疫阳性。结论大鼠咽黏膜内不同类型的感觉纤维均表达ATP受体P2X3阳性,提示ATP可能与咽黏膜伤害性刺激和其他生理性刺激向中枢的传递有关。

离子型ATP受体研究进展

长期以来,人们仅视三磷酸腺苷(ATP)是体内一种储能、供能物质(通常在细胞内浓度较高),20世纪50年代,Holton发现感觉神经兴奋时释放ATP,并可作用于平滑肌、心肌和神经细胞等多种组织产生重要的生物效应,提示ATP在神经兴奋传递中具有实际意义.在1972年Burnstock提出了"嘌呤能神经"学说,并推测存在特异性的ATP受体,这被后来的很多研究证实,1978年,Burnstock正式命名"嘌呤受体"(purinoceptor),并将其分为P1(腺苷)受体和P2(ATP)受体两种类型.P1受体包括A1、A2A、A2B、A3四类,均属于G-蛋白耦联受体家族.P2受体又可以分为离子型的P2X受体和代谢型的P2Y受体两种类型[1].P2Y受体也属于G蛋白耦联受体家族,目前已经克隆了P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6、P2Y11、P2Y12六个具有功能的亚单位(subunit).P2X受体属于配体门控离子通道(ligand-gated ion-channel)受体,介导非选择性阳离子电导的增加,激活后可以产生内向电流,1994年Valera和Brake首次克隆了P2X1、P2X2亚单位[2,3],随后又相继克隆了P2X3、P2X4、P2X5、P2X6、P2X7亚单位,P2X受体家族被认为是继烟碱受体、谷氨酸受体超家族后第三类配体门控离子通道超家族.该家族受体广泛分布在内脏、中枢及外周神经系统.ATP作为一种在外周及中枢神经系统广泛存在的兴奋性的神经递质/调质,通过与P2X受体结合发挥许多重要的生理功能.

非选择性ATP受体拮抗剂对坐骨神经再生轴突诱向作用影响的实验研究

目的 探讨苏拉明对细胞外ATP的轴突化学性诱向作用的影响。 方法 选用SD雌性大鼠 10只 ,制作成鼠坐骨神经缺损模型 ,将“Y”形硅胶管单臂一侧与坐骨神经近断端行套入缝合。“Y”形硅胶管的两管臂远端用无损伤线交叉或平行缝合封闭 ,以区别实验侧和对照侧。与左侧坐骨神经套入缝合的硅胶管两壁内分别注入 1mmol/LATP、生理盐水 10 μl和 1mmol/LATP加 0 2mg/ml苏拉明 10μl;与右侧坐骨神经套入缝合的硅胶管硅胶管两壁内分别注入生理盐水 10 μl和 0 2mg/ml苏拉明 10μl。术后 8周取标本进行肉眼、光镜、电镜及图像分析系统观察和检测再生神经的形态、有髓纤维的数目、形态、髓鞘厚度等。 结果 含ATP组再生神经干内有髓纤维的数目 (2 2 46± 2 2 2 )明显多于含生理盐水组 (10 61± 161) ,后者又明显多于含苏拉明组 (2 66± 84)。ATP受体非特异性拮抗剂苏拉明能完全阻断细胞外ATP对外周神经再生轴突的诱向作用。单纯的苏拉明对再生轴突也具有非常明显的抑制作用。

大鼠坐骨神经ATP受体mRNA表达的实验研究

目的 证实大鼠坐骨神经上ATP受体P2y的分布。 方法 梨状肌下缘以远 5mm处切取长 5mm的坐骨神经 ,同时切取主动脉 3mm作阳性对照 ;组织总mRNA提取 ,RT PCRcDNA第一链合成 ,反应所得产物于 2 %琼脂糖凝胶电泳 ,1μg/ml溴化乙啶染色 (EB) ,观察 ,照相。 结果 在大鼠坐骨神经上有 3种ATP受体亚型表达 (P2y2、P2y4和P2y6mRNA表达 )。 结论 大鼠坐骨神经上有 3种ATP受体亚型分布 ,细胞外ATP可能通过此三种受体或其中之一完成轴突诱向作用 。

不同方式血液透析对维持透析病人巨噬细胞ATP结合盒受体-1水平的影响

目的:探讨不同方式血液透析对维持透析病人巨噬细胞ATP结合盒受体-1表达水平的影响。方法:2010年8月至2012年3月,选取重庆医科大学第一附属医院长期规律透析的慢性肾衰患者60例,按不同血液净化方式分为2组:普通血液透析(hemodialysis,HD)组、血液透析滤过(hemodiafiltration,HDF)组,每组30例,同时选取健康体检者20例为对照组。分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定为巨噬细胞,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ATP结合盒受体A1(ATP-binding cassette receptor A1,ABCA1)、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的mRNA及蛋白表达。结果:HD、HDF 2组患者巨噬细胞中ABCA1 mRNA与蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),并且HDF组患者巨噬细胞ABCA1 mRNA与蛋白表达高于HD组(P<0.05)。HD、HDF 2组患者NF-κB mRNA与蛋白表达高于对照组(P<0.01,P<0.05),HDF组较HD组NF-κB mRNA与蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:维持透析患者巨噬细胞的胆固醇外流功能明显降低,这种下调与透析病人NF-κB的表达增加有关,透析滤过可以增加透析病人ABCA1的表达。

大鼠三叉神经节神经元ATP-激活电流的药理学特性

本实验应用全细胞膜片钳技术探讨了大鼠三叉神经节神经元ATP-激活电流的药理学特性。结果显示:(1)92.3%(60/65)的细胞对ATP敏感,有反应的细胞可记录到三种型式的ATP-激活电流:快速激活快速失活型(Fasttype,F型)、快速激活缓慢失活型(Intermediate type,I型)和缓慢激活缓慢失活型(Slow type,S型),三种电流均具有浓度依赖性。(2)动力学特征:三种类型的ATP激活电流上升相从10%到90%的时间:F型:33.6±4.5ms;I型:62.2±9.9ms;S型:302.1±62ms。去敏感相从10%到90%的时间:F型:399.4±58.2ms;S型:>500ms。(3)量-效关系:I型的量-效曲线居中间,F型的下移,S型的上移,三种类型电流的量-效曲线的EC50非常接近。(4)ATP受体的激动剂激活三种类型电流的效能顺序为:ATP>2-MeSATP>α,β-MeATP>UTP>ADP,其拮抗剂PPADS、RB-2和Suramin对这三种电流的拮抗作用基本相同。以上结果提示:三种型式的ATP-激活电流可能是由不同亚单位组合的P2X受体亚型所介导,不同的亚型介导的电流可能具有不同的功能。

不同初级感觉神经元ATP-激活电流的特征及意义

为探讨大鼠不同初级感觉神经元ATP-激活电流的电生理学特征及意义,本实验在新鲜分离的大鼠三种初级感觉神经元标本上,应用全细胞膜片钳技术记录,对外加ATP引起的膜电流的变化进行了研究。结果显示:(1)受检的细胞绝大多数对ATP敏感,外加ATP记录到内向电流,在背根神经节和三叉神经节神经元记录到三种形式的ATP-激活电流:快速激活快速失活型(fasttype,F型)、快速激活缓慢失活型(intermediatetype,I型)和缓慢激活缓慢失活型(slowtype,S型),但在结状神经节神经元主要记录到S型电流,三种形式的电流均具有浓度依赖性;(2)三种形式的ATP-激活电流上升相(risingphase,R)从10%至90%的时间(R10-90)有明显差异(P<0.05),去敏感相(desensitizingphase)从10%至90%的时间(D10-90)也有明显差异(P<0.05);(3)三种形式的电流EC50非常接近,I型的量-效曲线居中间,F型的下移,S型的上移;(4)小细胞的ATP-激活电流多表现为F型特征,大细胞多表现为S型特征,而中等大小的细胞多表现为I型特征,结状神经节神经元电流形式与细胞大小没有相关性。以上结果提示:躯体和内脏初级感觉神经元ATP-激活电流的类型可能与不同的感觉性质有关;不同形式的ATP激活电流可能由ATP受体的不同亚单位组成的各种亚型中介。

H^+对非洲爪蟾卵母细胞ATP-激活电流的调制作用

研究H+对非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP受体的调制作用。采用双极电压钳技术记录卵母细胞膜ATP受体介导的电流。实验检测的细胞全部对ATP敏感,应用pH为7.4的ATP(10-3mol/L)后引起一特征性电流,呈浓度依赖性。改用pH为6.5,6.0,5.5的ATP(10-3mol/L)后,电流幅值明显减弱。结果表明,pH值降低,可抑制ATP诱导的卵母细胞膜电流。

非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活电流I_(D2)成分的分析

在带有滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞标本上 ,应用双电极电压钳及胞内透析方法进行记录 ,外加 ATP所激活的内源性膜电流包括 3个成分依次为 :快内向电流 (early fast depolarizing current,ID1 ) ,慢内向电流 (lateslow depolarizing current,ID2 )和慢外向电流 (slow hygerpolarizing current,IH) .本文主要分析 ID2 成分的特性及其产生的机制 .结果如下 :(1)胞内透析 5 0 0 μmol/L GDP- β- S,5 0 min后被完全阻断 ;(2 )外液中 [Cl- ]从 10 0 mm ol/L 下降到 5 mm ol/L 时 ,在 ATP(10 0 μm ol/L)作用下 ,ID2 幅值随 [Cl- ]的下降明显增大 ;(3)外液中无 Na+时 ID2 幅值增高 (P<0 .0 5 ) .结果表明 :ID2 是由 P2 Y受体所介导 ,通过 G蛋白耦联及胞内信号转导而引起胞内 Ca2 +依赖性Cl- 外流所致 .

大鼠三叉神经节不同直径神经元ATP-激活电流的特征

目的：探讨大鼠三叉神经节不同直径神经元ATP-激活电流的特征。方法：应用全细胞膜片钳技术进行实验。结果：①92.3%（60/65）的细胞对ATP敏感,有反应的细胞可记录到三种型式的ATP-激活电流：快速激活快速失活型（Fast type,F型）、快速激活缓慢失活型（Intermediate type,I型）和缓慢激活缓慢失活型（Slowtype,S型）。三种电流均具有浓度依赖性。②小直径的细胞多表现为F型特征,大直径的细胞多表现为S型特征,而中等大小的细胞多表现为I型特征。③动力学特征：三种类型的ATP激活电流上升相从10%到90%的时间：F型：（33.6±4.5）ms;Ⅰ型：（62.2±9.9）ms;S型：（302.1±62）ms。去敏感相从10%到90%的时间：F型：（399.4±58.2）ms;S型：〉500ms。④I-V曲线：三种电流均表现为内向整流的特性,而且翻转电位均为0~5mV。⑤量-效关系：Ⅰ型的量-效曲线居中间,F型的下移,S型的上移,三种类型电流量-效曲线的EC50非常接近。结论：三种型式的ATP-激活电流可能是由不同亚单位组合的P2X受体各亚型所介导,这些亚型分布于不同大小的三叉神经节神经元,从而传导不同的信息。

NPA抑制大鼠DRG分离神经元ATP-激活电流

目的 本研究主要探讨多巴胺D2受体的选择性激动剂R(- ) -NPA对ATP -激活电流的调制。方法 在大鼠新鲜分离的DRG神经元标本上应用全细胞膜片钳技术 ,观察了NPA对ATP -激活电流的作用。结果 大部分受检细胞 (87.3% ,48/ 5 5 )对ATP敏感 ,10 -6～ 10 -3 mol/LATP可引起剂量依赖性呈明显去敏感的内向电流。在此45个细胞中 ,预加NPA可引起三类反应 :(1)外向电流 (6 .3% ,3/ 48) ;(2 )内向电流 (2 5 .0 % ,12 / 48)和 (3)无反应 (6 8.8% ,33/ 48)。与ATP -激活电流相比 ,NPA -激活电流幅值小 ,无明显去敏感现象。预加NPA 30～ 6 0s对ATP -激活电流的影响如下 :在 91.7% (4 4/ 48)的细胞产生抑制作用 ,其余的无明显作用 (8.3% ,4/ 48)。此种抑制作用与NPA本身是否引起或引起的是内向或外向电流无关。在浓度 10 -7～ 10 -5mol/L范围NPA对 10 -4 mol/LATP -激活电流的抑制作用依赖于NPA的浓度。胞内透析GDP - β -s上述抑制作用可完全被取消。 结论 NPA对ATP -激活电流的抑制作用可能是由于D2受体激活后经G蛋白偶联及相应胞内转导途径而使ATP受体磷酸化所致。

P2X_2和P2X_3受体在小鼠咽粘膜味蕾内的分布

应用免疫组织化学双标记技术研究ATP受体的P2X2和P2X3受体亚型在小鼠咽部粘膜味蕾和邻近组织内的分布,探究ATP在咽部味觉及一般感觉信号传导中的作用。在咽部各水平粘膜味蕾内均可观察到许多P2X2受体阳性味细胞和基细胞,未见P2X2受体阳性的神经纤维。许多降钙素基因相关肽(CGRP)阳性神经纤维围绕在味蕾周围,并发出分支与P2X2受体阳性味细胞和基细胞形成密切接触。P2X3受体多在咽部粘膜上皮味蕾内的神经终末表达,P2X3受体阳性纤维在粘膜基底部形成纤维束并与粘膜下P2X3受体阳性纤维相连,其分支在味蕾基底部形成神经丛,由神经丛发出神经终末到达顶部的味孔和味蕾各部,未见味蕾细胞表达P2X3受体。在无味蕾的粘膜上皮内,也观察到少量P2X3受体阳性神经终末。CGRP阳性纤维缠绕在味蕾周围,并发出分支与味蕾内的P2X3受体阳性纤维形成密切接触。上述结果表明ATP可能是咽粘膜内味觉信号感受与传导的神经递质。

P2z/P2x7受体检测的研究进展

P2z/P2x7嘌呤能受体是P2受体的一个亚型 ,存在于多种细胞膜上 ,有其特异的激动剂和拮抗剂。P2z/P2x7受体功能独特 ,如参与炎症和免疫反应 ,介导细胞死亡等。检测P2z/P2x7受体的方法很多 ,包括荧光染料法、分子生物学方法及免疫学方法等。其分析方法与原理各不相同 ,特点各异。本文将对检测P2z/P2x7受体的方法及其研究进展予以综述。

大鼠舌咽和迷走神经感觉神经节内P2X_2、P2X_3受体与calretinin和IB4结合位点的共存

应用免疫组织化学荧光三标方法结合激光共聚焦显微镜技术研究了大鼠舌咽和神经迷走神经感觉神经节内ATP受体P2X2、P2X3与calretinin、植物凝集素(IB4)结合位点的共存。结果显示:舌咽和迷走神经感觉神经节内可见大量P2X2、P2X3阳性的神经元胞体和纤维,P2X2受体阳性细胞多为大、中、小型神经元,P2X3阳性细胞多为中、小型神经元;可见较多的P2X2/IB4及P2X3/IB4双标神经元。有(91.1±4.7)%(结状神经节)、(78.8±2.4)%(岩神经节)、(76.8±2.7)%(颈静脉神经节)为P2X2阳性细胞;(77.0±3.2)%(结状神经节)、(91.2±3.9)%(岩神经节)、(78.4±3.6)%(颈静脉神经节)的P2X3阳性细胞结合IB4;有8.9±1.6%(结状神经节)、7.7±1.4%(岩神经节)、9.1±1.1%(颈静脉神经节)的P2X2阳性细胞呈calretinin阳性;三神经节内均观察到少量P2X2/calretinin/IB4三标细胞。P2X3/calretinin双标或P2X3/calretinin/IB4三标神经元数量较少。这些结果提示,舌咽和迷走神经感觉神经节内ATP受体P2X2、P2X3与IB4结合位点存在广泛的共存,部分P2X2受体与calretinin存在着共存。

非洲爪蟾卵母细胞内源性ATP激活外向电流的分析

应用双电极电压钳记录及胞内透析方法对非洲爪蟾卵母细胞内源性 ATP激活外向电流进行了分析。结果表明 ,ATP电流的 H成份仍为 K+外流所致 ,而其胞内机制也有 PKC参与。

肠神经系统P2受体的分布和特性

肠神经系统由肠道肌间神经丛和黏膜下神经丛组成,肌间神经丛主要控制肠道的运动,黏膜下神经丛主要调节胃肠分泌和局部血流。二者都存在P2(ATP)受体,它们在生理和病理情况下介导不同的效应。本文主要就目前已知的肠神经系统内P2受体的分布、作用及特性作一综述,为进一步探讨P2受体在肠道疾病诊治中的作用提供依据。

P2X4Rs在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及炎症反应中的作用

P2X4受体（P2X4 receptor，P2X4R，P2X4Rs）是ATP受体（P2-purinoceptors，P2）的一个亚型，广泛分布在中枢神经系统，其中脑内主要分布于海马、嗅球及大脑皮层等。研究发现脑缺血缺氧情况下，损伤后的神经元释放ATP至胞外，激活其配体门控性通道P2X受体，进一步激活小胶质细胞，而过度活化的小胶质细胞可释放一氧化氮合酶、促炎因子等物质介导炎症反应进一步损伤神经元，而阻断小胶质细胞的过度活化可减少炎症因子的释放，降低缺血导致的神经损伤。因此抑制小胶质细胞的过度活化、调控小胶质细胞表面或细胞内表达的受体或蛋白分子、拮抗小胶质细胞产生的神经毒性因子、促进小胶质细胞分泌神经保护性物质、阻断小胶质细胞介导的炎症反应等成为脑缺血治疗的新思路。本文对P2X4受体在脑缺血性损伤后小胶质细胞活化及其介导炎症反应中的作用作一综述。